周媛媛， 蔣艷秋， 孟 穎， 劉兆熙， 楊炳友

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150040)

青龍衣為胡桃科植物胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 或胡桃Juglans regia 未成熟外果皮，主產(chǎn)河北、山東、東北等地［1］。青龍衣始載于《開寶本草》，該藥辛、苦、澀、平，古代應(yīng)用主要利用其清熱解毒、止痛止痢之功效［2］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，青龍衣具有明顯的鎮(zhèn)痛和抗腫瘤作用［3］。本實(shí)驗(yàn)對青龍衣三氯甲烷和乙酸乙酯抗腫瘤活性部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到15 個(gè)化合物。

1 儀器與材料

MS-2010 型質(zhì)譜儀和Finnigan LCQ LC-MS 聯(lián)用儀;Bruker-400 型超導(dǎo)核磁共振光譜儀;島津公司FTIR-8400S 型紅外光譜儀;AB-8 型大孔吸附樹脂(南開大學(xué)化工廠);柱色譜硅膠(200 ～300 目，青島海洋化工廠);其他試劑均為分析純。

青龍衣藥材2012 年8 月采集自吉林省長白山區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室王振月教授鑒定為胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 的青果皮。

2 提取與分離

將干燥的青龍衣藥材10.0 kg 粉碎，95%乙醇回流提取3 次，減壓濃縮得乙醇浸膏(853 g)。提取物用適量水混懸后，分別用乙酸乙酯和三氯甲烷進(jìn)行兩相回流，得乙酸乙酯層浸膏(84 g)和三氯甲烷層浸膏(96 g)，乙酸乙酯浸膏通過AB-8 型大孔吸附樹脂柱色譜，以H2O、50%乙醇和95%乙醇依次洗脫，其中95%乙醇洗脫組分(32 g)反復(fù)用硅膠柱層析后得到化合物1 (32 mg)，化合物2 (28 mg);50%乙醇洗脫組分(42 g)反復(fù)用硅膠柱層析后得到化合物3 (30 mg)，化合物4 (29 mg)，化合物5 (33 mg)，化合物6 (28 mg)，化合物7 (31 mg)，化合物8 (30.5 mg)，化合物9(26 mg)。三氯甲烷浸膏反復(fù)硅膠柱層析后得到化合物10 (31 mg)，化合物11 (30 mg)，化合物12(26 mg)，化合物13 (32 mg)，化合物14 (30 mg)，化合物15 (32 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:無色針狀晶體(MeOH)，mp 283 ～287 ℃，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性。ESI-MS(m/z):455 ［M-H］-，表明其相對分子質(zhì)量為456。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 415 cm-1)和羰基(1 694 cm-1)吸收。TLC 與熊果酸對照品展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點(diǎn)不下降，故化合物1 為熊果酸(ursolic acid)。

化合物2:無色針狀粉末 (MeOH)，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陰性。ESIMS (m/z):487 ［M-H］-，表明其相對分子質(zhì)量為488。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 458 cm-1)和羰基(1 703 cm-1)吸收。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:0.68，0.80，1.01，1.18 (3H ×4，s， Me-25， Me-24， Me-23， Me-27 )，0.92，0.87 (3H ×2，d，J =6.4 Hz，Me -29，Me-30)，3.24 (d，J =10.8 Hz，H-23a)，3.32 (1H，dd，J=9.6，1.6 Hz，H-3)，3.48 (d，J =10.8 Hz，H-23b)，3.69 (m，H-2)，5.23 (1H，t，J =3.2 Hz，H-12)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:48.2 (C-1)，69.6 (C-2)，78.2 (C-3)，43.5(C-4)，48.1 (C-5)，19.0 (C-6)，33.7 (C-7)，40.6 (C-8)，48.2 (C-9)，39.1 (C-10)，24.3(C-11)，126.8 (C-12)，139.9 (C-13)，43.3(C-14)，28.7 (C-15)，25.4 (C-16)，47.5 (C-17)，54.2 (C-18)，39.9 (C-19)，40.3 (C-20)，33.6 (C-21)，38.2 (C-22)，66.3 (C-23)，14.2(C-24)，17.8 (C-25)，17.6 (C-26)，23.8 (C-27)，181.7 (C-28)，17.6 (C-29)，21.7 (C-30)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道基本一致，故化合物2 為2α，3β，23-三 羥 基-12-烯-28-熊 果 酸(2α，3β，23-trihydroxy urs-12-en-28-oic acid)。

化合物3:無色針狀結(jié)晶(MeOH)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，溴甲酚綠反應(yīng)陽性。EI-MS(m/z):170［M］+，表明其相對分子質(zhì)量為170。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:6.98(2H，s，H-2，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:121.8 (C-1)，110.4 (C-2，6)，146.5(C-3，5)，139.4 (C-4)，170.3 (-COOH)。NMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［5］基本一致，故化合物3 為沒食子酸(gallic acid)。

