何玉嬋，周思瑤，唐榮芳，農(nóng)慶偉，蔣端鳳，王曉桃

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·論著·

小白菊內(nèi)酯干預(yù)骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)Jurkat細(xì)胞黏附作用的影響及其機(jī)制研究

何玉嬋，周思瑤，唐榮芳，農(nóng)慶偉，蔣端鳳，王曉桃

目的 探討急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)對(duì)Jurkat細(xì)胞的黏附作用及小白菊內(nèi)酯(PTL)對(duì)此作用的干預(yù)機(jī)制。方法 采集2013年10月—2014年3月于桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院經(jīng)FAB分型及MICM分型確診為ALL并經(jīng)治療后緩解的6例患者髂后上棘骨髓液，體外分離培養(yǎng)BMSCs。Jurkat細(xì)胞復(fù)蘇后傳代培養(yǎng)，取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，建立BMSCs與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)模型。設(shè)置Jurkat細(xì)胞組、BMSCs組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 4 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 8 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 12 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 16 μmol/L 組。黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)共培養(yǎng)24 h和48 h后各組黏附率，ELISA測(cè)定各組可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1(sVCAM-1)表達(dá)水平，RT-PCR法檢測(cè)BMSCs VCAM-1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 各組培養(yǎng)24 h和48 h后，黏附率與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.95、-0.91，P<0.05)。各組sVCAM-1表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 4 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 8 μmol/L組和BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 12 μmol/L組sVCAM-1表達(dá)水平高于BMSCs組(P<0.05)，各加入PTL組sVCAM-1表達(dá)水平低于BMSCs+Jurkat細(xì)胞組(P<0.05)，各加入PTL組sVCAM-1表達(dá)水平與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.994,P=0.001)。各組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，BMSCs組與BMSCs+Jurkat細(xì)胞+ PTL 16 μmol/L組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各加入PTL組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.994,P=0.001)。結(jié)論 PTL可以通過降低VCAM-1的表達(dá)抑制BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的黏附，減弱骨髓微環(huán)境對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用。

Jurkat細(xì)胞；小白菊內(nèi)酯；骨髓基質(zhì)細(xì)胞；黏附；VCAM-1；前體細(xì)胞淋巴母細(xì)胞白血病淋巴瘤

何玉嬋，周思瑤，唐榮芳，等.小白菊內(nèi)酯干預(yù)骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)Jurkat細(xì)胞黏附作用的影響及其機(jī)制研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(5)：535-539.[www.chinagp.net]

He YC，Zhou SY,Tang RF,et al.Parthenolide intervenes the adhesion of BMSCs to Jurkat cells and its possible mechanism[J].Chinese General Practice，2015，18(5)：535-539.

骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)是造血微環(huán)境中的主要成分，主要包括成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞 、巨噬細(xì)胞等，其分泌的細(xì)胞因子、黏附分子、細(xì)胞外基質(zhì)等形成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，在細(xì)胞間信號(hào)傳遞過程中發(fā)揮重要作用。有研究表明，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者骨髓微環(huán)境中存在細(xì)胞因子、黏附分子的異常表達(dá)，影響骨髓基質(zhì)對(duì)白血病細(xì)胞的黏附和遷移，從而對(duì)白血病細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用[1]。鑒于此，對(duì)骨髓微環(huán)境與白血病細(xì)胞的相互作用施加干預(yù)可能是治療ALL的新策略。野生菊的有效活性成分小白菊內(nèi)酯(PTL)已被證實(shí)在體外具有抗腫瘤作用，本研究的前期實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)PTL能抑制Jurkat細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，且可加強(qiáng)其他化療藥物的作用[2]。PTL是否能影響ALL患者BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的黏附作用，國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道較少。本研究通過建立ALL患者BMSCs與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)模型，探討PTL干預(yù)后ALL患者BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞黏附效果的改變及其可能的機(jī)制，為PTL的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞 人ALL系Jurkat細(xì)胞購(gòu)自天津血液學(xué)研究所。采集2013年10月—2014年3月于桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院經(jīng)FAB分型及MICM分型確診為ALL并經(jīng)治療后緩解的6例患者髂后上棘骨髓液5 ml，肝素抗凝，提取BMSCs?；颊吣?例，女2例；年齡8～58歲，中位年齡28歲。本研究經(jīng)患者及其家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑及儀器 RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；MTT、二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自美國(guó)Amresco公司；DMEM/F12培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；PTL購(gòu)自成都普瑞法科技開發(fā)有限公司；胎牛血清(FBS)購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司；胰酶、雙抗購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；ELISA試劑盒購(gòu)自欣博盛生物科技有限公司；總RNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒及PCR試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司；引物設(shè)計(jì)和合成均由大連寶生物工程有限公司完成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自瑞士TECAN公司；微量臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 本研究設(shè)置Jurkat細(xì)胞組、BMSCs組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 4 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 8 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 12 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 16 μmol/L組。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 BMSCs分離培養(yǎng) 在參考文獻(xiàn)[3]基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。取5 ml骨髓液至肝素抗凝的無菌管中，用吸管輕輕將骨髓液吹打混勻后吸取0.5 ml至25 cm2的塑料培養(yǎng)瓶中，加入含20%FBS、100 U/ml 青霉素、100 μg/ml鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基中，并輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，置于37 ℃、飽和濕度、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3 d后全量換液，棄去舊培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液(PBS)輕輕洗滌2次，將未貼壁的細(xì)胞盡量洗去，再加入新的完全培養(yǎng)基。此后視細(xì)胞情況3～5 d換液。待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%～90%時(shí)用0.25%胰酶消化后進(jìn)行傳代，后改為含15%FBS的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。取第2～3代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞凍存保種，取第2～4代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞采用60Co 20 Gy照射后用于實(shí)驗(yàn)[4]。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程均為無菌操作。

1.4.2 Jurkat細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞復(fù)蘇后用含10%FBS、100 U/ml青霉素、100 μg/ml 鏈霉素的 RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。視細(xì)胞情況2～3 d換液并傳代一次。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的黏附率 方法參考文獻(xiàn)[5]。調(diào)整BMSCs濃度為5×104/ml,接種于96孔板，每孔100 μl，置于37 ℃、飽和濕度、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的Jurkat細(xì)胞，61×g離心6 min。調(diào)整細(xì)胞濃度為2×105/ml，加入96孔板中，每孔100 μl。BMSCs組加入100 μl培養(yǎng)基代替Jurkat細(xì)胞；加入PTL組PTL濃度分別為4、8、12、16 μmol/L，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。置于37 ℃、飽和濕度、5%CO2的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24、48 h。棄去舊培養(yǎng)基，PBS沖洗兩遍，去除未貼壁的細(xì)胞，加入5 g/L MTT，每孔20 μl，置于37 ℃、飽和濕度、5%CO2的培養(yǎng)箱孵育4 h，棄上清液，每孔加入150 μl DMSO振蕩10 min。Jurkat細(xì)胞組同條件懸浮培養(yǎng)，加入MTT培養(yǎng)4 h后，97×g離心10 min，去上清液，再加入150 μl DMSO。各組分別于培養(yǎng)24、48 h后采用酶標(biāo)儀測(cè)490 nm處吸光度(OD)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。黏附率=〔(所測(cè)得OD值-BMSCs組OD值)/Jurkat細(xì)胞組OD值〕×100%。

