徐志康，陳李菲，朱惠君，張 軒，張美婷，溫 虹，賴淑芳，魯淑琴

DXI800化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定cTnI出現(xiàn)假陽性結(jié)果的分析和處理

徐志康，陳李菲，朱惠君，張 軒，張美婷，溫 虹，賴淑芳，魯淑琴

目的：分析和處理15例DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)的肌鈣蛋白I（cTnI）假陽性結(jié)果，以降低假陽性率，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。方法：用DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀進(jìn)行cTnI測(cè)定，對(duì)結(jié)果≥0.1 ng/mL的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查。結(jié)果：共檢測(cè)10 529人次的cTnI，結(jié)果異常（＞0.04 ng/mL）1 137人次，其中766人次結(jié)果≥0.1 ng/mL。對(duì)≥0.1 ng/mL的結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查后出現(xiàn)15例為0.01 ng/mL（原結(jié)果為0.31～2.52 ng/mL）。在排除儀器、試劑、室內(nèi)質(zhì)控原因后確定為假陽性。結(jié)論：標(biāo)本前處理環(huán)節(jié)非常重要，分離的血清標(biāo)本是否合格都有可能引起結(jié)果出現(xiàn)偏差，造成假陽性或假陰性結(jié)果，應(yīng)嚴(yán)格按檢驗(yàn)前處理要求進(jìn)行標(biāo)本處理。

肌鈣蛋白I；假陽性；DXI800化學(xué)發(fā)光儀

0 引言

目前，心肌肌鈣蛋白（cTn）已成為診斷急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的首要標(biāo)志物，也是獨(dú)立于心電圖之外可用于判斷梗死灶范圍大小及預(yù)后的重要血清學(xué)指標(biāo)[1]。cTnI為心肌細(xì)胞所特有，具有高度特異性，無論何種原因引起的心肌細(xì)胞損傷都會(huì)引起其不同程度的升高。cTnI在心肌梗死的診斷中非常重要，一旦忽略了cTnI假陽性結(jié)果就會(huì)給臨床造成重大誤診，引起不必要的醫(yī)療糾紛。因此，我科管理制度規(guī)定，若遇到陽性標(biāo)本需重新復(fù)檢，結(jié)果一致后方可發(fā)出報(bào)告，以降低假陽性率，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2013年1月至2013年6月，DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀出現(xiàn)15例與臨床嚴(yán)重不符的cTnI假陽性結(jié)果，經(jīng)分析和處理后發(fā)出陰性報(bào)告?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 一般資料

2013年1月至2013年6月到我院就診并進(jìn)行cTnI檢測(cè)的門診和住院患者10 529人次，cTnI參考范圍為0.01～0.04 ng/mL。我科管理制度規(guī)定，當(dāng)cTnI結(jié)果≥0.1 ng/mL時(shí)需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，并需在報(bào)告單備注欄中注明“結(jié)果已復(fù)查”，并電話告之主診醫(yī)生才能發(fā)出報(bào)告。

1.2 儀器與試劑

美國(guó)BECKMAN COULTER DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套的cTnI試劑和定標(biāo)液，試劑及定標(biāo)液均在有效期內(nèi)；采血管為美國(guó)BD公司生產(chǎn)的生化檢驗(yàn)專用真空采血促凝管（黃蓋）。

1.3 方法

用真空采血促凝管采集患者血清3 mL，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心5 min分離血清后，在1 h內(nèi)上機(jī)進(jìn)行cTnI檢測(cè)，上機(jī)操作嚴(yán)格按儀器操作說明書進(jìn)行。當(dāng)cTnI檢測(cè)值＞0.1 ng/mL時(shí)需重新上機(jī)檢測(cè)。DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)cTnI采用雙位點(diǎn)酶免法（夾心法），將樣品與結(jié)合了堿性磷酸酶的抗cTnI單抗以及包被了抗cTnI單抗的順磁性微粒添加到反應(yīng)管中進(jìn)行孵育并反應(yīng)，結(jié)合到固相的物質(zhì)將置于一個(gè)磁場(chǎng)內(nèi)被吸住，未結(jié)合的物質(zhì)則被沖洗除去，將化學(xué)發(fā)光底物添加到反應(yīng)管中，由發(fā)光檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)產(chǎn)生的光子與樣本中cTnI的濃度成正比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用南方惠橋檢驗(yàn)信息系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析功能，按所需統(tǒng)計(jì)條件對(duì)cTnI項(xiàng)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與處理

