劉鴻運 張其剛

Netrin-1蛋白在肺腺癌中的表達和臨床意義

劉鴻運 張其剛

目的 探討神經(jīng)軸突導(dǎo)向分子Netrin-1在肺腺癌組織中的表達及其與臨床的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP方法檢測60例肺腺癌手術(shù)標本癌旁及癌組織中Netrin-1的表達水平。結(jié)果 60例肺腺癌組織中Netrin-1蛋白高表達率為：80％（48/60），癌旁肺組織中為16.7％（10/60），組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），肺腺癌組織中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中Netrin-1蛋白表達率為65.7％（23/35），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中為92％（23/25），組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

肺腺癌；Netrin-1；免疫組化

近年來，肺癌的發(fā)病率和病死率均呈明顯升高趨勢，腺癌是最常見的組織學(xué)類型，約占肺癌的半數(shù)。由于肺癌患者生存率低，且常發(fā)生浸潤與轉(zhuǎn)移，預(yù)后極差，因此與肺癌浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)的機制一直都是研究特點[1-3]。神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子Netrin-1是層粘連蛋白相關(guān)的分泌蛋白，在調(diào)節(jié)神經(jīng)軸突生長、促進腫瘤血管生成、調(diào)節(jié)白細胞遷移方面發(fā)揮重要作用[4-5]。Netrin-1/UNC5B信號通路在乳腺癌、肺癌結(jié)直腸癌[6]及神經(jīng)母細胞瘤[7]起抑制凋亡作用，在細胞凋亡過程中扮演著重要作用。但是在肺腺癌中是否存在Netrin-1的表達及在其發(fā)生發(fā)展中的作用機制目前尚不明確?；谶@一點，本文擬用免疫組化法檢測Netrin-1蛋白在肺腺癌組織中的表達并研究其與臨床病理的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2007年6月～2010年6月我科手術(shù)切除并經(jīng)術(shù)后病理證實為肺腺癌的患者肺腺癌組織標本及癌旁非癌組織標本60例，男24例，女36例，年齡36～75歲，平均年齡（58±16）歲。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。所有病例術(shù)前均未行化療、放療及靶向治療。所選取的癌旁組織均為癌旁2 cm以內(nèi)組織。

1.2 主要試劑、儀器和實驗方法

兔抗人Netrin-1抗體（一抗，Abcam Inc），兔SP檢測試劑盒（sp-9001）（中衫金橋），包括：3％H2O2去離子水，山羊血清工作液，山羊抗兔IgG抗體工作液（二抗），辣根酶標記鏈霉卵白素工作液。DAB顯色試劑盒（中衫金橋），0.01mmol/L（pH 7.4）的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）（福州邁新試劑），多聚賴氨酸處理載玻片，蓋玻片，梯度酒精、二甲苯、石蠟，檸檬酸鈉緩沖液（pH=6.0）（福州邁新試劑），中性樹膠（上海），高壓鍋、電磁爐，蘇木素染色。實驗步驟嚴格按照說明進行。石蠟切片脫蠟，以枸櫞酸鹽進行抗原修復(fù)，DAB顯色，蘇木精復(fù)染、脫水、透明封片，顯微鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷

Netrin-1蛋白陽性信號均呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)，位于細胞質(zhì)。高倍鏡下選取5個視野（每個視野觀察細胞數(shù)≥200個），按陽性細胞所占百分比及著色深淺進行結(jié)果判斷[8]。（1）按切片中細胞著色深淺評分：0分，細胞無染色；1分、淺黃色；2分、棕黃色；3分、棕褐色。（2）按陽性細胞百分比評分，＜30％為1分，30％～70％為2分，＞70％為3分。取2項評分的乘積作為總評分，0～1分為陰性，≥2分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，資料行χ2檢驗及列表的關(guān)聯(lián)性分析，檢驗標準α=0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌和癌旁組織中Netrin-1的表達

Netrin-1蛋白在細胞質(zhì)及細胞核都有表達，蛋白陽性信號呈淺黃色至深黃色。60例肺腺癌癌旁組織中Netrin-1低表達50例，高表達10例，肺腺癌組織中Netrin-1低表達14例，高表達46例。組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.82，P＜0.05），具體見圖1和表1。