1.4.4 可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1(sVCAM-1)的表達(dá) 選用生長(zhǎng)良好的BMSCs，0.25%胰酶消化，加入完全培養(yǎng)基重懸調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×105/ml，接種于6孔板，共2 ml，置于培養(yǎng)箱孵育過夜。棄去舊培養(yǎng)基，PBS沖洗2次。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的Jurkat細(xì)胞，61×g離心6 min,去上清夜，用無血清的RPMI 1640培養(yǎng)基重懸調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106/ml，每孔加入1 ml，待細(xì)胞沉淀后藥物組加入1 ml各濃度PTL的無血清培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h。輕輕吸取上清液至2 ml環(huán)氧樹脂管中，607×g離心10 min，收集上清液至新的環(huán)氧樹脂管中采用ELISA檢測(cè)sVCAM-1表達(dá)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。ELISA步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.4.5 VCAM-1 mRNA的表達(dá) 以BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 16 μmol/L組為基準(zhǔn)組，采用相對(duì)定量法測(cè)定VCAM-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，計(jì)算公式為：相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCT，其中ΔΔCT=〔(待測(cè)組目的基因CT值-待測(cè)組內(nèi)參基因CT值)-(基準(zhǔn)組目的基因CT值-基準(zhǔn)組內(nèi)參基因CT值)〕，CT值為每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到所設(shè)定閾值時(shí)的反應(yīng)循環(huán)數(shù)。收集各組BMSCs，按試劑盒說明書提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以β-actin為內(nèi)參基因，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)各組VCAM-1 mRNA的表達(dá)。VCAM-1上游5′-GCGGAGACAGGAGACACAGTACTAA-3′，下游 5′-GAGCACGAGAAGCTCAGGAGAA-3′;β-actin 上游 5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，下游 5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′。兩步法PCR擴(kuò)增反應(yīng):第1步預(yù)變性 95 ℃ 30 s，第2步PCR反應(yīng) 95 ℃ 5 s→60 ℃ 34 s，共40個(gè)循環(huán)。

2 結(jié)果

2.1BMSCs的分離培養(yǎng) 原代BMSCs第8天融合度為90%，鏡下觀察細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、旋渦狀生長(zhǎng)(見圖1)。此后10～14d傳代1次，傳代后的細(xì)胞形態(tài)與原代細(xì)胞相似。細(xì)胞形態(tài)多樣，以長(zhǎng)梭形為主，偶見三角形、多角形等(見圖2)。

圖1 體外培養(yǎng)第8天原代BMSCs生長(zhǎng)情況(×100)

圖2 體外培養(yǎng)第1代BMSCs第3天生長(zhǎng)情況(×100)

2.2 各組黏附率比較 各組培養(yǎng)24h后，黏附率與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.95,P<0.05，見表1)。各組培養(yǎng)48h后，各組黏附率與PTL濃度負(fù)相關(guān)(r=-0.91,P<0.05，見表2)。

表1 各組培養(yǎng)24 h后黏附率

注：BMSCs=骨髓基質(zhì)細(xì)胞，PTL=小白菊內(nèi)酯，OD=吸光度

表2 各組培養(yǎng)48 h后黏附率

2.3 各組sVCAM-1表達(dá)水平比較 各組sVCAM-1表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 4 μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 8 μmol/L組和BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 12 μmol/L組sVCAM-1表達(dá)水平高于BMSCs組(P<0.05)，各加入PTL組sVCAM-1表達(dá)水平低于BMSCs+Jurkat組(P<0.05)，BMSCs組與Jurkat細(xì)胞+BMSCs+PTL 16 μmol/L組sVCAM-1表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各加入PTL組sVCAM-1表達(dá)水平與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.994,P=0.001,見表3)。

Table3ComparisonoftheexpressionlevelofsVCAM-1amongdifferentgroups

組別OD值sVCAM-1(ng/L)BMSCs組0616±003038465±2072BMSCs+Jurkat細(xì)胞組1596±0068107100±4774?BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL4μmol/L組1385±006492303±4454?△BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL8μmol/L組1170±006478122±4403?△BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL12μmol/L組0815±002452374±1698?△BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL16μmol/L組0618±003138619±2178△F值4556P值<005

注：與BMSCs組比較，*P<0.05；與BMSCs+Jurkat組比較，△P<0.05

2.4 各組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)比較 各組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，BMSCs組與BMSCs+Jurkat細(xì)胞+ PTL 16 μmol/L組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各加入PTL組BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)水平與PTL濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.994,P=0.001,見表4)。