2.1 檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)10 529人次血液標(biāo)本，cTnI結(jié)果異常（＞0.04 ng/mL）有1 137人次，其中包含766人次結(jié)果≥0.1 ng/mL。對(duì)上述766人次標(biāo)本復(fù)查后發(fā)現(xiàn)，有15人次（原結(jié)果為0.31～2.52 ng/mL）復(fù)查結(jié)果為0.00或0.01 ng/mL，與初檢結(jié)果不一致。吸取上述血清標(biāo)本重新離心后再次復(fù)查，結(jié)果仍為0.00或0.01ng/mL。經(jīng)查，病史、臨床表現(xiàn)、心肌酶譜、心電圖結(jié)果等均不支持存在心肌梗死和其他心臟病變的可能，因此確定為假陽性。檢查儀器、試劑、室內(nèi)質(zhì)控均在良好狀態(tài)，排查發(fā)現(xiàn)，其中8份標(biāo)本血清中有微小的促凝膠微?；蚶w維絲懸浮，2份存在微溶血現(xiàn)象，另5份標(biāo)本狀態(tài)未見異常，考慮應(yīng)為標(biāo)本狀態(tài)不合格所致。

2.2 儀器工程師排查

當(dāng)連續(xù)出現(xiàn)假陽性結(jié)果后，及時(shí)把情況反饋給儀器工程師，工程師對(duì)儀器進(jìn)行全面維護(hù)保養(yǎng)：檢查沖洗模塊，清潔沖洗轉(zhuǎn)盤，清潔樣品針，更換排廢泵管，進(jìn)行系統(tǒng)檢測(cè)等。經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)，樣品針內(nèi)壁有分離膠黏附，這可能是由于血液樣品離心效果不好，血清中含有少量促凝膠微粒懸浮所致。

2.3 與抽血組和標(biāo)本處理組溝通

與抽血組護(hù)士進(jìn)行溝通，要求抽血后先輕輕顛倒試管4～5次（以確保促凝劑作用），然后豎著插放于試管架上，不能倒放于標(biāo)本籃中（防止纖維蛋白黏附在管壁上）。與標(biāo)本處理組工作人員溝通，在收取血液標(biāo)本后需放置37℃恒溫水浴箱至少20 min待血塊完全凝固后才能離心，離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間由原來的3 000 r/min、5 min改為3 500 r/min、6～10 min；若有溶血、脂血標(biāo)本，需退回標(biāo)本后重新抽血送檢。經(jīng)過一段時(shí)間觀察后，促凝管血清分離效果滿意，很少再出現(xiàn)cTnI假陽性結(jié)果。

3 討論

3.1 cTnI在心肌疾病中的診斷意義

cTn是心肌和橫紋肌的收縮調(diào)節(jié)蛋白，由3個(gè)亞基即TnC、TnI、TnT組成。心肌中主要有cTnI和cTnT 2種亞型，其靈敏度高、特異性強(qiáng)，發(fā)病后持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是目前心肌損傷較好的確定指標(biāo)，相比之下，cTnI較cTnT心肌特異性更強(qiáng)[2]。2007年10月，歐洲心臟病學(xué)會(huì)、美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)、美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)、世界心臟聯(lián)盟4個(gè)心臟病學(xué)團(tuán)體對(duì)心肌梗死進(jìn)行重新定義并達(dá)成共識(shí)。在新定義中，肌鈣蛋白、患者病史及心電圖的變化仍然是診斷心肌梗死的金標(biāo)準(zhǔn)。新定義特別強(qiáng)調(diào)肌鈣蛋白是“優(yōu)先”選用的生物標(biāo)記物，如果患者有心肌梗死或急性冠脈綜合征的臨床表現(xiàn)，同時(shí)伴有肌鈣蛋白升高，那么根據(jù)這2個(gè)條件就足以診斷心肌梗死。同時(shí)新定義規(guī)定，即使無心電圖改變，如肌鈣蛋白濃度升高達(dá)到特定閾值，仍可診斷為心肌梗死[3]，可見肌鈣蛋白可獨(dú)立于心電圖之外用于心肌梗死的診斷。cTnI的輕度升高（臨界值）需引起臨床的關(guān)注，因?yàn)檩p微升高表明心臟存在早期心肌受損或壞死、微小心肌梗死的發(fā)生，對(duì)臨床醫(yī)師及時(shí)治療和干預(yù)具有重要指導(dǎo)意義。

