王瑞瓊，吳國泰，劉峰林，魏彥明* ，吳玉泓

(1. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，蘭州 730070;2. 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730000)

隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，孕畜的生存生活環(huán)境完全處于非自然狀態(tài)，孕期乳腺發(fā)育受環(huán)境因素的影響越來越明顯［1－2］，許多外界不良因素的刺激可引起孕畜的心理應(yīng)激反應(yīng)，如受到驚嚇和強(qiáng)烈刺激等，另外棚舍低矮、陽光不足、通風(fēng)不良、活動(dòng)受限、冷熱刺激，強(qiáng)行驅(qū)趕、噪聲、慢性疼痛等環(huán)境應(yīng)激都可能引起孕畜的乳腺發(fā)育障礙。初產(chǎn)母畜因乳腺發(fā)育不良而致無乳癥，給畜牧業(yè)的生產(chǎn)和效益造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失［3］。乳腺發(fā)育是動(dòng)物泌乳性能的關(guān)鍵因素，而乳腺發(fā)育受“下丘腦－垂體－卵巢”神經(jīng)內(nèi)分泌軸的調(diào)控［4］，雌激素(E2)、孕激素(P)、生長激素(GH)、催乳素(PRL)及其受體水平能真實(shí)反映乳腺發(fā)育的程度和狀態(tài)［5，6］，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)心理應(yīng)激與乳腺增生或乳腺癌的發(fā)生不一定存在直接關(guān)系，但是心理應(yīng)激能導(dǎo)致女性內(nèi)分泌紊亂，引起雌激素、孕激素水平變化，導(dǎo)致圍產(chǎn)期母體乳腺異常［7－9］。本研究基于環(huán)境異變引發(fā)心理應(yīng)激，導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，進(jìn)而阻礙乳腺發(fā)育的假說，研究懷孕大鼠乳腺發(fā)育與雌激素、孕激素及其受體水平變化的關(guān)系，探索規(guī)避傷害性刺激以期保護(hù)乳腺正常發(fā)育的科學(xué)方法，為相關(guān)研究和畜牧業(yè)生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)Wistar 性成熟大鼠，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供【SCXK(甘)2011－0001】，其中雌鼠30 只，體重200 ～250 g，80日齡;雄鼠15 只，體重250 ～300g，90日齡。在本中心無特定病原體(specific pathogenfree，SPF)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)【SYXK(甘)2011－0001】，SPF 級(jí)大鼠生長發(fā)育飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供;室溫(20±2)℃，相對(duì)濕度(50±5)%，12 h 明暗交替，適應(yīng)3d 后開始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中沒有動(dòng)物死亡及流產(chǎn)，本實(shí)驗(yàn)方案獲得甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào):20131015－02)。

1.1.2 藥品與試劑

125I－E2、125I－PROG、125I－PRL 及125I－GH 放射免疫試劑盒(上海凱博生化試劑有限公司，中國)，枸櫞酸鈉抗凝劑(四川綿竹鴻基制藥有限責(zé)任公司，中國)，3H－雌二醇(3H－E2，放射比活度2.25TBq/mmol，New England Nuclear 公司)，3H－孕酮(3H－P，放射比活度150.1 GBq/mmol，New England Nuclear 公司)，考馬斯亮藍(lán)蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，中國)。其他試劑均為分析純。

1.1.3 主要儀器

培養(yǎng)倒立頭顯微鏡(Nikon，日本);TGL20M 醫(yī)用離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司，中國);高速冷凍離心機(jī)(Sigma，美國);HH－4 恒溫水浴鍋(金壇市豐儀器制造有限公司，中國);601－01 游標(biāo)卡尺(哈爾濱量具刃具集團(tuán)有限責(zé)任公司，中國);DT510H 超聲波清洗器(Bandelin，德國);DW－86L338 醫(yī)用低溫保存箱(青島海爾特種電器有限公司，中國);PAT－8 場景恐懼系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司，中國)，JA3003B 電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司，中國);SN－659 型智能放免γ測量儀(上海應(yīng)用物理所日環(huán)光電儀器有限公司，中國);高速組織勻漿機(jī)(IKA，德國);微量分光光度計(jì)(Thermo，美國);7220 紫外－可見光分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠，中國);LS 6500 液體閃爍計(jì)數(shù)儀(Beckman，美國)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物篩選

