国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

CK-19與GPC-3聯合檢測在肝細胞癌和膽管細胞癌診斷中的價值

2015-02-24 02:02宋微珩蓋趙輝董鑫姜淼孫麗敏
肝臟 2015年3期
關鍵詞:緩沖液膽管肝細胞

宋微珩 蓋趙輝 董鑫 姜淼 孫麗敏

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)是一種癌胚蛋白,主要在發(fā)育期間主導細胞形態(tài)形成及生長[1]。GPC-3上的糖基磷脂酰肌醇通過結合細胞膜的方式,控制細胞生長以及細胞分化。在胚胎發(fā)育期間,GPC-3蛋白表達具有較強的器官組織特異性和分化特異性,其中肝實質細胞在整個孕期有較高的GPC-3蛋白表達,而當嬰兒從母體分離后,GPC-3在肝實質細胞則無明顯表達[2]。近年來,有報道稱細胞角蛋白19(CK-19)是膽管上皮的標志物之一,在膽管上皮細胞有較明顯的表達[3]。目前,醫(yī)學界尚無足夠數據證明CK-19可作為診斷某一類腫瘤的特異性指標,但對腫瘤鑒別具有一定的參考價值[4]。因此,本研究通過聯合檢測GPC-3和CK-19在肝細胞癌和肝內膽管細胞癌表達水平,并分析兩者與腫瘤分化程度的關系,探討GPC-3和CK-19在診斷和鑒別肝細胞癌和肝內膽管細胞癌的價值?,F報道如下。

資料和方法

一、一般資料

選取大慶油田總院病理科2011年1月至2013年3月行肝穿刺及外科手術切除的肝癌組織157例,其中肝細胞癌組織85例,膽管細胞癌組織72例。肝細胞癌中男58例,女17例,年齡26-85歲,平均年齡(57.65±15.84)歲,中低分化組織69例,高分化組織16例。膽管細胞癌中男58例,女17例,年齡26~85歲,平均年齡(57.65±15.84)歲,中低分化組織59例,高分化組織13例。兩種癌組織在年齡、性別比例、分化程度比較中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),一般資料具有可比性。

二、材料

鼠抗人GPC-3、CK-19購自福建邁新公司,免疫組化SP試劑盒購自北京中山金橋生物技術有限公司。

三、方法

所有標本經10%的甲醛固定,脫水、浸蠟、包埋,4um厚度連續(xù)切片。隨后進行蘇木素-伊紅(HE)染色。染色完畢后進行烤片、脫蠟,并放置于乙醇溶液。加入3%H2O2溶液靜置5分鐘。采用PBS緩沖液浸泡3次,每次5分鐘。放入PH6.0的檸檬酸緩沖液高壓高溫修復。修復后,置于水中冷卻至37℃,再次采用PBS緩沖液沖洗3次。加入鼠抗人GPC-3,置于4℃冰箱過夜,PBS緩沖液沖洗3次,37℃下加入二抗PV6 000 10分鐘,PBS緩沖液沖洗3次。然后進行DAB顯色,終止染色,脫水,并加入二甲苯,封片。最后置于顯微鏡下觀察,GPC-3陽性表達信號為黃色或棕黃色。CK-9免疫組化染色步驟與GPC-3基本一致,唯一區(qū)別就是CK-19進行高壓高溫修復后,先在37℃下采用胃酶消化1分鐘,隨后步驟與GPC-3一致。CK-19陽性表達信號為黃色或棕黃色。

四、統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0進行數據分析,計數資料采用百分比的形式表示,組間比較采用卡方檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、GPC-3、CK-19在肝細胞癌、膽管細胞癌及癌旁正常組織中的表達

在GPC-3免疫組化檢測中,肝細胞癌組織中檢測出75例陽性,陽性表達率高達88.24%,而膽管細胞癌組織中僅有11例表達陽性,陽性表達率為15.28%,兩種組織陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在CK-19免疫組化檢測中,肝細胞癌表達均為陰性,膽管細胞癌組織卻呈現高陽性表達,表達率為94.44%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

圖1 A.GPC-3在肝細胞癌中的陽性表達;B.CK-19在膽管細胞癌中的陽性表達

表1 GPC-3、CK-19在肝細胞癌、膽管細胞癌及癌旁正常組織中的表達(例)

二、GPC-3與肝細胞癌腫瘤分化程度的關系

在肝細胞癌中,GPC-3在中低分化組織中的陽性檢出率為97.10%,明顯高于高分化組織陽性檢出率的50.00%,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

表2 GPC-3與肝細胞癌腫瘤分化程度的關系(例)

三、CK-19與膽管細胞癌腫瘤分化程度的關系

在膽管細胞癌中,CK-19在中低分化組織中的陽性檢出率為100.00%,明顯高于高分化組織陽性檢出率的69.23%,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

表3 CK-19與膽管細胞癌腫瘤分化程度的關系(例)

