王敏 沈冰冰 羅娟 楊玉佩 喻娟 周琪 陳勝璜

湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208

中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的研究現(xiàn)狀

王敏 沈冰冰 羅娟 楊玉佩 喻娟 周琪 陳勝璜

湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208

中藥復(fù)方是中醫(yī)理論的具體表現(xiàn)，闡明物質(zhì)基礎(chǔ)是中醫(yī)藥現(xiàn)代化和國際化的關(guān)鍵。隨著現(xiàn)代分析儀器和技術(shù)的飛速發(fā)展，不斷涌現(xiàn)出各種新理論、新方法，使中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究上了個(gè)新臺階。只有明確了中藥復(fù)方藥用功效、作用機(jī)制，才能保障用藥安全性和質(zhì)量得到有效控制。本文對中藥復(fù)方基礎(chǔ)物質(zhì)研究的理論和方法進(jìn)行了綜述，以期為之后的復(fù)方研究提供參考依據(jù)。

中藥復(fù)方；物質(zhì)基礎(chǔ)；綜述

中藥復(fù)方指在辨證審因決定治法后，選擇合適的中藥，酌定用量，按照君臣佐使的原則，配伍而成的一組藥物。中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是指中藥復(fù)方針對某一病癥發(fā)揮藥效作用的全部活性物質(zhì)的總和，它是闡明復(fù)方奧秘的關(guān)鍵，是復(fù)方質(zhì)量控制的基礎(chǔ)與核心。復(fù)方既非根據(jù)每一癥狀所需要的藥物相加而成，也不是各味藥材的簡單復(fù)合，而是將中藥有目的、有原則的配伍組合，使群藥成為一個(gè)新的有機(jī)整體。如清代名醫(yī)徐大椿所說，“方之既成，可使藥各全其性，亦可使藥各失其性，有大權(quán)焉”。正是由于具有這種整體性與復(fù)雜性，才使得闡明中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制非常有挑戰(zhàn)性。為深入了解和認(rèn)識中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，筆者對其研究理論與研究方法作一綜述。

1 中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究理論

隨著分析檢測技術(shù)的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化研究的深入，不斷有學(xué)者從不同的層次和角度提出了新的方法及思路來研究中藥復(fù)方基礎(chǔ)。趙立春等［1］提出了“霰彈理論”，認(rèn)為中藥復(fù)方并不是由單味藥有效成分來完成治療任務(wù)的，而是通過多種物質(zhì)的相互配伍、協(xié)同作用發(fā)揮強(qiáng)大的治療效果。張亞剛等［2］則根據(jù)生物活性物質(zhì)共軛亞油酸（CLA）生理活性的能量理論提出了中藥有效組分能量協(xié)同作用機(jī)制的“藥物能量理論”，并認(rèn)為疾病的產(chǎn)生是機(jī)體的生化反應(yīng)出現(xiàn)了一個(gè)或多個(gè)環(huán)節(jié)的缺失，而中藥復(fù)方若能協(xié)同提供每一環(huán)節(jié)的相關(guān)能量，恢復(fù)這一完整的生化反應(yīng)進(jìn)程，疾病最終將被治愈。吳水生等［3］提出“疾病濃縮效應(yīng)假說”，指出復(fù)方減輕病痛、產(chǎn)生治療疾病的作用是復(fù)方中的多種成分，在一定的有效藥物濃度范圍內(nèi)，以低于其相應(yīng)單體成分治療劑量進(jìn)入人體后，通過協(xié)同、整合等形式的“疾病縮減效應(yīng)”，有選擇性地反復(fù)作用于與某種疾病有關(guān)的多個(gè)直接靶點(diǎn)和間接靶點(diǎn)而達(dá)到治療效果。而賈曉斌等［4］基于對傳統(tǒng)中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)和現(xiàn)代中藥復(fù)方創(chuàng)新物質(zhì)基礎(chǔ)的認(rèn)識，提出了“功能組分”這一觀點(diǎn)。同時(shí)認(rèn)為中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)是由有效組分和功能組分共同構(gòu)成的有序整體結(jié)構(gòu)，具有“三個(gè)層次多維結(jié)構(gòu)”。此外，還有“一個(gè)結(jié)合、兩個(gè)基本講清、三個(gè)化學(xué)層次、四個(gè)藥理水平”廣義成分論［5］、體內(nèi)直接物質(zhì)基礎(chǔ)的假說［6］等。這些理論和假說的出現(xiàn)，從多角度、多層次闡述了中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，極大地促進(jìn)了中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的發(fā)展。