實(shí)驗(yàn)前，30 只雌鼠行陰道脫落細(xì)胞涂片，HE 染色，連續(xù)觀察2 個(gè)動(dòng)情周期，選用有4 d 左右性周期的大鼠，將處于動(dòng)情期的雌鼠與雄鼠(2∶1)于每日20:00 －22:00 隨機(jī)合籠交配，次日晨8:00 觀察陰栓情況，將發(fā)現(xiàn)陰栓且陰道涂片存在精子者確定為孕鼠，并定為妊娠的第1 天。

1.2.2 分組與造模

將20 只妊娠大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組10 只。實(shí)驗(yàn)前觀察大鼠近尾端第2、3 對(duì)乳頭的外觀并用游標(biāo)卡尺測量乳頭直徑及高度。對(duì)照組大鼠每籠5 只常規(guī)飼養(yǎng)(不給任何刺激)，實(shí)驗(yàn)組大鼠單籠孤養(yǎng)并施加5 種不可預(yù)見性應(yīng)激刺激。5 種刺激15 d 內(nèi)隨機(jī)安排，每天1 種，每種刺激出現(xiàn)3 次且不連續(xù)出現(xiàn)。應(yīng)激刺激操作方法:①噪音刺激:將大鼠置于PAT－8 場景恐懼系統(tǒng)中，選擇強(qiáng)度為95 dB 的聲音刺激5 min;②束縛應(yīng)激:將大鼠置于固定器中(直徑5.5 cm，管壁有直徑為0.4 cm 的小孔)6 h，不擠壓大鼠尾巴;③晝夜顛倒:早7:00 時(shí)將大鼠放入密閉暗室中，關(guān)燈使動(dòng)物處于黑暗狀態(tài)，晚7:00 時(shí)打開暗室照明燈(功率100 W 白熾燈)，使大鼠處于光照狀態(tài)，次日早7:00 時(shí)取出;④冰水游泳:將大鼠置于盛有4℃水池中(水深30 cm)游泳10 min;⑤夾尾致痛:固定器固定大鼠，露出尾部，用止血鉗夾住距尾尖1/3 處(使其發(fā)出叫聲但不破皮)，持續(xù)30 min。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

(1)乳頭直徑、高度、乳房系數(shù)

造模前后觀察乳頭外觀并用游標(biāo)卡尺測量近尾端第2、3 對(duì)乳頭的直徑及高度。造模第16 天，各組大鼠腹腔注射10%的水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉，心臟取血2.0 mL 后，剝離近尾端第2、3 對(duì)乳頭皮膚，置于冰盤上，用9 mm 打孔器摘取第2、3 對(duì)乳房組織，電子天平精密稱重，計(jì)算乳房系數(shù)。乳房系數(shù)=乳房重量(g)/體重(100 g)。

(2)乳房DNA、RNA 含量檢測

取第2 對(duì)右側(cè)乳房組織，－70℃液氮凍存，待測DNA 和RNA。按文獻(xiàn)［10］方法提取DNA 和RNA。7220紫外－可見光分光光度計(jì)在260 nm 處測量吸收度(A)，稀釋前DNA、RNA 的濃度=A 值 × 稀釋倍數(shù) × 50 μL/mL(1 個(gè)A 值相當(dāng)于50 μL/mL 的DNA 或RNA)，換算為100 g 組織所含DNA 或RNA 的量。