化合物4:無色針狀結(jié)晶(MeOH)，溴甲酚綠反應(yīng)陰性，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性。EI-MS(m/z):152［M］+，表明其相對分子質(zhì)量為152。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:9.73(1H，s，-CHO)，3.92 (3H，s，-OCH3)，7.43(1H，d，J =7.0 Hz，H-5)，7.39 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.94 (1H，dd，J =7.0 Hz，2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:111.2 (C-2 )，116.4 (C-5 )，127.8 (C-6 )，130.5 (C-1 )，149.9 (C-3 )，154.6 (C-4 )，193.0 (-CHO)，56.6 (-OCH3)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道基本一致，故化合物4 為香草醛(vanillin)。

化合物5:無色針狀結(jié)晶，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，溴甲酚綠反應(yīng)陽性。ESI-MS (m/z):167 ［M-H］-，表明其相對分子質(zhì)量為168。1H-NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ:7.44 (1H，d，J =8.0，2.0 Hz，H-6)，7.43 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.92 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-5)，3.87(3H，s，-OCH3)。13C-NMR (100 MHz，Methanold4)δ:122.9 (C-1)，112.7 (C-2)，146.6 (C-3)，148.7 (C-4)，113.8 (C-5)，124.6 (C-6)，56.9 (-OCH3)。NMR 譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道基本一致，故化合物5 為香草酸(vanillic acid)。

化合物6:白色片狀結(jié)晶(CHCl3)，mp 76 ～78 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，Molish 反應(yīng)陰性。1HNMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:12.35 (-COOH)，7.34 ～7.22 (5H，m)，3.55 (2H，s，-CH2)。根據(jù)1H-NMR 譜數(shù)據(jù)可推斷化合物6 可能為苯乙酸，TLC 展開后與苯乙酸對照品Rf對照一致，故化合物6 為苯乙酸(phenylethyl acid)。

化合物7:無色針晶(乙醚)，mp 116 ～117℃。EI-MS (m/z):182 ［M+］，表明其相對分子質(zhì)量為182。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.76(3H，s，H-9)，3.63 (2H，s，H-7)，6.62 (1H，d，J = 2.5 Hz，H-6)，6.73 (1H，dd，J = 8.5，2.5 Hz，H-4)，6.84 (1H，d，J=8.5，H-3)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:121.9 (C-1)，148.8(C-2)，118.5 (C-3)，115.5 (C-4)，149.3 (C-5)，117.7 (C-6)，37.8 (C-7)，173.8 (C-8)，52.8 (C-9)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，故化合物7 為2，5-二羥基苯乙酸甲酯(2，5-dihydroxy methyl phenylacetate)。

化合物8:白色粉末。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:9.75 (1H，s，H-7)，7.76 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.85 (2H，d，J =8.5 Hz，H-3，5)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4，)δ:130.3 (C-1)，133.5 (C-2，6)，117.0 (C-3，5)，165.4 (C-4)，192.8 (C-7)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，故化合物8 為對羥基苯甲醛(p-hydroxy benzalde -hyde)。

化合物9:無色針晶，mp 130 ～132 ℃。EI-MS(m/z):148 ［M+］，表明其相對分子質(zhì)量為148。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:7.57 (2H，m，H-3＇，H-5＇)，7.43 (3H，m，H-2＇，H-4＇，H-6＇)，6.48 (1H，d，J = 16.0 Hz，H-2)，7.83(1H，d，J=16.2 Hz，H-3)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:172.8 (C-1)，117.6 (C-2)，147.4(C-3)，134.3 (C-1＇)，128.6 (C-2，6＇)，129.3(C-3＇，5＇)，130.2 (C-4＇)。NMR 數(shù) 據(jù) 與 文 獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，TLC 與對照品肉桂酸展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點(diǎn)不下降，故化合物9 為肉桂酸(cinnamic acid)。

化合物10:白色無定形粉末(CHCl3)，分子式為C11H12O3，ESI-MS (m/z):191 ［M-H］-，表明其相對分子質(zhì)量為192。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:8.55 (1H，s，5-OH)，7.58 (1H，dd，J = 8.0，1.0 Hz，H-7)，7.33 (1H，t，J = 8.0 Hz，H-8)，7.07 (1H，dd，J =8.0，1.0 Hz，H-6)，4.98 (1H，m，H-4)，3.57 (3H，s，4-OCH3)，2.87 (1H，m，H-2β)，2.63 (1H，m，H-2α)，2.24 (1H，m，H-3β)，2.11 (1H，m，3α)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:196.2 (C-1)，35.6 (C-2)，27.3 (C-3)，80.2 (C-4)，156.3 (C-5)，122.32 (C-6)，129.6 (C-7)，119.3 (C-8)，132.5 (C-9)，126.7 (C-10)，55.3 (C-11)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致，故化合物10 為4-甲氧基-5-羥基-1-四氫萘酮(5-hydroxy-4-methoxy-α-tetralone)。

