肖杰，柴軍紅，楊春文，何婷婷，許麗穎

(牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江牡丹江157011)

不同產(chǎn)地瓦松活性成分初步研究

肖杰，柴軍紅，楊春文，何婷婷，許麗穎

(牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江牡丹江157011)

目的：討論不同產(chǎn)地瓦松提取物活性成分差異，以期為瓦松應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。方法：采用系統(tǒng)化學(xué)檢測(cè)法研究瓦松水提物及醇提取物成分差異；采用HPLC法，對(duì)水提物正丁醇萃取相進(jìn)行了討論，研究其差異。結(jié)果：不同產(chǎn)地瓦松水提物及醇提物存在一定差異。結(jié)論：相對(duì)來(lái)說(shuō)遼寧、黑龍江所產(chǎn)瓦松活性成分較為豐富，相對(duì)含量較高。

瓦松；活性成分

瓦松 (OrostachysFisch)是景天科的瓦松屬，全草入藥，具有清熱解毒、止血、利濕、消腫的功效、用于吐血、痔瘡、濕疹、血痢、瘧疾等癥狀[1-2]。2005版藥典首次收錄。主要成分是黃酮類(lèi)、有機(jī)酸、萜類(lèi)、氨基酸[2-4]等。現(xiàn)階段相對(duì)研究較少，主要集中在相關(guān)中藥制劑、抑菌、降糖等方面，但對(duì)于不同產(chǎn)地瓦松屬植物活性成分差異研究相對(duì)較少。

本文以黑龍江、遼寧、甘肅、河北所產(chǎn)瓦松屬植物瓦松[5](經(jīng)牡丹江師范學(xué)院于爽副教授鑒定分別為狼爪瓦松、瓦松、黃花瓦松、塔花瓦松。標(biāo)本現(xiàn)存于牡丹江師范學(xué)院-生科院標(biāo)本室，后面研究以地方為代稱(chēng))為對(duì)象，采用系統(tǒng)化學(xué)檢測(cè)及HPLC研究化學(xué)成分變化，希望為瓦松屬植物開(kāi)發(fā)利用、活性成分提取純化提供一些理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

正丁醇(AR)，石油醚(AR)，山柰素(貴州迪大生物技術(shù)公司)，香草醛(AR，遼寧世星藥化)高氯酸(AR)氫氧化鈉(AR)，硫酸銅(AR)，乙醇(AR)，硫酸(AR)，三氯化鐵(AR)，硅鎢酸(AR)，鞣酸(AR)，醋酐(AR)，溴酚蘭(AR)，過(guò)氧化氫(AR)，乙酸乙酯 (AR)磷酸(AR),色譜級(jí)甲醇等。

1.2 主要儀器

HH-6恒溫水浴鍋(常州華奧)，F(xiàn)Z102植物粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器公司)，UV-2010紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日立)，BS214D電子天平(德國(guó)賽多利斯)，RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮)，索氏提取裝置；高效液相色譜儀(美國(guó)Waters)；PAD紫外吸收檢測(cè)器；超聲波清洗器；離心機(jī)(美國(guó)貝克曼)等。

1.3 原料的預(yù)處理及預(yù)試溶液的制備

把黑龍江、遼寧、甘肅、河北各地的瓦松全草用粉碎機(jī)打成粉狀，過(guò)30～40目篩，備用。

水提取液的制備：分別稱(chēng)取不同產(chǎn)地的瓦松的干粉100g，加入1000mL蒸餾水，90℃下水浴提取2h，過(guò)濾，適當(dāng)濃縮用于測(cè)定氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、皂苷、酚類(lèi)等成分。

乙醇提取液的制備：分別稱(chēng)取不同產(chǎn)地瓦松的干粉30g，加入300mL 75%乙醇，水浴回流提取2h，過(guò)濾，用于測(cè)定有機(jī)酸、生物堿、酚類(lèi)和鞣質(zhì)、黃酮、萜等成分。

同上醇提法，乙醇濃度為95%，將其提取液濃縮至原體積1/10,依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取溶劑，濃縮、干燥備用，本文主要對(duì)正丁醇萃取相進(jìn)行討論。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(C18)；

