毛姍

髂內(nèi)動(dòng)脈灌注甲氨蝶呤在大鼠體內(nèi)各組織藥物濃度監(jiān)測(cè)

毛姍

目的 通過甲氨蝶呤(MTX)HPLC檢測(cè)法, 對(duì)大鼠髂內(nèi)動(dòng)脈灌注MTX后血漿以及組織內(nèi)藥物濃度的變化進(jìn)行檢測(cè), 為臨床治療提供可靠參考。方.30只實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的健康雌性SD大鼠, 隨機(jī)分為對(duì)照組與觀察組, 各15只。觀察組按照3.0 mg/kg的劑量, 行髂內(nèi)動(dòng)脈注射MEX制劑；對(duì)照組以同樣劑量髂內(nèi)靜脈注射MTX制劑。比較兩組大鼠的實(shí)驗(yàn)效果。結(jié)果 兩組大鼠肺組織、子宮以及卵巢藥物濃度組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 通過髂內(nèi)動(dòng)脈灌注化療藥物, 能有效改善對(duì)子宮、卵巢組織的治療效果, 臨床應(yīng)對(duì)此給予高度重視。

甲氨蝶呤；動(dòng)脈灌注；藥物濃度

本文通過對(duì)髂內(nèi)動(dòng)脈灌注MTX在大鼠體內(nèi)各組織藥物濃度監(jiān)測(cè), 探討不同給藥方式大鼠血漿與組織中藥物動(dòng)力學(xué)變化, 為進(jìn)一步提高動(dòng)脈給藥的安全性與有效性略盡綿力。

1 材料與方法

1.1 材料 選取實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的健康雌性SD大鼠30只, 隨機(jī)將大鼠均分為對(duì)照組與觀察組, 各15只。對(duì)照組大鼠體重250～350 mg, 平均體重(300.0±50.0)mg；對(duì)照組大鼠體重230～360 mg, 平均體重(295.0±55.0)mg。兩組大鼠一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 觀察組15只大鼠按照3.0 mg/kg的劑量, 行髂內(nèi)動(dòng)脈注射MEX制劑；對(duì)照組大鼠以同樣劑量髂內(nèi)靜脈注射MTX制劑。具體操作為：給藥前, 對(duì)所有大鼠進(jìn)行1.0 g/kg的烏拉坦腹腔注射, 待麻醉后固定大鼠, 并裝置SMUP-E型生物信號(hào)處理系統(tǒng), 用于監(jiān)測(cè)大鼠生命體征［1］。從大鼠下肢根部, 向腹股溝股動(dòng)脈搏動(dòng)處切開皮膚, 分離皮下組織后, 充分暴露股動(dòng)脈與股靜脈。實(shí)施股動(dòng)脈、股靜脈分離術(shù)后, 結(jié)扎股動(dòng)脈遠(yuǎn)心端, 并于近心端插管。灌注給藥后結(jié)扎動(dòng)脈殘端并縫合傷口。手術(shù)結(jié)束后, 將大鼠放入恒溫箱內(nèi), 保持體溫。

檢測(cè)方法：心、肺、子宮組織解凍后精確稱重。按照1 g/ml的標(biāo)準(zhǔn), 折算成體積后, 按照1：2的比例加入重蒸水充分混合, 搗成組織勻漿, 記錄勻漿重量。勻漿按照1 g/ml的標(biāo)準(zhǔn)折算成體積, 加入15%(V/V)高氯酸50 μl, 旋渦2 min

沉淀蛋白.12000 r/min離心10 min, 取上清液20 μl樣品進(jìn)行HPLC分析。濃度超過線性范圍的樣品經(jīng)準(zhǔn)確稀釋后適當(dāng)倍數(shù)后進(jìn)樣。

色譜條件：色譜柱：Dikma Diamonsil C10(5 μm.200 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L醋酸銨緩沖液, 使用前需將pH值調(diào)節(jié)至6.0；流速：1.2 ml/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)暫定300 nm；柱溫：42℃；待見樣品進(jìn)樣量：20 μl［2］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)照組Mean大鼠給藥后15、30、45、60、75 min后肺組織藥物濃度依次為：(5.806±2.315)、(3.775±2.243)、(2.551±1 .512)、(1.887±1.638)、(0.801±0.459)μg/ml；觀察組Mean大鼠給藥15、30、45、60、75 min后肺組織藥物濃度依次為：(9.173±2.398)、(4.596±2.327)、(2.682±1.655)、(1.596.1.780)、(0.720±0.472)μg/ml。對(duì)照組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后肺組織藥物濃度依次為：(2.118±1.692)、(0.691±0.485)、(0.533±0.330)、(0.522±0.159)、(0.145±0.080) μg/ml；觀察組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后肺組織藥物濃度依次為：(2.004±1.531)、(1.487±0.568)、(0.444±0.299)、(0.327±0.128)、(0.037±0.020)μg/ml。