討 論

肝癌是指發(fā)生于肝臟的原發(fā)性惡性腫瘤和轉移性惡性腫瘤,根據形態(tài)學及細胞遺傳學對肝癌的定義,肝癌主要分為3種,分別為肝細胞癌、膽管細胞癌以及肝細胞癌合并膽管細胞癌[5]。肝細胞癌和膽管細胞癌最為常見,也最難區(qū)分[6]。近年來,GPC-3作為肝癌標志物被廣泛報道。據金光植研究[7]顯示,GPC-3在肝癌組織呈高表達,而在癌旁正常組織基本無表達。而國外學者Di Tommaso L等[8]研究結果進一步表明,GPC-3對于肝癌診斷的敏感度為69%,特異度為91%,甚至在AFP為陰性的肝癌患者中,GPC-3蛋白也呈較高的表達。本研究中,GPC-3在肝細胞癌組織的陽性表達率高達88.24%,明顯高于膽管細胞癌的15.28%,實驗結果與上述研究一致。GPC-3在肝細胞癌呈高表達,在膽管細胞癌呈低表達,其可能的原因為:肝癌祖細胞逐漸向肝癌細胞轉化,少數 GPC-3在膽管來源的細胞中表達[9]。而GPC-3在中低分化的肝細胞癌組織中的陽性表達率明顯高于高分化的肝細胞癌組織,這提示了GPC-3在肝細胞癌陽性表達與腫瘤的惡性程度有關,可作為早期診斷和判斷預后的指標之一。

Jain R等研究[11]指出CK-19是膽管上皮的標志物,CK-19可表達于增生性的膽管上皮、良性膽管細胞瘤及膽管細胞癌中。本研究還發(fā)現CK-19在大部分的膽管細胞癌組織中呈陽性表達,但在肝細胞癌中卻均呈陰性。這點與Jain R等研究相符合。CK-19屬于膽管細胞型細胞角質素,僅在膽管上皮來源的細胞中表達[12]。因此,筆者推測高表達的CK-19肝癌患者屬于膽管細胞癌的可能性較大。而CK-19在中低分化的膽管細胞癌組織中的陽性檢出率明顯高于高分化組織,進一步提示了CK-19在膽管細胞癌中的陽性表達與膽管細胞癌侵襲性有關。這與張世杰[13]報道的低分化膽管細胞癌與高分化膽管細胞癌相比,CK-19甚少在高分化膽管細胞癌表達一致。因此,CK19表達可作為早期肝癌復發(fā)的診斷指標,對肝癌預后情況判斷有參考價值。

綜上所述,GPC-3在肝細胞癌中呈現高表達,而CK-19僅在膽管細胞癌表達,聯合檢測CK-19與GPC-3對鑒別診斷肝細胞癌和膽管細胞癌有參考價值。

1 范欽橋,陳書偉,陳小雪,等.GPC-3 mRNA與GGT聯合檢測診斷AFP陰性原發(fā)性肝細胞肝癌.中國普通外科雜志,2013,22:59-62.

2 Yao M,Yao DF,Bian YZ,et al.Oncofetal antigen glypican-3 as a promising early diagnostic marker for hepatocellular carcinoma.Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2011,10:289-294.

3 Nakano K,Orita T,Nezu J,et al.Anti-glypican 3 antibodies cause ADCC against human hepatocellular carcinoma cells.Biochem Biophys Res Commun,2009,378:279-284.

4 姚敏,楊君伶,蔚丹丹,等.sICAM-1和GPC-3 mRNA對肝癌診斷與轉移監(jiān)測的臨床價值.世界華人消化雜志,2012,20:1927-1932.

5 Yan D,He Q,Chen Y,et al.Detection ofα-fetoprotein and glypican-3 mRNAs in the peripheral blood of hepatocellular carcinoma patients by using multiple FQ-RT-PCR.J Clin Lab Anal,2011,25:113-117.

6 Di Tommaso L,Franchi G,Park Y N,et al.Diagnostic value of HSP70,glypican3,and glutamine synthetase in hepatocellular nodules in cirrhosis.Hepatology,2007,45:725-734.

7 金光植,顧怡瑾,喻昊,等.AKR1B10聯合GPC-3在肝細胞癌免疫組化診斷中的應用.第二軍醫(yī)大學學報,2012,33:625-628.

8 Wang ZS,Wu LQ,Yi X,et al.CK19 can be used to predict the early recurrence and prognosis of HBV-related hepatocellular carcinoma patients with low AFP serum concentration after R0 radical hepatectomy.Zhonghua Zhong Liu Za Zhi,2012,34:753-758.

9 王為東,李玉軍.肝細胞肝癌中端粒酶、p53和CK19的表達及意義.臨床與實驗病理學雜志,2012,28:862-866.

10 張珍妮,匡志鵬,楊帆,等.肝癌干細胞表面標志物CK19在化學誘癌過程中的差異表達.腫瘤防治研究,2012,39:1188-1192.

11 Jain R,Fischer S,Serra S,et al.The use of Cytokeratin 19(CK19)immunohistochemistry in lesions of the pancreas,gastrointestinal tract,andliver.Appl Immunohistochem Mol Morphol,2010,18:9-15.

12 Bioulac-Sage P,Balabaud C.Perinodular CK19 loss in hepatocarcinogenesis.Clin Res Hepatol Gastroenterol,2011,35:783-785.

13 張世杰,郎振為,王欣欣,等.聯合應用磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)和細胞角蛋白-19(CK-19)免疫組化檢測在肝細胞肝癌診斷和鑒別診斷中的價值.首都醫(yī)科大學學報,2011,32:653-657.

猜你喜歡
緩沖液膽管肝細胞
肝臟脾植入誤診為肝細胞癌1例
肝吸蟲感染致膽管損傷及膽管癌的相關研究進展
肝內膽管結石一例及診斷體會
外泌體miRNA在肝細胞癌中的研究進展
血清蛋白醋酸纖維膜電泳緩沖液的篩選
新型醋酸纖維素薄膜電泳緩沖液的研究
卵磷脂/果膠鋅凝膠球在3種緩沖液中的釋放行為
肝細胞程序性壞死的研究進展
肝細胞癌診斷中CT灌注成像的應用探析
肝內膽管結石的外科治療進展