舒金富，羅紅梅

衢州市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 衢州 324000

丹參酮ⅡA原料藥中有機(jī)溶劑殘留量氣相色譜法測定

舒金富，羅紅梅

衢州市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 衢州 324000

目的：采用氣相色譜法測定丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的殘留量。方法：采用Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱，以DMF作為溶劑，程序升溫測定3種有機(jī)溶劑的殘留量。結(jié)果：乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的檢測濃度線性范圍分別2.0～400.0 μg/mL（γ=0.9998），2.0～390.0 μg/mL（γ=0.9993），2.0～50.0 μg/mL（γ=0.9992）；平均回收率分別為100.1%，98.1%，97.7%；檢測限分別為0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限為0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。結(jié)論：氣相色譜法簡便、專屬性強(qiáng)，能準(zhǔn)確可靠地檢測出丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機(jī)溶劑的殘留量，適合用于丹參酮ⅡA原料藥中溶劑殘留量的測定。

丹參酮ⅡA；殘留溶劑；氣相色譜法

丹參酮ⅡA為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根莖，具有擴(kuò)張冠狀動脈、增加冠脈血流量、改善心肌收縮力、促進(jìn)心肌再生、抑制內(nèi)源性膽固醇的合成等作用，臨床常用于治療冠心病、心絞痛、心律過速等［1］。藥物生產(chǎn)過程中往往會使用有機(jī)溶劑，其殘留量對人體均具有不同程度的毒性且會影響藥物的穩(wěn)定性［2］。丹參酮ⅡA原料藥在生產(chǎn)時往往會使用乙醇、乙酸乙酯及二氯甲烷等有機(jī)溶劑，在《中華人民共和國藥典》2010年版中這些有機(jī)溶劑均為需檢查種類。為了保證用藥安全，控制產(chǎn)品的質(zhì)量，本研究采用氣相色譜對上述3種有機(jī)溶劑的殘留量進(jìn)行了檢測，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1材料與試劑實(shí)驗(yàn)儀器為Agilent7890A氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）；Mettler XP205型電子天平。丹參酮ⅡA（TanⅡA，自制）；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2色譜條件色譜柱：Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30 m× 0.324 mm×1.80 μm）；柱溫：初始溫度為40℃，以5℃/min的速度升至80℃，保持1 min后，再以50℃/min的速度升溫至220℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；載氣：氮?dú)?；流速?.0 mL/min；進(jìn)樣量：2 mL；分流比：12∶1。

1.3溶液的制備對照品溶液：精密稱取異丙醇適量，加入DMF溶解并稀釋成為濃度為2000 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液；精密稱取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷適量，加入DMF分別制成4000 μg/mL、4000 μg/mL、2000 μg/mL的對照品貯備液。精密移取貯備液適量于20 mL量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，以DMF將乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷濃度分別稀釋成為250 μg/mL、250 μg/mL、30 μg/mL的混合對照品樣品溶液；精密稱取丹參酮ⅡA0.5 g，置于10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，再用DMF稀釋至刻度，放至室溫，加DMF進(jìn)行定容，得到50000 μg/mL的混懸液，過濾取上清即為樣品溶液。

2　結(jié)果

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)見圖1。移取對照品溶液按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，各相鄰色譜峰的分離度均大于2，理論板數(shù)均不低于11000，系統(tǒng)適用性較好。

2.2線性關(guān)系試驗(yàn)見表1。精密移取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷對照品混合溶液各2 mL進(jìn)樣，測得峰面積，以對照品峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積（y）對對照品溶液濃度（x）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3精密度試驗(yàn)取混合對照品溶液2 mL，重復(fù)檢測6次，計算可得出乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.5%、2.2%及2.6%，各溶劑峰面積的RSD均小于5%（n=6），表明精密度較好。

2.4檢測限和定量限試驗(yàn)分別取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷對照貯備液，用DMF稀釋溶解后進(jìn)樣，以S/N=3計算檢測限，以S/N=10計算定量限。結(jié)果乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的檢測限分別為0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限分別為0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。

2.5回收率試驗(yàn)見表2。稱取已知溶劑殘留量的樣品0.25 g，置于10 mL量瓶中，精密移取對照品貯備液，分別加入高、中、低3種濃度的對照品貯備液（相當(dāng)于各溶劑限度80%、100%、120%）各3份，加入1 mL內(nèi)標(biāo)液，用DMF稀釋，根據(jù)峰面積計算回收率及RSD。測得3種溶劑的平均回收率為97.7%～100.1%；RSD為0.67%～1.29%，均小于5%（n=3）。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取對照品溶液，室溫下放置0、2、4、8、12 h后分別進(jìn)樣檢測，測得乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在12 h的峰面積RSD分別為3.4%、2.1%、3.2%（n=3），表明本溶液在室溫放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7樣品的測定精密量取混合對照品溶液和樣品溶液各2 mL，記錄色譜圖，以峰面積計算樣品中殘留溶劑的含量，樣品中未檢出乙醇，乙酸乙酯的殘留量分別為0.020%、0.022%、0.021%，二氯甲烷的殘留量分別為 0.011%、0.008%、0.012%，殘留量均＜0.03%。

