【作　者】于　婷，曲守方，張小燕，孫　楠，高尚先，李海寧，黃　杰

1 中國(guó)食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室，衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京市，100050

2 江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，南京市，210022

2014年度風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒國(guó)家監(jiān)督抽驗(yàn)質(zhì)量分析

【作者】于婷1，曲守方1，張小燕2，孫楠1，高尚先1，李海寧1，黃杰1

1 中國(guó)食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室，衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京市，100050

2 江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，南京市，210022

目的 對(duì)風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行國(guó)家監(jiān)督抽驗(yàn)，評(píng)價(jià)其質(zhì)量現(xiàn)狀。方法 采用法定檢驗(yàn)結(jié)合探索性研究，對(duì)陰陽(yáng)性符合率、檢測(cè)限和重復(fù)性項(xiàng)目進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果 法定檢驗(yàn)顯示16批次中15批次合格（93.8%），不合格項(xiàng)目為陰性符合率；探索性研究中僅11批次滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求（68.8%），不合格項(xiàng)為陽(yáng)性樣本符合率、檢測(cè)限和重復(fù)性。結(jié)論 目前上市的風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒存在一定的質(zhì)量問題，建議今后在注冊(cè)檢驗(yàn)中，統(tǒng)一采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家參考盤，以促進(jìn)企業(yè)改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量。

風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒；國(guó)家監(jiān)督抽驗(yàn)；質(zhì)量分析

風(fēng)疹病毒（Rubella Virus，RV）屬于皰疹類病毒中的披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬，為單鏈RNA病毒。人群對(duì)其普遍敏感，是其唯一自然宿主。RV主要通過呼吸道傳播，潛伏期約2～3周[1-2]。臨床表現(xiàn)類似麻疹，但較麻疹感染癥狀輕，感染的成年人，預(yù)后良好。RV對(duì)人類健康的最大威脅是它的致畸性，RV感染孕婦可對(duì)胎兒產(chǎn)生先天性的損害，尤其是妊娠前12周，病毒可經(jīng)過血液傳播侵犯胎兒，導(dǎo)致自發(fā)流產(chǎn)、死產(chǎn)或胎兒感染[3-4]；被風(fēng)疹病毒感染的胎兒會(huì)有嚴(yán)重的出生缺陷，包括白內(nèi)障、耳聾、心臟病或智力低下等，這些被稱為先天性風(fēng)疹綜合征。據(jù)報(bào)道，母體感染發(fā)生在受孕后的8周，會(huì)影響胎兒多種器官的發(fā)育，致畸率100%。風(fēng)疹病毒可以通過注射疫苗來預(yù)防，但是一旦感染，就沒有特效的治療方法，因此，近幾年風(fēng)疹病毒的檢測(cè)作為優(yōu)生優(yōu)育項(xiàng)目之一，應(yīng)用范圍越來越廣[5]。

臨床上通過檢測(cè)孕婦血清中風(fēng)疹病毒IgM抗體，以確定新近感染或急性感染。目前人體血清中風(fēng)疹病毒IgM抗體的檢測(cè)主要有酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、膠體金法和時(shí)間分辨免疫熒光法，前兩種方法試劑盒為主流產(chǎn)品。風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)企業(yè)眾多，在試劑原材料選擇和參考品制備方面存在差異，導(dǎo)致質(zhì)量參差不齊，因此為了加強(qiáng)對(duì)風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒的監(jiān)督管理，規(guī)范市場(chǎng)秩序，保障產(chǎn)品使用安全有效，2014年6月中國(guó)食品藥品檢定研究院起草了《風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒抽驗(yàn)方案》，并于2014年10月中旬前完成檢驗(yàn)檢測(cè)工作，現(xiàn)將抽驗(yàn)情況及結(jié)果匯報(bào)如下。

1　儀器與試劑

儀器 酶標(biāo)儀（型號(hào)：MULTISKAN MK3，美國(guó)熱電公司）；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（型號(hào)：Liaison XL型，DiaSorin S.p.A公司）；化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（型號(hào)：MP280，北京泰格科信生物科技有限公司），化學(xué)發(fā)光儀（型號(hào)：Maglumi 2000，深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司）；化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀（型號(hào)：ARCHITECT i2000，Abbott Ireland Diagnostics Division公司）。

參考品 風(fēng)疹病毒IgM抗體國(guó)家參考品：批號(hào)：360006-201101，由19份樣品組成，包含5份陽(yáng)性參考品、10份陰性參考品、1份重復(fù)性參考品和3份最低檢測(cè)限參考品，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；企業(yè)參考品均由各企業(yè)提供。

樣品 本次抽驗(yàn)共收到來自14家生產(chǎn)企業(yè)的17批次試劑，其中酶聯(lián)免疫類試劑13批次，化學(xué)發(fā)光類試劑4批次。樣品中，國(guó)產(chǎn)試劑15批次，進(jìn)口試劑2批次；主要抽自生產(chǎn)企業(yè)15批次，僅2批次抽自使用單位（臨床醫(yī)院）。