2 中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的研究方法

2.1 血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)的研究

中藥血清學(xué)研究方法在1984年首先由田代真一提出［7］，它被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)研究。血清藥理學(xué)是將受試藥物經(jīng)口給予動(dòng)物后以含藥血清代替中藥粗提物作為藥物源加入離體反應(yīng)系統(tǒng)中研究其藥理作用的實(shí)驗(yàn)方法。血清藥物化學(xué)是指給動(dòng)物口服中藥復(fù)方后，待達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后，取含藥血清，通過高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜聯(lián)用（MS）以及各類儀器聯(lián)用分析技術(shù)等，進(jìn)行藥物化學(xué)研究，以闡明其產(chǎn)生藥效的化學(xué)成分種類和含量，進(jìn)而揭示中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［8］。付克等［9］根據(jù)中藥血清藥物化學(xué)理論和方法，對大鼠口服給予柴芩清肝湯后的血中移行成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其移行成分有14個(gè)，8個(gè)為復(fù)方中原型成分，6個(gè)為代謝產(chǎn)物。王喜軍［10］通過將越橘乙醇提取物經(jīng)口服給藥1 h后，取動(dòng)物門靜脈血制備血清樣品，通過3D-HPLC及柱色譜分離、波譜鑒定等方法，鑒定出吸收入血的直接作用物質(zhì)為熊果苷和秦皮苷，其他成分未在血清中檢出，說明這兩種成分是越橘主要藥理活性成分。He等［11］通過對服用了七味消炎湯的大鼠血清進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生消炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)為毛蕊異黃酮葡萄糖苷-7、番瀉苷A、蘆薈大黃素。

中藥血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)研究方法排除了復(fù)方制劑或其浸膏本身復(fù)雜的理化性質(zhì)（如電解質(zhì)、酸堿度、滲透壓等）的干擾，扣除了消化道中不能入血的藥物成分，避免了體外實(shí)驗(yàn)中諸多因素的影響，既簡化了中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)，又能較準(zhǔn)確、真實(shí)地反映復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。但是由于中藥復(fù)方口服后采集到的血清藥物濃度一般非常低，尤其是與血漿蛋白結(jié)合率較高的成分和微量成分，這給藥物的檢測和藥理實(shí)驗(yàn)提出了更高的要求［7,12-13］。

2.2 拆方研究

拆方研究是以中醫(yī)基本理論為指導(dǎo)，根據(jù)中藥復(fù)方組方原則進(jìn)行分拆，逐步減去復(fù)方中的一味或幾味中藥以觀察療效變化，逐漸縮小研究范圍，最終明確方中某味藥所處地位和作用的一種方法。研究目的主要有：闡明復(fù)方配伍的科學(xué)性，確定方中起主要作用的藥物或有效成分，尋找方劑中藥物的最佳配伍比例，精簡方劑推動(dòng)新藥研究工作。如從“當(dāng)歸龍薈丸”中發(fā)現(xiàn)“青黛”是起主要作用的，然后又從“青黛”中分離出“靛玉紅”，而成為一個(gè)新藥［14］。陳紅海［15］按功用將補(bǔ)陽還五湯“補(bǔ)氣活血通絡(luò)”的整體拆分為補(bǔ)氣活血組、活血通絡(luò)組和補(bǔ)氣通絡(luò)組，研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)陽還五湯全方和拆方均對腦缺血引起的海馬組織損傷有一定療效，其中以補(bǔ)陽還五湯全方作用最明顯，補(bǔ)氣活血組和補(bǔ)氣通絡(luò)組次之，活血通絡(luò)組最差，說明補(bǔ)陽還五湯中的補(bǔ)氣藥可能是其抗腦缺血損傷作用的最有效組分。中藥復(fù)方的拆方研究，對復(fù)方中各藥味對全方的貢獻(xiàn)度進(jìn)行了評估，對于確認(rèn)發(fā)揮作用的藥效物質(zhì)研究來說，是一項(xiàng)關(guān)鍵工作。但拆方研究只能在一定程度上揭示復(fù)方的藥效基礎(chǔ)，其結(jié)果也只能是中藥復(fù)方的部分藥效基礎(chǔ)；做到了方病對應(yīng)，卻無從做到方證對應(yīng)。此外，現(xiàn)行的拆方分析方法在一定程度上脫離了中醫(yī)理論，特別是病機(jī)、證候理論，因而研究的結(jié)果難以形成普遍規(guī)律。