3 討論

骨髓微環(huán)境作為造血細(xì)胞的“土壤”，在白血病中的作用越來越受到重視。已有研究表明骨髓微環(huán)境對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用是引起白血病化療耐藥及微小殘留病灶的根本原因，最終導(dǎo)致白血病復(fù)發(fā)[6]。微環(huán)境中的BMSCs與白血病細(xì)胞直接接觸，其分泌的各種物質(zhì)介導(dǎo)BMSCs對(duì)白血病細(xì)胞的黏附，以增強(qiáng)白血病細(xì)胞的增殖、抗凋亡能力[7]。尋找和開發(fā)阻斷骨髓微環(huán)境和白血病細(xì)胞相互作用、增強(qiáng)化療療效的藥物成為近年的研究熱點(diǎn)。PTL是倍半萜烯內(nèi)酯的主要成分,從中藥野生甘菊中提取獲得[8]。PTL不僅對(duì)實(shí)體腫瘤如乳腺癌、肺癌等具有抗腫瘤效應(yīng)，近年來研究還發(fā)現(xiàn)PTL對(duì)白血病干/祖細(xì)胞同樣具有抗腫瘤作用，其抗白血病機(jī)制主要是抑制NF-κB信號(hào)通道、激活P53基因、增加活性氧等[9]。

Table4ComparisonoftheexpressionlevelofBMSCsVCAM-1mRNAamongdifferentgroups

組別ΔΔCT值mRNA相對(duì)值BMSCs組0191±0047088±003BMSCs+Jurkat細(xì)胞組-4354±00222046±031BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL4μmol/L組-3883±00171476±017BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL8μmol/L組-3233±0013940±009BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL12μmol/L組-1935±0089383±023BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL16μmol/L組0100±001F值700615P值<005

本研究將Jurkat細(xì)胞與ALL患者BMSCs共同培養(yǎng)，結(jié)果顯示Jurkat細(xì)胞可黏附到BMSCs。經(jīng)PTL作用后，細(xì)胞黏附率下降，呈濃度依賴性。為探討PTL抑制Jurkat細(xì)胞黏附到BMSCs的機(jī)制，通過ELISA檢測(cè)BMSCs與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)后上清液sVCAM-1水平。結(jié)果表明單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs分泌的sVCAM-1量較少，而BMSCs和Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)后上清液中sVCAM-1的濃度顯著升高，這表明兩者間的直接接觸是Jurkat細(xì)胞從BMSCs獲得幸存信號(hào)的基礎(chǔ)。PTL作用后可以抑制sVCAM-1的表達(dá)，隨著濃度增加，抑制作用增強(qiáng)，BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 16 μmol/L組sVCAM-1的分泌量降至單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs組水平。PCR檢測(cè)BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)結(jié)果與上清液中sVCAM-1的表達(dá)水平一致。這表明Jurkat細(xì)胞與BMSCs的相互作用是促進(jìn)VCAM-1表達(dá)的關(guān)鍵，阻斷此信號(hào)通路有望改變骨髓微環(huán)境對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用。本研究前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)PTL可以通過抑制NF-κB信號(hào)通道來抑制Jurkat細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡[2]。Jacamo等[10]研究表明白血病細(xì)胞表面的人極遲抗原4(VLA4)與BMSCs表面的VCAM-1結(jié)合后激活NF-κB信號(hào)通道，隨后IKK激活，使IκB磷酸化，導(dǎo)致IκB泛素化并脫離NF-κB/IκB復(fù)合體，IκB的降解促使NF-κB向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，并選擇性的結(jié)合到相應(yīng)的DNA序列，啟動(dòng)下游基因如白介素8(IL-8)、白介素6(IL-6)、CCL2和VCAM-1等表達(dá)。Wan等[11]和Liang等[12]研究證實(shí)抑制NF-κB信號(hào)通道可以下調(diào)VCAM-1的表達(dá)。以上研究表明PTL抑制Jurkat細(xì)胞黏附到BMSCs可能與其降低NF-κB活性、下調(diào)NF-κB下游靶基因VCAM-1的表達(dá)有關(guān)。VCAM-1屬于免疫球蛋白超家族成員，已有研究表明ALL患者高表達(dá)VCAM-1，通過介導(dǎo)白血病細(xì)胞與BMSCs黏附，提高白血病細(xì)胞增殖和抗凋亡能力，此外還能增強(qiáng)白血病細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合能力導(dǎo)致白血病發(fā)生髓外轉(zhuǎn)移[13]。