(3)血漿E2、P、GH 和PRL 含量檢測

按照(1)中所取2.0 mL 血液加入0.5 mL 4.0%枸櫞酸鈉充分混勻，靜置15 min，4℃低溫離心(4000 r/min，15 min)，取血漿－20℃保存，按試劑盒說明書檢測血漿E2、P、GH、PRL 水平。

(4)乳房組織勻漿E2、P、GH 和PRL 含量檢測

取已冷凍的大鼠第3 對(duì)右側(cè)乳腺組織，冷生理鹽水漂洗除去血液，濾紙吸干水分，精密稱重，組織勻漿機(jī)中加入冷生理鹽水制成10 mg/mL 的組織勻漿，4℃，3000 r/min 離心15 min，取上清液，按試劑盒說明書檢測乳腺組織E2、P、GH、PRL 水平。

(5)E2和P 受體水平

取已冷凍的大鼠第3 對(duì)左側(cè)乳腺組織，采用放射配基結(jié)合分析法R(LBA)測定，參照文獻(xiàn)［11，12］，用Lowry 法測定樣本蛋白質(zhì)濃度，胞質(zhì)雌二醇和孕酮受體用加膜活性碳吸附法(DCC)測定，測定數(shù)據(jù)按Scatchard法作圖，求得雌二醇、孕酮受體的解離常數(shù)(Kd)和最大結(jié)合容量Bmax，受體數(shù)目以fmol/mg 胞質(zhì)蛋白質(zhì)表示。

(6)乳腺組織形態(tài)檢查

取大鼠近尾端第2 對(duì)左側(cè)乳房組織，迅速用10%的中性甲醛磷酸緩沖液固定，石蠟包埋，切片，HE 染色，光鏡下觀察組織形態(tài)變化，計(jì)算每張切片中乳腺小葉的數(shù)目、乳腺小葉平均腺泡數(shù)及每張切片中3 個(gè)最大腺泡腔的直徑。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 乳房性狀變化

對(duì)照組大鼠腹部近尾端第2、3 對(duì)乳頭體積較大，隆起較高，較堅(jiān)實(shí);實(shí)驗(yàn)組大鼠乳頭體積較小，緊貼于皮膚，隆起較低，較松軟。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠乳頭直徑和高度減小，乳房重量減輕，乳房系數(shù)減小，差異均有顯著性(P ＜0.05，P ＜0.01)，見表1、2。

2.2 乳房DNA、RNA 含量及RNA/DNA 比值

實(shí)驗(yàn)組大鼠乳房組織DNA、RNA 以及RNA/DNA均明顯減小，與對(duì)照組比較，差異均有顯著性(P ＜0.05，P ＜0.01)，見表3。

2.3 血漿E2、P、GH 和PRL 含量

實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿E2、P、GH 和PRL 的含量均顯著降低，與對(duì)照組比較，差異均有顯著性(P ＜0.05)，見表4。

2.4 乳房組織勻漿E2、P、GH 和PRL 含量

與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠乳房組織勻漿E2和GH 的水平均顯著降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿P 和PRL 水平具呈現(xiàn)下降趨勢，組間差異無顯著性，見表5。

2.5 E2 受體和P 受體水平

與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠乳房組織E2受體和P受體的Bmax 均明顯降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，E2受體和P 受體的Kd 均明顯增高(P ＜0.01)，見表6。

表1 孕鼠乳頭高度及直徑比較(±s，n=10，mm)Tab．1 Comparison of the diameter and height of rat breast nipples in different groups

表1 孕鼠乳頭高度及直徑比較(±s，n=10，mm)Tab．1 Comparison of the diameter and height of rat breast nipples in different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。 Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別Groups乳頭高度Nipple height 乳頭直徑Nipple diameter第2 對(duì)Second pair第3 對(duì)Third pair第2 對(duì)Second pair第3 對(duì)Third pair對(duì)照組Control group 2.02±0.16 1.98±0.12 0.96±0.09 0.91±0.11實(shí)驗(yàn)組Test group 1.85±0.11* 1.62±0.14＊＊ 0.75±0.12＊＊ 0.79±0.08*