2.3 代謝組學(xué)研究

代謝組學(xué)是以組群指標(biāo)分析為基礎(chǔ)，利用現(xiàn)代分析儀器以數(shù)據(jù)處理和高通量檢測為手段，以信息搭建和系統(tǒng)整合為目標(biāo)，對生物體體液中內(nèi)源性的相對低分子量代謝產(chǎn)物（代謝組）及其代謝途徑進(jìn)行定性定量研究的一種方法［16-19］。代謝組學(xué)是20世紀(jì)90年代中期發(fā)展起來的一門新學(xué)科，是繼基因組學(xué)后系統(tǒng)生物學(xué)的又一重要領(lǐng)域。有專家指出［20-22］，代謝組學(xué)是描述生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其對內(nèi)因和外因變化應(yīng)答規(guī)律的科學(xué)。所以使用代謝組學(xué)研究能夠很好地反映疾病和藥物對機(jī)體產(chǎn)生的生理效應(yīng)，并能對中藥復(fù)方療效做出整體評價(jià)，包括中藥復(fù)方治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制研究、中藥復(fù)方作用于病癥模型的整體評價(jià)以及中藥復(fù)方的安全性評價(jià)［23］。Jiang等［24］利用HPLC-ESI-MS對麝香保心丸在小鼠體內(nèi)的代謝情況研究，發(fā)現(xiàn)有17個(gè)原型成分和4個(gè)代謝成分。Bi等［25］基于核磁共振的代謝組學(xué)研究方法，對氣虛患者服用補(bǔ)中益氣丸前后的血漿內(nèi)源性代謝物的變化進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)中益氣丸改善氣虛患者疲勞和記憶力下降等癥狀與其調(diào)節(jié)γ-羥基丁酸、磷脂酰膽堿和血氨濃度有關(guān)?？梢?，代謝組學(xué)能較為全面地揭示出中藥及其復(fù)方治療疾病時(shí)在體內(nèi)發(fā)生的一系列生物化學(xué)變化，有利于闡明中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.4 譜效學(xué)研究

中藥譜效學(xué)是基于中醫(yī)藥現(xiàn)代研究理論，以中藥指紋圖譜為基礎(chǔ)，藥物效應(yīng)為主要內(nèi)容，應(yīng)用生物信息學(xué)方法去說明中藥指紋圖譜與中藥療效內(nèi)在聯(lián)系的一門學(xué)科。中藥指紋圖譜具有整體性與模糊性，相較于使用單一成分或者目標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制而言，更具科學(xué)性和全面性。劉旭等［26］將三七藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與色譜指紋圖譜有機(jī)結(jié)合在一起，闡明了三七指紋圖譜中化學(xué)成分的變化與療效差異的必然聯(lián)系，并通過建立譜效學(xué)研究數(shù)理模型完善了中藥材治療心肌缺血的評價(jià)方法。段曉鵬［27］、鄧俊林［28］以補(bǔ)陽還五湯水提醇沉液為模型藥物，結(jié)合中藥指紋圖譜以及抗腦缺血癥神經(jīng)細(xì)胞損傷的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，得到了補(bǔ)陽還五湯水提醇沉液抗腦缺血癥神經(jīng)細(xì)胞損傷的一系列譜效學(xué)參數(shù)，并通過比較各靶點(diǎn)的作用系數(shù)表明各成分作用靶向與強(qiáng)度各有不同。中藥譜效學(xué)很好地解決了指紋圖譜只能孤立于生物活性之外去反映中藥化學(xué)成分的不足［29-30］，能更好地反映中藥復(fù)方的質(zhì)量，是解決中藥質(zhì)量控制的良方。

2.5 其他方法

此外，還有常規(guī)的藥理活性指導(dǎo)下的有效部位和有效成分分離以及新興的基于芯片技術(shù)的高通量篩選技術(shù)等。

3 結(jié)語

隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，越來越多的技術(shù)和方法也逐漸得到廣泛應(yīng)用，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因芯片技術(shù)、Caco-2細(xì)胞技術(shù)［31-33］、化學(xué)計(jì)量學(xué)［34-35］、計(jì)算機(jī)模擬等，這些都被廣泛應(yīng)用于復(fù)方物質(zhì)的基礎(chǔ)研究，但由于中藥復(fù)方的成分過于復(fù)雜，到目前為止，很少有中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)得到了完全的確定，但是這些技術(shù)和方法對于中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的研究起到的作用仍是舉足輕重的，再加上與醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、數(shù)學(xué)以及計(jì)算機(jī)學(xué)等多學(xué)科的相互融合，在中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下，相信我國的中藥復(fù)方研究最終會取得突破性進(jìn)展，最終為中藥現(xiàn)代化做出巨大貢獻(xiàn)。

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Present situation of the research on material basis of traditional Chinese medicine compound

WANG MinSHEN BingbingLUO JuanYANG YupeiYU JuanZHOU QiCHEN ShenhuangHu'nan University of Chinese Medicine,Hu'nan Province,Changsha410208,China

Chinese medicine compound is the concrete manifestation of TCM theory.Elucidating the substantial basis is the key to the modernization and internationalization of Chinese medicine.With the rapid development of modern analysis instruments and technologies,a variety of new theories and methods are emerging,which make the research of TCM compound material step into a new level.Only when medicinal efficacy and mechanism of Chinese herbal compound is cleared,we can guarantee drug safety and quality control.In this paper,the basis of TCM compound material theories and methods are reviewed so as to provide reference for the further research about it.

Chinese medicine compound;Substantial basis;Review

R28[

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]1673-7210淵2015冤04淵a冤-0031-04

2014-12-25本文編輯：張瑜杰）

湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（編號201311）。

王敏（1989.8-），男，湖南中醫(yī)藥大學(xué)2013級藥物化學(xué)專業(yè)在讀碩士研究生。

陳勝璜（1964.12-），男，教授，湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室主任，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥及其復(fù)方活性成分研究。