3.2 cTnI檢測(cè)的影響因素

血清中的類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）能干擾抗原抗體反應(yīng)過程的許多免疫學(xué)檢測(cè)方法，引起cTnI測(cè)定結(jié)果的假性增高，且影響程度不與RF的濃度呈正比[1]。另外，血液標(biāo)本離心制備不徹底，在檢測(cè)時(shí)殘存的纖維蛋白往往會(huì)引起假陽性的結(jié)果[1]。另外，紅細(xì)胞破壞后產(chǎn)生的血紅蛋白、細(xì)胞碎片和蛋白質(zhì)等溶血產(chǎn)物由于cTnI檢測(cè)方法不同，也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果有正向或負(fù)向的干擾。

3.3 離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速對(duì)結(jié)果的影響

離心速度慢、時(shí)間過短會(huì)引起分離膠隔離層與血清、血塊之間分離不完全，造成血細(xì)胞或纖維蛋白絲懸浮，容易引起堵針或吸到小凝塊；離心速度過快、時(shí)間過長(zhǎng)往往又造成細(xì)胞破碎或溶血，從而影響檢驗(yàn)結(jié)果。因此生化、免疫標(biāo)本離心速度以3 500～4 000 r/min、時(shí)間6～10 min為宜。在夏天，抽取血標(biāo)本后至少室溫放置20 min，待血塊完全凝固后以3 500 r/min離心6 min；在冬天，由于氣溫較低，抽取血標(biāo)本后最好放于37℃水浴箱20 min，待血塊完全凝固后以3 500 r/min離心10 min或4 000 r/min離心6 min，這樣才能保證更好地分離血清。另外，標(biāo)本離心最好一次完成，離心時(shí)的急停也會(huì)影響細(xì)胞層的形成，導(dǎo)致那些應(yīng)該被隔離的細(xì)胞漂浮到血清中，干擾正常的測(cè)定。

3.4 真空采血促凝管的離心操作及注意事項(xiàng)

真空采血促凝管由于添加了分離膠、促凝劑，縮短了血液凝固時(shí)間，在經(jīng)過一定離心力和離心時(shí)間離心后，形成管底部血塊、分離膠、血清3層，從而得到高品質(zhì)的血清標(biāo)本。真空采血促凝管正確操作步驟為：采血后應(yīng)立即輕輕顛倒試管4～5次充分混勻血標(biāo)本，然后豎著插放于試管架上，放置至少20 min待血塊完全凝固后再分離血清。我們發(fā)現(xiàn)，我科抽血室個(gè)別護(hù)士抽取血標(biāo)本后，并沒有及時(shí)地顛倒試管4～5次混勻血標(biāo)本，且把試管隨意丟放在標(biāo)本籃中，這樣容易導(dǎo)致血液從流動(dòng)狀態(tài)變成凝固狀態(tài)時(shí)，纖維蛋白黏附在試管壁上，如果離心不完全時(shí)會(huì)混雜到血清中。另外，沒有等血液完全凝固就進(jìn)行離心，分離膠返轉(zhuǎn)性不好，出現(xiàn)分離膠隔層和血清、血塊之間分離不完全，使纖維蛋白或微小凝塊混雜在隔離層上[4]，這些殘存的纖維蛋白很有可能會(huì)造成非特異性反應(yīng)的抗體捆綁在樣本中，均有可能引起假陽性的結(jié)果。當(dāng)離心效果不佳時(shí)，漂浮在血清里面的細(xì)小分離膠粒可能污染儀器的樣本針和反應(yīng)杯，也可對(duì)免疫學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生物理干擾[5]，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。以上這些結(jié)果均可能為一過性，不可重現(xiàn)。對(duì)于開始檢測(cè)異常經(jīng)復(fù)查后結(jié)果正常的標(biāo)本，應(yīng)用移液器吸取全部血清于新試管中重新離心后再進(jìn)行檢測(cè)，不能直接傾倒原管血清上機(jī)檢測(cè)，因?yàn)樵诖倌z上層會(huì)有一些細(xì)胞碎片和一些大血小板，直接傾倒會(huì)把上述細(xì)胞碎片混在血清中，從而造成檢驗(yàn)結(jié)果異常。