表2 孕鼠乳房重量及乳房系數(shù)比較(±s，n=10，g)Tab．2 Comparison of the rat breast weight and index in different group

表2 孕鼠乳房重量及乳房系數(shù)比較(±s，n=10，g)Tab．2 Comparison of the rat breast weight and index in different group

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。 Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別Groups體重Body weight乳房重量Breast weight乳房系數(shù)Breast index對(duì)照組 Control group 273.82±21.12 4.43±0.21 16.18±2.16實(shí)驗(yàn)組 Test group 260.15±16.14 3.47±0.32＊＊ 13.34±2.92*

表3 孕鼠乳房DNA 和RNA 水平比較(±s，n=10)Tab．3 Comparison of the rat breast DNA and RNA in different groups

表3 孕鼠乳房DNA 和RNA 水平比較(±s，n=10)Tab．3 Comparison of the rat breast DNA and RNA in different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別Groups DNA(mg/100 g tissue)RNA(mg/100 g tissue)RNA/DNA ratio對(duì)照組 Control group 32.52±4.36 63.40±13.66 1.95±0.18實(shí)驗(yàn)組 Test group 27.19±5.61* 44.02±11.38＊＊ 1.62±0.26*

表4 孕鼠血漿E2、P、GH 和PRL 含量比較(±s，n=10)Tab．4 The level of E2，P，GH and PRL in the rat plasma in different groups

表4 孕鼠血漿E2、P、GH 和PRL 含量比較(±s，n=10)Tab．4 The level of E2，P，GH and PRL in the rat plasma in different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05。Note. Compared with the control group，* P ＜0.05.

組別 Groups E2/pg/mg P/ng/mg GH/ng/mg PRL/mU/g對(duì)照組 Control group 19.77±4.98 8.23±2.32 9.49±2.15 14.08±2.73實(shí)驗(yàn)組 Test group 15.25±3.55* 6.04±1.26* 7.11±2.52* 11.85±3.03*

表5 孕鼠乳房組織E2、P、GH 和PRL 含量比較(±s，n=10)Tab．5 The levels of E2，P，GH and PRL in breast tissue homogenates in the rats of different groups

表5 孕鼠乳房組織E2、P、GH 和PRL 含量比較(±s，n=10)Tab．5 The levels of E2，P，GH and PRL in breast tissue homogenates in the rats of different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。 Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別 Groups E2/pg/mg P/ng/mg GH/ng/mg PRL/mU/g對(duì)照組 Control group 7.43±2.46 3.63±0.94 16.28±3.23 8.12±2.64實(shí)驗(yàn)組 Test group 5.40±1.28＊＊ 2.98±1.01 12.80±4.88*6.90±3.20

表6 孕鼠雌二醇和孕酮受體水平比較(±s，n=10)Tab．6 The levels of E2 or P receptors in the pregnant rats of different groups

表6 孕鼠雌二醇和孕酮受體水平比較(±s，n=10)Tab．6 The levels of E2 or P receptors in the pregnant rats of different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。 Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別Groups E2 receptor P receptor Bmax(fmol/mg protein)Kd(×10－12，mol/L)Bmax(fmol/mg protein)Kd(×10－12，mol/L)對(duì)照組Control group 18.16±2.57 0.61±0.25 45.60±6.24 1.16±0.19實(shí)驗(yàn)組Test group 15.20±3.68＊＊ 2.12±1.34＊＊ 38.29±5.52* 1.62±0.36＊＊