化合物11:紅色針狀結(jié)晶。EI-MS (m/z):218［M］+，表明其相對分子質(zhì)量為218。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:6.08 (1H，s，H-3)，7.25(1H，d，J =8.7 Hz，H-6)，7.57 (1H，t，J =8.2，7.7 Hz，H-7)，7.66 (1H，d，J =7.5 Hz，H-8)，4.14 (2H，q，J = 7.0 Hz，H-11)，1.53(3H，t，J = 7.0 Hz)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.5 (C-1)，160.6 (C-2)，109.8(C-3)，190.7 (C-4)，161.3 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，131.3 (C-9)，114.3 (C-10)，65.7 (C-11)，13.9 (C-12)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道基本一致，故化合物11為5-羥基-2-乙氧基-1，4-萘醌(2-ethoxy-5-hydroxyna phthalene -1，4 -dione)。

化合物12:黃色晶體。ESI-MS (m/z):348［M］-，表明其相對分子質(zhì)量為348。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:11.54 (1H，s，7-OH)，11.51(1H，s，1-OH)，7.70 ～7.55 (2H，m，H-9，10)，7.52 (1H，dd，J = 8.5，7.6 Hz，H-3)，7.24 (1H，dd，J = 7.6，2.0 Hz，H-8)，7.16(1H，dd，J = 7.5，1.0 Hz，H-4)，6.93 (1H，dd，J = 8.5，1.2 Hz，H-2)，4.83 (1H，s，5-OH)，4.24 (1H，dd，J =4.0，1.2 Hz，H-12)，3.02 ～3.07 (2H，m，H-14)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:198.2 (C-13)，188.9 (C-6)，180.5 (C-11)，163.6 (C-1)，162.1 (C-7)，154.5 (C-5a)，148.8 (C-11a)，146.4 (C-4a)，137.4 (C-9)，136.8 (C-3)，132.7 (C-11a)，125.3 (C-8)，120.5 (C-10)，119.5 (C-2)，115.2 (C-6a)，110.6 (C-13a)，82.2 (C-5)，54.2 (C-14)，52.8 (C-12)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，故化合物12 為黃杞醌(Engelharquinone)。

化合物13:黃色針狀晶體，mp 160 ～161 ℃。ESI-MS (m/z):205 ［M +H］+，表明其相對分子質(zhì)量為204。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.91(3H，s，OCH3-2)，6.13 (1H，s，H-3)，12.20(1H，s，OH-5)，7.68 (1H，dd，J = 7.5，0.9 Hz，H-8)，7.56 (1H，dd，J =8.2，7.5 Hz，H-7)，7.27 (1H，dd，J =8.2，0.9 Hz，H-6)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.2 (C-1)，190.9(C-4)，161.2 (C-2)，161.2 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，109.4 (C-3)，114.1 (C-10)，131.2 (C-9)，56.7 (OCH3)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，故化合物為2-甲氧基胡桃醌(2-methoxyjuglone)。

化合物14:白色針晶，mp 139 ～141 ℃，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性。EI-MS (m/z):414［M］+，表明其相對分子質(zhì)量為414。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:0.69 (3H，s，H-18)，0.82 (3H，t，J =7.0 Hz，H-29)，0.84 (3H，d，J = 6.8 Hz，H-26)，0.86 (3H，d，J = 7.2 Hz，H-21)，0.93 (3H，d，J =6.8 Hz，H-27)，1.02(3H，s，H-19)，3.55 (1H，m，H-3)，5.37(1H，d，J =5.2 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:37.3 (C-1)，26.2 (C-2)，71.9 (C-3)，42.5 (C-4)，140.9 (C-5)，121.8 (C-6)，33.7 (C-7)，31.7 (C-8)，50.2 (C-9)，36.6(C-10)，21.3 (C-11)，39.9 (C-12)，42.2 (C-13)，56.6 (C-14)，24.2 (C-15)，28.4 (C-16)，56.2 (C-17)，19.6 (C-18)，11.8 (C-19)，36.3(C-20)，18.7 (C-21)，31.8 (C-22)，28.4 (C-23)，45.7 (C-24)，29.4 (C-25)，12.2 (C-26)，19.9 (C-27)，23.1 (C-28)，19.2 (C-29)。NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道基本一致，且在薄層板上與β-谷甾醇的對照品對照Rf值相同，樣品與對照品混合熔點(diǎn)測定不下降，故化合物為β-谷甾醇(βsitosterol)。

化合物15:白色粉末，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陽性。ESI-MS (m/z):575［M-H］-，表明其相對分子質(zhì)量為576。IR (KBr)譜顯示有羥基(3 450 cm-1)。TLC 與對照品胡蘿卜苷展開，兩者Rf值一致，同對照品混合后熔點(diǎn)不下降，故化合物15 為胡蘿卜苷(daucosterol)。

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