對(duì)照組Mean大鼠給藥15、30、45、60、75 min后子宮藥物濃度依次為：(14.586±8.153)、(8.332±6.268)、(8.332±6.245)、(1.384±0.259)、(0.558±0.318)μg/ml；觀察組Mean大鼠給藥15、30、45、60、75 min后子宮藥物濃度依次為：(10.427±6.458)、(5.140±4.125)、(1.369±0.857)、(0.206± 0.097)、1.003(±0.043)μg/ml。對(duì)照組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后子宮藥物濃度依次為：(2.831±1.249)、(0.642±0.530)、(0.535±0.427)、(0.277±0.089)、(0.134±0.018) μg/ml；觀察組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后子宮藥物濃度依次為：(1.253±0.981)、(2.664±1.462)、(0.361± 0.069)、(0.488±0.071)、(0.113±0.017)μg/ml。

對(duì)照組Mean大鼠給藥15、30、45、60、75 min后卵巢藥物濃度依次為：(4.882±2.498)、(1.357±0.925)、(0.127± 0.098)、(0.501±0.092)、(0.868±0.561)μg/ml；觀察組Mean大鼠給藥15、30、45、60、75 min后卵巢藥物濃度依次為：(4.379±2.981)、(3.952±1.658)、(2.088±1.925)、(1.241± 0.197)、(1.028±0.092)μg/ml。對(duì)照組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后卵巢藥物濃度依次為：(0.598±0.095)、(0.452±0.027)、(0.130±0.029)、(0.168±0.928)、0.107 μg/ml；觀察組SD大鼠給藥15、30、45、60、75 min后卵巢藥物濃度依次為：(0.596±0.249)、(0.379±0.126)、(0.033±0.002)、(0.866±0.219)、(0.876±0.327)μg/ml。

兩組大鼠肺組織、子宮以及卵巢藥物濃度有明顯差異,其中觀察組肺組織、子宮以及卵巢藥物濃度明顯比對(duì)照組更高, 有效藥物濃度維持時(shí)間明顯更長(zhǎng), 兩組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

本次試驗(yàn)對(duì)甲氨蝶呤HPLC檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探究, 最終發(fā)現(xiàn), 該方法操作便捷, 靈敏度高, 檢測(cè)獲得數(shù)據(jù)精確可靠, 用于檢測(cè)體內(nèi)血漿與組織的MTX藥物濃度, 能夠獲得預(yù)期效果。另外, 本組研究通過對(duì)大鼠股動(dòng)脈插管髂內(nèi)動(dòng)脈與股靜脈插管灌注MTX, 充分證實(shí)了該方法的可行性, 使動(dòng)脈介入治療的動(dòng)物研究取得了新的進(jìn)展。

經(jīng)髂內(nèi)動(dòng)脈灌注MTX大鼠實(shí)驗(yàn)最終發(fā)現(xiàn), 子宮與卵巢均具有理想的藥物濃集現(xiàn)象, 藥物在這部分組織的有效濃度持續(xù)時(shí)間會(huì)相對(duì)較長(zhǎng), 同時(shí), 相較于全身靜脈化療, 髂內(nèi)動(dòng)脈化療在盆腔臟器的治療中優(yōu)勢(shì)更加明顯, 對(duì)肺部轉(zhuǎn)移病灶的治療也同樣發(fā)揮著重要作用。該研究結(jié)論與朱鯤鵬等［3］人報(bào)道內(nèi)容基本一致。

綜上所述, 經(jīng)本次研究最終發(fā)現(xiàn), 通過髂內(nèi)動(dòng)脈灌注化療藥物, 能有效改善對(duì)子宮、卵巢組織的治療效果。同時(shí),對(duì)肺部病灶也能發(fā)揮出顯著的治療效果, 相較于全身靜脈給藥優(yōu)勢(shì)更為明顯, 臨床務(wù)必給予高度重視。

［1］ 劉健, 曹云祥, 朱艷.新風(fēng)膠囊對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠心功能及心肌超微結(jié)構(gòu)影響.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志.2012.23(11):1543-1548.

［2］ 段晶晶, 周婷, 徐峰.甲氨蝶呤在抑郁SD大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué).今日藥學(xué).2010.31(11):23-25.

［3］ 朱鯤鵬, 張嶺, 張曼, 等.重組羧肽酶G2對(duì)甲氨蝶呤在Wistar大鼠體內(nèi)代謝特征的影響.藥物分析雜志.2013.15(5):763-769.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.20.210

2015-01-09］

473000 南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校