圖1 Netrin-1蛋白在癌旁正常組織中（A）中呈低表達，在肺腺癌組織中（B）呈高表達

表1 肺腺癌及癌旁組織中Netrin-1蛋白的表達[陽性例數(shù)（％）]

2.2 Netrin-1表達與肺腺癌病理學(xué)特征的關(guān)系見表2。

表2 Netrin-1在60例肺腺癌組織中的表達情況

3 討論

Netrin家族是一類于層粘連蛋白相關(guān)的可分泌蛋白，是一類重要的神經(jīng)突起導(dǎo)向因子，在結(jié)構(gòu)上高度保守。Netrin-1是Netrin家族中研究較多的重要成員之一，近年來研究結(jié)果顯示，Netrin不僅能在神經(jīng)導(dǎo)向、神經(jīng)遷移和神經(jīng)可塑性中發(fā)揮重要作用，還能引導(dǎo)包括血管和腺管在內(nèi)的所謂管脈系統(tǒng)的生長，甚至可以調(diào)節(jié)白細胞的遷移。Fitamant等[9]發(fā)現(xiàn)Netrin-1與乳腺癌細胞的存活及轉(zhuǎn)移有關(guān)，Netrin-1表達有利于轉(zhuǎn)移的乳腺癌細胞存在，乳腺癌組織中Netrin-1高表達，則轉(zhuǎn)移性強。另有研究表明，將人胰腺癌細胞植入雞絨毛膜建立模型，發(fā)現(xiàn)Netrin-1抑制腫瘤細胞核內(nèi)皮細胞凋亡，促進了腫瘤細胞的侵襲能力，這表明Netrin-1是胰腺癌生長、遷移的重要調(diào)節(jié)因子[9]。但是目前關(guān)于Netrin-1對肺腺癌的作用國內(nèi)外報道尚少。

本研究通過免疫組化法監(jiān)測肺腺癌及癌旁組織中Netrin-1蛋白的表達情況結(jié)果顯示，60例肺腺癌組織中46例（76.7％）呈現(xiàn)Netrin-1高表達，高于癌旁組織10例（16.70％）。進一步分析發(fā)現(xiàn)，Netrin-1蛋白的表達與患者年齡、性別無關(guān)，統(tǒng)計學(xué)分析無統(tǒng)計學(xué)意義。與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，隨有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Netrin-1蛋白表達增高。

綜上所述，Netrin-1在肺腺癌組織中呈陽性表達，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織中表達強烈，可能在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Netrin-1很可能成為肺腺癌診斷和預(yù)后判斷的新的生物標志物。對Netrin-1的進一步研究可能為肺腺癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。

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Expression and Clinical Signifcance of Netrin-1 Protein in Lung Adenocarcinoma

LIU Hongyun ZHANG Qigang, Thoracic Surgery, the First Hospital Affliated to China Medical University, Shenyang 110001, China

Objective To investigate the expression of axon guidance molecule Netrin-1 in lung adenocarcinoma and its clinical significance.Methods By immunohistochemical SP method was used to detect 60 cases of adenocarcinoma of lung cancer surgical specimens of adjacent to cancer and cancer tissue of netrin-1 expression levels. Results The expression rate of Netrin-1 protein in 60 cases of lung adenocarcinomawas： 80％ （48/60）, 16.7％ （10/60）, and the expression of Netrin-1 protein in lung adenocarcinoma tissues was 65.7％ （23/ 35）, 92％ （23/25）, and the difference was statistically signifcant （P＜0.05）. Conclusion Netrin-1 protein plays an important role in the development of lung adenocarcinoma, and the expression of Netrin-1 protein in lung adenocarcinoma is related to the metastasis and prognosis of tumor.

Lung adenocarcinoma, Netrin-1, Immunohistochemistry

R734.2

A

1674-9308（2015）30-0042-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.30.031

110001 遼寧省沈陽市中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科

張其剛，E-mail：chaoyanglhy@163.com

結(jié)論 Netrin-1蛋白在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，肺腺癌組織中高表達的Netrin-1蛋白與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)。