2.6 乳腺組織形態(tài)學(xué)變化

對(duì)照組大鼠乳腺呈小葉分布，小葉較大、數(shù)量較多;腺泡周圍及小葉間結(jié)締組織較少，血管豐富;可見到數(shù)量較多的乳腺導(dǎo)管與腺泡結(jié)構(gòu)，導(dǎo)管較粗較長且分支均勻分布到整個(gè)乳腺區(qū)。腺泡呈圓形或橢圓形，大小不一，腺泡數(shù)量較多且體積較大，腺泡充盈且有大量分泌物，上皮細(xì)胞呈低立方柱狀，排列整齊，胞質(zhì)空亮，可見圓形細(xì)胞核;實(shí)驗(yàn)組大鼠乳腺脂肪和結(jié)締組織較多，乳腺小葉結(jié)構(gòu)較少，導(dǎo)管和腺泡結(jié)構(gòu)亦較少;導(dǎo)管較細(xì)較短且分支較少，腺泡數(shù)量較少，管腔萎縮甚至閉塞、上皮細(xì)胞扁平甚至消失，周圍反應(yīng)性間質(zhì)減少、致密。見圖1。實(shí)驗(yàn)組乳腺小葉數(shù)目、乳腺小葉平均腺泡數(shù)、最大腺泡腔/小葉的直徑均低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，P ＜0.01)，見表7。

圖1 乳腺組織形態(tài)觀察(A.對(duì)照組;B.實(shí)驗(yàn)組。H－E 染色)Fig．1 Mammary gland sections tissue in rats of normal control (A)and model (B)groups. H－E staining

表7 乳腺小葉數(shù)目、乳腺小葉平均腺泡數(shù)和腺泡直徑比較(±s，n=10)Tab．7 The number of lobules，gland acini and acinus diameter in the rats of different groups

表7 乳腺小葉數(shù)目、乳腺小葉平均腺泡數(shù)和腺泡直徑比較(±s，n=10)Tab．7 The number of lobules，gland acini and acinus diameter in the rats of different groups

注:與對(duì)照組相比，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。 Note. Compared with the control group，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別Groups乳腺小葉數(shù)目Lobule number乳腺小葉平均腺泡數(shù)Number of glandular cells腺泡直徑/μm Acinus diameter對(duì)照組Control group 55.23±6.30 61.23±11.36 509.48±141.25實(shí)驗(yàn)組Test group 46.46±5.12＊＊ 48.43±7.74* 361.59±97.63*