3.5 加強(qiáng)抽血組和標(biāo)本處理組工作人員的培訓(xùn)

ISO 15189：2003《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力的專用要求》把標(biāo)本檢驗(yàn)過程分成檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)和檢驗(yàn)后3個(gè)階段[6]，3個(gè)階段相輔相成，具有同等的重要性，忽略任何一個(gè)階段均會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的偏差。檢驗(yàn)前質(zhì)量保證既是檢驗(yàn)質(zhì)量保證系統(tǒng)中的重要環(huán)節(jié)，又是最易忽視的環(huán)節(jié)，很多檢驗(yàn)前因素可嚴(yán)重影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確性，且這些因素很難在實(shí)驗(yàn)中校正[7]。臨床實(shí)驗(yàn)室所做出的錯(cuò)誤結(jié)果約有84%是因?yàn)闄z驗(yàn)前因素造成的，其中檢驗(yàn)前樣本處理不當(dāng)或錯(cuò)誤占65%（可參考貝克曼庫(kù)爾特公司的DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀技術(shù)操作與故障排除高級(jí)培訓(xùn)班資料）。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，很多檢驗(yàn)科都配備了專門的抽血護(hù)士和標(biāo)本處理技術(shù)人員，由于其為非檢驗(yàn)專業(yè)人員，對(duì)檢驗(yàn)前質(zhì)量保證因素責(zé)任心不強(qiáng)，因此必須加強(qiáng)對(duì)抽血護(hù)士和標(biāo)本處理技術(shù)人員的培訓(xùn)，減少因檢驗(yàn)前處理不規(guī)范而引起的錯(cuò)誤結(jié)果。

4 結(jié)論

我們沒有辦法完全消除檢驗(yàn)前錯(cuò)誤，但可以盡量減少因?yàn)闄z驗(yàn)前標(biāo)本處理不當(dāng)而引起的錯(cuò)誤結(jié)果。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果時(shí)，不僅要思考究竟是檢驗(yàn)中出現(xiàn)的問題還是檢驗(yàn)前出現(xiàn)的問題，而且要從整個(gè)檢驗(yàn)流程中尋找問題的所在，對(duì)出現(xiàn)的問題及時(shí)做出糾正措施并整改，定期進(jìn)行自查，這樣才能保證不再出現(xiàn)或少出現(xiàn)錯(cuò)誤，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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（收稿：2014-03-25 修回：2014-11-03）

（欄目責(zé)任編校：李惠萍 傅 靂）

Analysis and treatment on false positive result of cTnI detection by DXI800 Chemiluminescence Apparatus

XU Zhi-kang,CHEN Li-fei,ZHU Hui-jun,ZHANG Xuan,ZHANG Mei-ting,WEN Hong,LAI Shu-fang,LU Shu-qin
（Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Shenzhen 518104,Guangdong Province,China）

ObjectiveTo analyze and treat the 15 false positive results of cTnI detection by DXI800 Chemiluminescence Apparatus.MethodscTnI detection was performed with DXI800 Chemiluminescence Apparatus,and the specimens with the results not less than 0.1 ng/mL were rechecked.ResultsAmong 10 529 cTnI results,there were 1 137 abnormal ones (>0.04 ng/mL)which included 766 ones not less than 0.1 ng/mL.Recheck showed that there were 15 results of 0.01 ng/mL, with the original results between 0.31 and 2.52 ng/mL.Then 15 false positive results were found after the factors of instrument,reagent and indoor quality control excluded.ConclusionImproper pretreatment may cause false positive or negative results,and thus the specimen has to be pretreated according to the requirements.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（4）：86-88]

cTnI;false positive;DXI800 Chemiluminescence Apparatus

R318.6；R446.1

A

1003-8868（2015）04-0086-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.04.086

徐志康（1975—），男，副主任技師，主要從事免疫學(xué)和內(nèi)分泌方面的研究工作，E-mail：438894521@qq.com。

518104，廣東深圳，廣州醫(yī)科大學(xué)附屬深圳沙井醫(yī)院檢驗(yàn)科（徐志康，陳李菲，朱惠君，張 軒，張美婷，溫 虹，賴淑芳，魯淑琴）