高娟，姜華

(1. 黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院，黑龍江牡丹江157041；2. 牡丹江醫(yī)藥技工學(xué)校，黑龍江牡丹江157000)

不同地區(qū)的東北龍膽根中獐牙菜苦苷含量分析

高娟1，姜華2

(1. 黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院，黑龍江牡丹江157041；2. 牡丹江醫(yī)藥技工學(xué)校，黑龍江牡丹江157000)

研究不同地區(qū)的東北龍膽，組間獐牙菜苦苷的含量差異。采用高效液相色譜法。結(jié)果表明：生長(zhǎng)在不同地區(qū)的東北龍膽，獐牙菜苦苷的含量差異顯著，即生長(zhǎng)環(huán)境不同，東北龍膽根中有效成分龍膽苦苷含量差異顯著。土壤類型因素對(duì)條葉龍膽根中獐牙菜苦苷含量的影響達(dá)到顯著水平。

東北龍膽；獐芽菜苦苷；含量分析

東北龍膽(GentianamanshuricaKitag.)，龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana)多年生草本植物，以中藥“龍膽”入藥，是一種常用中藥，具“瀉肝火，清濕熱，健胃”功能。東北龍膽主要藥效成分為龍膽苦苷和獐牙菜苦苷，其含量差異受遺傳和環(huán)境的共同作用，因此本論文設(shè)計(jì)不同的環(huán)境條件下，比較東北龍膽個(gè)體間有效成分含量的差異大小；比較在不同的土壤條件下個(gè)體間根中獐牙菜苦苷的含量差異。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

東北龍膽植株采集于黑龍江五常小嶺地區(qū)、鏡泊湖、三江平原植株。植物生長(zhǎng)年限為3年生植株。

1.2 方法

本文鑒于對(duì)東北龍膽獐牙菜苦苷含量分析研究，所以主要選擇采用高效液相色譜法,測(cè)定東北龍膽根中次生代謝物獐牙菜苦苷含量。

1.3 儀器和試劑

1.3.1 主要儀器。Waters-1525高效液相色譜泵，Waters-2487紫外-可見檢測(cè)器，Empower Pro工作站，Nova-Pak C18色譜柱(3.9mm×150mm)，Sartoriua BS-210s電子天平，Water Code 5CH型柱溫箱，B-321型超聲波清洗器(美國(guó)Branson Cleaning Equipment公司)。

1.3.2 試劑。甲醇為色譜純(美國(guó)迪馬公司)和分析純，水為超純水；龍膽苦苷對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所；獐牙菜苦苷對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 東北龍膽根中獐牙苦苷含量測(cè)定

關(guān)于東北龍膽苦苷類成分的含量測(cè)定方法，有紙色譜-比色法、薄層色譜-比色法、薄層色譜-紫外分光光度法、薄層色譜-光密度法和高效液相色譜法等，本實(shí)驗(yàn)用高效液相色譜法測(cè)量東北龍膽根中獐牙菜苦苷含量，此方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、可重復(fù)性強(qiáng)。

2.1 獐牙菜苦苷含量測(cè)定

色譜條件：流動(dòng)相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣運(yùn)行時(shí)間為5min；獐牙菜苦苷保留時(shí)間為3.2min；進(jìn)樣量5μL；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)237nm；論塔板數(shù)按獐牙菜苦苷計(jì)算不低于2500，柱溫39℃。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取獐牙菜苦苷對(duì)照品5.1mg，置于10mL的容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻制成濃度為0.51mg/mL的對(duì)照品，然后用0.22μm濾膜過濾，備用貯存液。精密吸取上述貯存液，以甲醇進(jìn)行準(zhǔn)確配置濃度分別為0.0、0.018、0.02550、0.03185、0.06375、0.12750 mg/mL。每一濃度平行進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量為5 μL。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：Y=5.02e+006X+2.52e+003,r=0.999295，表明獐牙菜苦苷在0.0～0.6375 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

樣品溶液的制備：精密稱取條葉龍膽根干燥粉約100mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇9 mL,超聲提取55 min, 提取溫度10℃，用純甲醇定容至刻度，混勻，放置20 min然后用0.22μm濾膜過濾后用于進(jìn)樣。在選定的色譜條件下測(cè)量其獐牙菜苦苷含量，每份樣品進(jìn)樣3次。

2.2 對(duì)照品與樣品的純度檢查

取對(duì)照品與樣品液各10μL，進(jìn)樣，色譜分離，對(duì)照品與樣品中獐牙菜苦苷的峰純度指數(shù)均大于0.9999，即樣品峰無其他雜質(zhì)干擾。

樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取已知含量的條葉龍膽樣品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)行進(jìn)樣1次測(cè)定，測(cè)定峰面積,計(jì)算RSD為1.57%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一樣品溶液5 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值， RSD為0.93%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批條葉龍膽樣品5份，精密稱定，按含量測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定，計(jì)算RSD為2.41%表明該方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：精密稱量已知含量的條葉龍膽樣品6份，每份100 mg，精密加入獐牙菜苦苷對(duì)照品溶液約1 mg，按前述樣品溶液的制備方法制備樣品，并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均回收率和RSD分別為：97.8%和2.15%。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

3.1 取隨機(jī)采集于黑龍江五常小嶺地區(qū)的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進(jìn)行獐牙菜苦苷含量測(cè)定。

通過方差分析結(jié)果表明：來自同一地區(qū)，黑龍江五常小嶺地區(qū)的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長(zhǎng)在相同環(huán)境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.2 取隨機(jī)采集于黑龍江五常小嶺地區(qū)的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進(jìn)行獐牙菜苦苷含量測(cè)定。

通過方差分析結(jié)果表明：來自同一地區(qū)，黑龍江鏡泊湖地區(qū)的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長(zhǎng)在相同環(huán)境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.3 取隨機(jī)采集于黑龍江三江平原地區(qū)的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進(jìn)行獐牙菜苦苷含量測(cè)定。

通過方差分析結(jié)果表明：來自同一地區(qū)，黑龍江三江平原地區(qū)的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長(zhǎng)在相同環(huán)境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.4 各取黑龍江五常小嶺地區(qū)、鏡泊湖地區(qū)、三江平原地區(qū)隨機(jī)采集的東北龍膽植株的根，進(jìn)行獐牙菜苦苷含量測(cè)定平均值進(jìn)行比較，利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件做方差分析。

通過方差分析結(jié)果表明：生長(zhǎng)在不同地區(qū)的東北龍膽，獐牙菜苦苷的含量差異顯著，即生長(zhǎng)環(huán)境不同，東北龍膽根中有效成分龍膽苦苷含量差異顯著。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：來自不同地區(qū)的東北龍膽，組間獐牙菜苦苷的含量差異較顯著。把同種的條葉龍膽，在不同類型土壤中進(jìn)行栽培，土壤類型因素對(duì)條葉龍膽根中獐牙菜苦苷含量的影響達(dá)到顯著水平。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典1部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 江蔚新.三花龍膽和東北龍膽地上、地下器官中獐芽菜苦苷積累規(guī)律研究[J].中成藥，2005,27(4):459-460.

2014-12-24

高娟(1970-)，女，高級(jí)工程師，從事藥物制劑與分析，E-mail:gaojuan1970@126.com。

R284.1

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.03.017