3 討論

動(dòng)物乳房發(fā)育受內(nèi)分泌系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控，并隨年齡、發(fā)情周期、生理狀態(tài)呈動(dòng)態(tài)變化，且妊娠期是家畜乳腺主要的生長階段，到妊娠晚期或泌乳早期乳房才達(dá)到完全發(fā)育狀態(tài)［14，15］。本研究根據(jù)動(dòng)物乳腺發(fā)育及其生理活動(dòng)特點(diǎn)，選擇妊娠大鼠為研究對(duì)象，能短期集中反映乳腺發(fā)育的關(guān)鍵階段，雖哺乳期動(dòng)物乳腺發(fā)育持續(xù)進(jìn)行，但是其組織形態(tài)已基本穩(wěn)定［13］。在動(dòng)物乳腺發(fā)育過程中，除了營養(yǎng)因素外，環(huán)境不適引發(fā)心理應(yīng)激是導(dǎo)致乳房發(fā)育不良的主要原因之一［2］。本研究根據(jù)家畜在飼養(yǎng)管理及運(yùn)輸過程中存在的不良刺激因素，設(shè)計(jì)5 種刺激因素誘導(dǎo)心理應(yīng)激的發(fā)生。根據(jù)養(yǎng)殖場外圍的噪聲污染，采用場景恐懼系統(tǒng)輸出噪音刺激，干擾大鼠生物反應(yīng);依據(jù)規(guī)?；s式養(yǎng)殖的特點(diǎn)，設(shè)置束縛應(yīng)激激發(fā)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂，影響其生長發(fā)育;模擬自然生存狀態(tài)，采用晝夜顛倒翻轉(zhuǎn)大鼠的生物節(jié)律，影響自然生存狀態(tài);采用冰水游泳的方法實(shí)現(xiàn)冷應(yīng)激刺激同時(shí)模擬強(qiáng)制驅(qū)趕，與束縛應(yīng)激形成落差，導(dǎo)致大鼠體能、情志異常，出現(xiàn)抑郁甚至絕望;采用夾尾致痛的方法實(shí)現(xiàn)慢性疼痛和肢體不適帶來的影響;綜合以上5 種傷害性刺激，根據(jù)隨機(jī)、均衡的原則安排刺激因素，實(shí)現(xiàn)了不可預(yù)見性刺激反應(yīng)，也體現(xiàn)了一定的交互作用或疊加作用，基本能真實(shí)反應(yīng)環(huán)境異常導(dǎo)致的最常見心理應(yīng)激，不足之處在于大鼠的孕期為19 ～22d，應(yīng)激反應(yīng)持續(xù)時(shí)間較短，如果選用孕期較長的動(dòng)物可能會(huì)有新的發(fā)現(xiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，心理應(yīng)激影響大鼠的體重增長，可能與飼料的攝入不足或者胃腸功能紊亂有關(guān)，但差異在15 天內(nèi)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;孕鼠乳頭大小、乳房重量及系數(shù)的變化均能反映乳腺發(fā)育的大體性狀，研究結(jié)果顯示心理應(yīng)激能阻礙乳房生長，預(yù)期對(duì)產(chǎn)后泌乳性能會(huì)帶來不良結(jié)果。前期研究表明大鼠乳腺重量和DNA、RNA 含量顯著提高能促進(jìn)乳腺發(fā)育［10－14］，本研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)激刺激使孕鼠乳房重量、乳房組織DNA、RNA、RNA/DNA 水平均明顯降低，與前期研究結(jié)果相符。

心理應(yīng)激主要通過下丘腦－垂體－腎上腺軸而影響神經(jīng)－內(nèi)分泌－免疫網(wǎng)絡(luò)，內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂是影響乳腺發(fā)育的重要原因［15－17］。E2能促進(jìn)乳腺導(dǎo)管的發(fā)育、刺激上皮增生、導(dǎo)管及小葉周圍結(jié)締組織的發(fā)育，P 能促進(jìn)腺小葉及腺泡的發(fā)育，GH 有利于導(dǎo)管和小葉腺泡生長，PRL 誘導(dǎo)腺小葉的分化，各種激素相互協(xié)同，調(diào)節(jié)乳腺發(fā)育［18－20］。E2、PRL 與GH 的協(xié)同作用可能是促進(jìn)孕期乳房發(fā)育的重要因素。本研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)激孕鼠乳腺組織PRL 水平具有下降的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與圍產(chǎn)期的不同時(shí)間有關(guān)。在受體方面，Kd是反映受體與配體結(jié)合的親和力的參數(shù)，Kd 值越小，表示激素與受體結(jié)合的親和力越大。應(yīng)激孕鼠E2受體和P 受體的Kd 均顯著增高，說明E2和P 與其受體的的親和力降低，不利于E2和P 發(fā)揮正常的生理功能。本研究發(fā)現(xiàn)給予妊娠大鼠應(yīng)激刺激后，其乳腺組織形態(tài)發(fā)生了明顯的變化，脂肪和結(jié)締組織增多，小葉數(shù)目以及腺泡與導(dǎo)管的數(shù)量、體積均減少，說明應(yīng)激刺激后，乳房組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出發(fā)育不良現(xiàn)象。

本研究結(jié)果為畜牧業(yè)生產(chǎn)中規(guī)避傷害性刺激導(dǎo)致心理應(yīng)激影響孕畜乳腺正常發(fā)育而致缺乳提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為復(fù)制乳腺發(fā)育不良大鼠模型，開展促進(jìn)乳腺發(fā)育、增強(qiáng)泌乳性能相關(guān)研究提供了方法參考。

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