流動(dòng)相：以甲醇-0.5%磷酸溶液(43∶57)；

檢測(cè)器：PDA(200～400nm全波長(zhǎng)掃描)；

柱溫：30℃；進(jìn)樣量：waters2696E自動(dòng)進(jìn)樣器 5～10μL 。

2 結(jié)果與討論

2.1 水提取液檢測(cè)結(jié)果

如表1所示：以上不同產(chǎn)地瓦松中活性成分存在差異，對(duì)于黑龍江及甘肅瓦松其中氨基酸蛋白物質(zhì)，含量相對(duì)是較低(進(jìn)一步采用考馬斯亮蘭G-250驗(yàn)證顯陽(yáng)性)。所有瓦松中醇提物加熱沉淀顯示應(yīng)為鞣制或其它成分(可能為相對(duì)溶解度低的糖苷類(lèi))。相對(duì)于酚類(lèi)，由于均含有黃酮類(lèi)所以基本顯示陽(yáng)性。由于瓦松大多含有草酸、沒(méi)食子酸等，這與文獻(xiàn)[5-7]結(jié)果一致。皂苷、甾類(lèi)、萜類(lèi)是瓦松主要活性成分之一，預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，甘肅、河北產(chǎn)瓦松在此存在差異，部分顯陰性，表明在苷元含量或種類(lèi)可能存在差異，這也與楊林[8]課題組研究的部分結(jié)果相似。河北瓦松在甾類(lèi)上明顯存在差異，筆者通過(guò)對(duì)購(gòu)買(mǎi)的3個(gè)批次，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，不同批次差異明顯，其中6～7月份河北所產(chǎn)瓦松甾類(lèi)，顯示陽(yáng)性反應(yīng)、其它月份不明顯。所以筆者認(rèn)為這與采摘季節(jié)可能有關(guān)系，進(jìn)一步可以開(kāi)展相關(guān)研究。同時(shí)進(jìn)行Keller-Kiliani(K-K)反應(yīng)發(fā)現(xiàn)，黑龍江及遼寧瓦松顯示陽(yáng)性反應(yīng)，初步判斷可能含有強(qiáng)心苷成分。對(duì)于蒽醌類(lèi)堿液反應(yīng)陽(yáng)性，醋酸鎂反應(yīng)均陰性，表明可能含有蒽醌類(lèi)。生物堿反應(yīng)表明以上只有黑龍江瓦松可能含有生物堿。碘-碘化鉀氧化反應(yīng)顯示可能與其含有的黃酮、酚類(lèi)有關(guān)系。香豆素、內(nèi)酯研究表明,黑龍江、遼寧正反應(yīng)明顯，顯示含有相關(guān)物質(zhì)，河北、甘肅相對(duì)不是很明顯，單一實(shí)驗(yàn)表明可能含有。以上存在差異，表明亞種之間成分存在差異。

表1 化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試結(jié)果

注：“+”陽(yáng)性反應(yīng)；“-”陰性反應(yīng)。

2.2 萃取相HPLC法研究

依據(jù)1.3提取方法，得到的萃取相，置于恒溫水浴鍋中，揮發(fā)正丁醇至干，色譜甲醇進(jìn)行溶解，12000 r /min下離心10min，取其上清液并定容，即得。

圖1 遼寧瓦松的液相色譜圖

圖2 河北瓦松的液相色譜圖

圖3 黑龍江瓦松的液相色譜圖

圖4 甘肅瓦松的液相色譜圖

由圖1～4所示，其正丁醇萃取相中黑龍江和甘

肅瓦松具有顯著相似性，相對(duì)來(lái)說(shuō)河北瓦松在相同條件下，相對(duì)以上主體成分Ⅰ、Ⅱ含量差異明顯，遼寧瓦松成分與黑龍江及甘肅瓦松在色譜圖中存在差異。為了進(jìn)一步研究成分差異，采用鹽酸水解反應(yīng)，研究表明，以上成分主體為山奈素、異槲皮素及齊墩果酸類(lèi)物質(zhì)。這與藥典表述基本吻合，但是成分之間含量、種類(lèi)有差異，所以，下一步有必要對(duì)其成分進(jìn)行細(xì)化研究，有必要對(duì)萃取相展開(kāi)相關(guān)液相指紋圖研究。

3 結(jié)論

綜上所述，不同亞種瓦松成分存在較明顯差異，初步研究表明：就成分種類(lèi)而言，黑龍江、遼寧所產(chǎn)瓦松成分相對(duì)復(fù)雜，河北瓦松成分種類(lèi)相對(duì)較少，黑龍江瓦松中發(fā)現(xiàn)可能含有強(qiáng)心苷成分。進(jìn)一步可以開(kāi)展相關(guān)研究。其液相實(shí)驗(yàn)表明:不同亞種萃取相存在明顯差異，所以有必要依照相關(guān)企業(yè)應(yīng)用工藝，開(kāi)展其萃取相指紋圖研究，進(jìn)一步提高瓦松應(yīng)用的科學(xué)性。

[1]左春旭,李鳳琴.幾種天然藥物的研究開(kāi)發(fā)[J].中草藥,1996,27：202-205.

[2]鄭艷,鞏劼,陳士超，等. 瓦松的形態(tài)解剖學(xué)研究[J].植物研究，2003, 23(2)：164.

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Optimization of Extraction Process for Active Components from FimbriationOrostachysHerb

Xiao Jie, Chai Junhong, Yang Chunwen , He Tingting, Xu Liying

(School of Life Science and Technology，Mudanjiang normal university, Mudanjiang 157011)

Objective： Active components from FimbriationOrostachysHerb in different areas are discussed. To provided the theoretical basis for the application development.Methods: using the method of chemical system analysis, Study on Differences of the active ingredients between alcohol extract and aqueous extract. Butanol phase of aqueous extract was discussed by HPLC.Results: there are some differences in the Active components from FimbriationOrostachysHerb in different areas. Conclusion: The active components from FimbriationOrostachysHerb of the Liaoning，Heilongjiang is more abundant, relatively high levels.

OrostachysHerb；Active components

2013-04-08

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究面上項(xiàng)目(11551514)

肖杰(1963-)，男，碩士，教授，主要研究方向?yàn)橹参飳W(xué)，E-mail:swxxj@126.com。

R931.6

A

doi.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.01.010