3　討論

3.1溶劑的選擇氣相色譜的常用溶劑有水、DMF、乙醇、DMSO（二甲基亞砜）等，丹參酮ⅡA易溶于氯仿，在其他常見的有機(jī)溶劑中溶解度較差［3］。但選用氯仿作為溶劑，其溶劑峰會對二氯甲烷的檢出造成干擾；以DMF作用溶劑，大部分樣品均可溶解，且不干擾其他組分的檢出，同時采用超聲的方式釋放出殘留溶劑，過濾后取濾液作為檢測液［4］。對濾渣進(jìn)行二次處理，試驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)二次處理后，有機(jī)溶劑殘留量均低于檢出限，說明采用DMF作為溶劑測定效果良好。

3.2內(nèi)標(biāo)物的選擇采用內(nèi)標(biāo)法有機(jī)溶劑的含量進(jìn)行測定，可有效減少各種誤差（包括儀器誤差及操作誤差）的出現(xiàn)［5］。內(nèi)標(biāo)物應(yīng)滿足以下要求：試樣中不含有該物質(zhì)；與被測組分性質(zhì)比較接近；不會與試樣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；出峰位置位于被沒組分附近，且無組分峰影響［6～7］。本實(shí)驗(yàn)中選擇異丙醇作為內(nèi)標(biāo)物，可以和3種待測溶劑進(jìn)行有效分離，且在分析中無峰出現(xiàn)，不造成干擾，經(jīng)驗(yàn)證效果滿意。

3.3色譜柱的選擇由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種溶劑的極性存在不同程度的差異，在最初采用DB-5MS氣相色譜柱時，分離度較低，峰型并不理想；在嘗試用中等極性的色譜柱Agilent DB-624時，3種有機(jī)溶劑和內(nèi)標(biāo)液間分離度均大于2，且峰型較好，表明采用該色譜柱能將3種有機(jī)溶劑進(jìn)行有效分離。

3.4溫度的選擇由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種溶劑和DMF之間沸點(diǎn)存在較大差異，對于寬沸程樣品應(yīng)采用程序升溫［8］。使柱溫按照一定的程序進(jìn)行升溫，低沸點(diǎn)的組分在較低溫度下分離，高沸點(diǎn)組分在較高溫度下分離，能較快地去除溶劑DMF，縮短分析時間，峰形理想，達(dá)到最佳的分離效果。

3.5進(jìn)樣方式的選擇本研究采用頂空進(jìn)樣法測定3種有機(jī)溶劑的殘留量。頂空氣相色譜法（HS-GC）又稱液上氣相色譜分析，是一種聯(lián)合操作技術(shù)。頂空色譜進(jìn)樣器可與國內(nèi)外各種氣相色譜儀相連接，它將液體或固體樣品中的揮發(fā)性組分直接導(dǎo)入氣相色譜儀進(jìn)行分離和檢測［9］。相比于經(jīng)典氣相色譜法，頂空進(jìn)樣法可以有效避免樣品對色譜柱的污染以及樣品基質(zhì)對檢測結(jié)果的干擾［10］。

丹參酮ⅡA原料藥是一種廣泛應(yīng)用于治療心血管病的中成藥制劑，但關(guān)于其殘留溶劑的實(shí)驗(yàn)研究，國內(nèi)外則少有報道。本研究根據(jù)人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會（ICH）的要求以及2010年版《中華人民共和國藥典》中的相關(guān)規(guī)定，選用DMF作為試驗(yàn)的溶解介質(zhì)，對樣品有很好的溶解性，且對待測組分無干擾；采用氣相色譜法對丹參酮ⅡA原料藥中的乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機(jī)溶劑的殘留量進(jìn)行了測定。經(jīng)驗(yàn)證，此實(shí)驗(yàn)方法在線性、定量限、檢測限、精密度、穩(wěn)定性、回收率等系統(tǒng)適用性方面均表現(xiàn)良好，且具有方法簡便、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。因此頂空氣相色譜法能夠準(zhǔn)確可靠地檢測出丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機(jī)溶劑的殘留量，為修訂藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，對于用藥安全和藥品質(zhì)量保障都具有重要意義。

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（責(zé)任編輯：駱歡歡）

R284.2

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0256-7415（2015）03-0239-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.03.115

2014-10-05

舒金富（1969-），男，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作。