2　檢驗(yàn)依據(jù)和方法

法定檢驗(yàn) 按照企業(yè)產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，采用企業(yè)參考品，對(duì)各試劑進(jìn)行檢測(cè)，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括陽(yáng)性符合率、陰性符合率、重復(fù)性和檢測(cè)限。各項(xiàng)目要求參見各標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)中操作步驟嚴(yán)格按照各自說明書進(jìn)行。

探索性試驗(yàn) 按照風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，采用風(fēng)疹病毒IgM抗體國(guó)家參考盤，對(duì)各試劑進(jìn)行檢測(cè)，檢驗(yàn)項(xiàng)目同法定檢驗(yàn)。各項(xiàng)目要求分別如下： 5份RV IgM抗體陽(yáng)性參考品，應(yīng)不得出現(xiàn)假陰性（陽(yáng)性符合率）； 10份RV IgM抗體陰性參考品，應(yīng)不得出現(xiàn)假陽(yáng)性（陰性符合率）；重復(fù)性參考品應(yīng)檢測(cè)為陽(yáng)性，且批內(nèi)精密度變異系數(shù)（CV%）應(yīng)不大于15.0%（精密度）； 3份最低檢測(cè)限參考品，L1和L2應(yīng)能檢出（檢測(cè)限）。試驗(yàn)中操作步驟嚴(yán)格按照各自說明書進(jìn)行。

3　檢驗(yàn)結(jié)果

除1批次試劑盒因企業(yè)不提供參考品，無法進(jìn)行檢驗(yàn)予以退檢，其余16批試劑結(jié)果如下：

法定檢驗(yàn) 按照企業(yè)產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)，16批次中15批次試劑的陰、陽(yáng)性符合率、檢測(cè)限均滿足要求，合格率為93.8%。批內(nèi)精密度變異系數(shù)在1.6%～7.3%范圍內(nèi)，均小于10.0%。1批次試劑部分陰性樣本出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，陰性符合率不符合規(guī)定，判為不合格。

探索性試驗(yàn) 采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家參考品進(jìn)行檢驗(yàn)，16批次中僅11批次試劑合格，合格率為68.8%，5批次不合格試劑主要不符合項(xiàng)及表現(xiàn)分別為：重復(fù)性參考品檢測(cè)結(jié)果為陰性（5批次）；檢測(cè)限參考品L1～L3均為陰性或者L2～L3均為陰性（3批次）；陽(yáng)性參考品P1～P5均為陰性（1批次）。

4　討論

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局網(wǎng)站上的信息統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，截止至2015年1月，風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒國(guó)產(chǎn)注冊(cè)證28個(gè)，進(jìn)口注冊(cè)證14個(gè)。主要為酶聯(lián)免疫法試劑盒，其次為化學(xué)發(fā)光法試劑盒。國(guó)產(chǎn)生產(chǎn)企業(yè)為24家，主要集中北京和廣東省，其余散布于浙江、河南、福建和山東。進(jìn)口代理企業(yè)有12家，分布于上海、北京和廣東省。此次監(jiān)督抽樣僅抽取了來自5個(gè)省市的生產(chǎn)企業(yè)或使用單位的試劑，共計(jì)14家企業(yè)的17批產(chǎn)品，抽樣生產(chǎn)或代理企業(yè)僅占38.9%。建議今后加大抽驗(yàn)力度，完善和優(yōu)化抽樣模式，使抽驗(yàn)產(chǎn)品可以反映該類產(chǎn)品的真實(shí)情況，抽驗(yàn)結(jié)果可以成為有效的參考數(shù)據(jù)。

法定檢驗(yàn)中，依據(jù)企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)參考品進(jìn)行檢測(cè)，1批次試劑不合格，陰性參考品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，其產(chǎn)生的主要原因可能是：①陰性參考品在分裝的時(shí)候被污染了；②與同種屬病毒發(fā)生交叉反應(yīng)；③與其他抗體類型如IgG等發(fā)生交叉反應(yīng)；④陰性參考品在分裝的時(shí)候被污染，或者分裝錯(cuò)誤。

風(fēng)疹病毒IgM抗體已有國(guó)家參考品和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YY/T 1235—2014），故本次監(jiān)督抽驗(yàn)中還開展了探索性實(shí)驗(yàn)，參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，以國(guó)家參考品為樣本進(jìn)行檢測(cè)。在探索性研究實(shí)驗(yàn)中，不合格批次上升至5批次，合格率下降至68.8%。主要體現(xiàn)為假陰性表現(xiàn)，其產(chǎn)生的主要原因可能是：①企業(yè)選擇的風(fēng)疹病毒IgM抗體的配對(duì)抗原或抗抗體，親和力不足，在識(shí)別風(fēng)疹病毒IgM抗體的時(shí)候，識(shí)別效率低；②包被的抗原或抗抗體濃度較低；③企業(yè)檢測(cè)限或靈敏度參考品設(shè)置不合理，導(dǎo)致試劑盒質(zhì)量無法保證。