綜上所述，PTL可以通過降低VCAM-1的表達(dá)抑制BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的黏附，減弱骨髓微環(huán)境對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用，使其對(duì)化療更敏感。這為研發(fā)靶向干預(yù)骨髓微環(huán)境與白血病細(xì)胞相互作用的藥物帶來希望。鑒于體外建立的ALL骨髓微環(huán)境模型與體內(nèi)的差異，在本研究的基礎(chǔ)上建立白血病小鼠模型，進(jìn)一步探討PTL體內(nèi)抗ALL效應(yīng)，為PTL的臨床應(yīng)用提供更可靠的理論依據(jù)。

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(本文編輯：吳立波)

Parthenolide Intervenes the Adhesion of BMSCs to Jurkat Cells and Its Possible Mechanism

HEYu-chan，ZHOUSi-yao,TANGRong-fang,etal.

DepartmentofHematology，AffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege，Guilin541001，China

Objective To investigate the adhesion of bone marrow stromal cells(BMSCs) to Jurkat cells and the intervention of parthenolide(PTL) on it in patients with acute lymphoblastic leukemia(ALL).Methods From October 2013 to March 2014,in the Affiliated Hospital of Guilin Medical College,a co-culture model of BMSCs and Jurkat cells were builted from the posterior superior iliac spine marrow fluid of 6 ALL patients.Jurkat cells group，BMSCs group，BMSCs+Jurkat cells group，BMSCs+Jurkat cells+PTL 4 μmol/L group，BMSCs+Jurkat cells+PTL 8 μmol/L group，BMSCs+Jurkat cells+PTL 12 μmol/L group，BMSCs+Jurkat cells+PTL 16 μmol/L group were setted.Adhesion rates were detected by adhesion test at hours 24,48 after the cultures,the expression of soluble vascular cell adhesion molecule-1(sVACM-1) by ELISA,relative expression of BMSCs VCAM-1 mRNA by RT-PCR in all groups.Results At hours 24,48 after the cultures, adhesion rate was negatively correlated with PTL concentration in all groups(r=-0.95, -0.91,P<0.05).There was difference in sVCAM-1 expression in all groups(P<0.05),higher in groups BMSCs+Jurkat cells, BMSCs+Jurkat cells+PTL 4 μmol/L, BMSCs+Jurkat cells+PTL 8 μmol/L, BMSCs+Jurkat cells+PTL 12 μmol/L than in BMSCs group(P<0.05), lower in PTL groups than in BMSCs+Jurkat cells group(P<0.05).Expression level of sVCAM-1 was negatively correlated with PTL concentration in PTL groups(r=-0.944,P=0.001).There was difference in BMSCs VCAM-1 mRNA expression in each group(P<0.05)，no difference between BMSCs group and BMSCs+Jurkat cells+PTL 16 μmol/L group.Expression level of BMSCs VCAM-1 mRNA was negatively correlated with PTL concentration in PTL groups(r=-0.944,P=0.001).Conclusion PTL inhibits the adhesion of BMSCs to Jurkat cells by decreasing VCAM-1 expression.Weakened bone marrow microenvironment is of protective effect on leukemic cells.

Jurkat cells;Parthenolide;BMSCs;Adhesion;VCAM-1；Precursor cell lymphoblastic leukemia-lymphoma

廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012GXNSFAA053112,2014GXNSFAA118170)

541001廣西桂林市，桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液內(nèi)科

王曉桃，541001廣西桂林市,桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液內(nèi)科;E-mail:wxttjl@126.com

R 733.711

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.05.012

2014-09-24；

2014-12-22)