王雪敏 楊 昆 李琦軍 趙艷軍 靳 杰 田 勇 常智忠

(石家莊市第三醫(yī)院急診科，河北 石家莊 050011)

IL-1、IL-6、TNF-α在慢性酒精性中毒大鼠肝臟的表達(dá)

王雪敏 楊 昆 李琦軍 趙艷軍 靳 杰 田 勇 常智忠

(石家莊市第三醫(yī)院急診科，河北 石家莊 050011)

目的 探討慢性酒精中毒對(duì)大鼠肝臟白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達(dá)的影響。方法 采用酒精灌胃加高脂飼料法形成慢性酒精性肝損傷雄性SD大鼠模型，血清谷酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)水平為基礎(chǔ)參考指標(biāo)。40只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、酒精模型組，每組20只。應(yīng)用Western印跡方法檢測(cè)SD大鼠肝組織中IL-1、IL-6、TNF-α表達(dá)情況。結(jié)果慢性酒精中毒大鼠血清 GGT、ALT、AST水平較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，肝組織 IL-1、IL-6、TNF-α較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.01)。結(jié)論慢性酒精中毒的SD大鼠血清、肝組織IL-1、IL-6、TNF-α表達(dá)明顯升高，造成肝臟損傷，嚴(yán)重可發(fā)展至肝硬化。

慢性酒精中毒;肝損害;谷酰轉(zhuǎn)肽酶;天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶;血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶

在我國，酒精性肝損傷(ALD)呈年輕化增長(zhǎng)趨勢(shì)，同時(shí)，由慢性酒精中毒導(dǎo)致的肝硬化、周圍神經(jīng)病變、腦損傷及死亡率逐年增加〔1～3〕。本研究通過觀察慢性酒精中毒大鼠、肝臟組織中白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達(dá)情況，探討IL-1、IL-6、TNF-α在ALD發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 選取SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重88～104 g，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供。高脂飼料為標(biāo)準(zhǔn)飼料+1%膽固醇、10%玉米油、5%豬油，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 試劑與儀器 52%衡水老白干為河北衡水老白干釀酒(集團(tuán))有限公司出品;血清谷酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測(cè)試劑盒購自上海生工有限公司;IL-1、IL-6、TNF-α活性檢測(cè)試劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 給藥、分組 SD大鼠給予正常適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，將40只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(慢性酒精中毒組)、對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予52%衡水老白干白酒定時(shí)灌胃，0.2 ml/10 g，1次/d，連續(xù)14 d;對(duì)照組給予等量蒸餾水定時(shí)灌胃，連續(xù)14 d;兩組均給予高脂飲食，末次灌胃后12 h禁食，于灌胃后24 h經(jīng)眼眶采血，處死后立即取肝臟組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 血清GGT、AST和ALT水平檢測(cè) 采集血液常溫靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，取血清按照試劑盒說明書檢測(cè) GGT、AST、ALT 水平。

1.5 IL-1、IL-6、TNF-α活性水平檢測(cè) 取大鼠肝臟組織40 mg，嚴(yán)格按照試劑盒步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠血清GGT、AST和ALT水平 實(shí)驗(yàn)組大鼠血清GGT〔(7.64±1.72)U/L〕、AST〔(163.59±8.57)U/L〕和 ALT〔(196.44±9.80)U/L〕水平明顯高于對(duì)照組。提示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型成功。

2.2 Western印跡方法檢測(cè)兩組肝臟組織中IL-1、IL-6、TNF-α水平 實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟組織 IL-1〔(14.51±1.54)ng/L〕、IL-6〔(64.20±2.94)ng/L〕、TNF-α〔(78.39±5.16)ng/L〕顯著高于對(duì)照組〔(4.35±0.67)ng/L、(21.84± 1.03)ng/L、(13.87 ±2.35)ng/L〕(P＜0.05)。

3 討論

慢性酒精中毒可導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)代謝異常，ALD可引起肝臟細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。研究顯示，通過藥物降低急性酒精中毒大鼠TNF-α水平，可有效防止ALD進(jìn)一步發(fā)展〔4〕。GGT、AST和ALT常作為診斷ALD的指標(biāo)〔5〕。由于長(zhǎng)期飲酒導(dǎo)致ALD，多種通路啟動(dòng)引起細(xì)胞因子分泌增加，形成肝臟細(xì)胞炎癥、壞死、纖維化等〔6，7〕。本研究中慢性酒精中毒SD大鼠肝臟組織IL-1、IL-6、TNF-α均較正常對(duì)照組升高，提示酒精造成的肝損害有多種炎性因子參與，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子增加，導(dǎo)致肝功能異常，其中TNF-α是促進(jìn)炎癥發(fā)展的關(guān)鍵因子，與IL-6相互激發(fā)，加重肝細(xì)胞損傷〔4，8〕。慢性酒精中毒不僅引起肝臟損害，還引起慢性酒精中毒性周圍神經(jīng)病〔9，10〕，因此慢性酒精中毒應(yīng)引起高度重視，預(yù)防出現(xiàn)多臟器損傷。

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R57

A

1005-9202(2015)09-2377-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.029

王雪敏(1969-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事急診醫(yī)學(xué)研究。

〔2013-10-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

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