通過對(duì)此次監(jiān)督抽驗(yàn)結(jié)果的分析，我們認(rèn)為，由企業(yè)提供企業(yè)參考品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)，在判定產(chǎn)品合格方面存在著一定的風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)闄z驗(yàn)機(jī)構(gòu)無法有效確認(rèn)企業(yè)參考品信息的真實(shí)性，難以進(jìn)行合理的監(jiān)督和管理。建議今后檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)采用國(guó)家參考品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)，企業(yè)則盡量采用國(guó)家參考品或經(jīng)國(guó)家參考品標(biāo)化的企業(yè)參考品，用于試劑的質(zhì)量控制。因?yàn)閲?guó)家參考品來源信息清楚，多種方法確認(rèn)并經(jīng)協(xié)作標(biāo)定，質(zhì)量可靠，判斷標(biāo)準(zhǔn)客觀公正。

同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)也存在以下問題：①2家企業(yè)產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)中缺少關(guān)鍵性條款——檢測(cè)限 而檢測(cè)限是反映試劑可檢測(cè)的最低樣本濃度，是判斷試劑敏感性、關(guān)系產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，不應(yīng)省略，故建議在延續(xù)注冊(cè)時(shí)，補(bǔ)充該條款。②標(biāo)準(zhǔn)中條款內(nèi)容措辭不嚴(yán)謹(jǐn)或不完整 如“生產(chǎn)企業(yè)最低檢測(cè)限參考品應(yīng)不低于1:800倍稀釋”，這句話從字面的理解，只是描述了最低檢測(cè)限參考品的情況，并沒有說明對(duì)檢測(cè)限項(xiàng)目的要求，此即措詞不嚴(yán)謹(jǐn)，應(yīng)有明確的限定：“生產(chǎn)企業(yè)最低檢測(cè)限參考品1:800倍稀釋后，應(yīng)能檢出”。又比如下面這項(xiàng)對(duì)最低檢出限的描述：“系列稀釋度參考品S1～S5（系列稀釋度從1:2～1:32）：S1～S3須檢測(cè)為陽(yáng)性，S4可檢測(cè)為陰性或陽(yáng)性”，缺少S5的檢測(cè)結(jié)果。此即措詞不完整，應(yīng)增加：“S5檢測(cè)應(yīng)為陰性”。以上問題雖非原則性問題，但企業(yè)在制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)遵循科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)、準(zhǔn)確、完整的基本原則。③標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目表述不一 本次抽驗(yàn)檢測(cè)4個(gè)項(xiàng)目，各項(xiàng)目表述五花八門，如陽(yáng)/陰性參考品符合率、陽(yáng)/陰性符合率、陽(yáng)/陰性樣本符合率等；而對(duì)于檢測(cè)限，也有靈敏度、最低檢出限、最低檢出量等多種表述；同樣，精密度、精密性、重復(fù)性、批內(nèi)不精密性、批內(nèi)精密度、分析內(nèi)精密度。雖然這些表述都無原則性錯(cuò)誤，但建議今后的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的書寫應(yīng)參考行標(biāo)表述，規(guī)范用詞。

針對(duì)本次監(jiān)督抽驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問題，建議將監(jiān)督抽驗(yàn)工作作為一項(xiàng)延續(xù)性的工作，對(duì)問題原因進(jìn)行深入分析，促使企業(yè)改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量，之后再次啟動(dòng)風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒的監(jiān)督抽驗(yàn)，在不同年度通過連續(xù)跟蹤的方式動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)其質(zhì)量變化，最終達(dá)到促進(jìn)企業(yè)提高產(chǎn)品質(zhì)量的目的。

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The Quality Analysis of National Supervising Sampling for Rubella Virus IgM Diagnostic Kits in 2014

【 Writers 】YU Ting1, QU Shoufang1, ZHANG Xiaoyan2, SUN Nan1, GAO Shangxian1, LI Haining1, HUANG Jie1
1 The 1st Department of In Vitro Diagnostic Products, NIFDC, Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Product, Beijing, 100050
2 Jiangsu Institute of Medical Device Testing, Nanjing, 210022

Objective To evaluate the quality status of rubella virus IgM diagnostic kits by national supervising sampling. Methods Using legal inspection combining with exploratory study, the positive and negative coincidence rate, detection limit and repeatability of kits were verified. Results The results showed that 15 of 16 batches of kits were qualified using legal inspection, and the passing rate was 93.8%. The unqualified item was negative coincidence rate. In exploratory study, only 11 batches (68.8%) complied with industry standard. The unqualified items were negative coincidence rate, detection limit and repeatability. Conclusion At present, rubella virus IgM diagnostic Kits have some quality problems in the market. It is recommended that we adopt industry standard and national reference panel in the registration inspection for the future, which will prompt enterprises to improve quality.

rubella virus diagnostic kit, national supervision, quality analysis

R450；TH771

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2015.04.013

1671-7104(2015)04-0282-03

2015-03-26

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃( 863 計(jì)劃) (2011AA02A115)

于婷，E-mail: yuting@nifdc.org.cn

黃杰，E-mail: jhuang5522@126.com