■蘇麗娟 高新浩 王石壘 宋安東 王文博

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動(dòng)物基因工程實(shí)驗(yàn)室和能源微生物實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州 450002；2.青島根源生物集團(tuán)，山東青島 266061)

木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)是自然界中存在量最大的一類清潔可再生資源，但它是由木質(zhì)素、纖維素和半纖維素組成的復(fù)雜立體網(wǎng)狀聚合體，這種特殊結(jié)構(gòu)使植物體具有抗生物降解的各種特性。白蟻、木食性甲蟲、切葉蟻等昆蟲能夠?qū)⒛举|(zhì)纖維素類生物質(zhì)作為唯一的食物來源，并具有降解和轉(zhuǎn)化木質(zhì)纖維素的能力，是自然界中協(xié)助碳循環(huán)的重要節(jié)肢動(dòng)物[1]。纖維素酶的重要來源之一是動(dòng)物，研究人員在越來越多的節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了內(nèi)源性的纖維素酶。其中，天牛屬鞘翅目，幼蟲生活于木材中，蛀食植物的木質(zhì)部，具有很強(qiáng)的消化木質(zhì)纖維素能力。近年來有多位研究者從天牛腸道內(nèi)篩選到可降解纖維素的微生物或者分離純化到具有木質(zhì)纖維素酶活性的蛋白質(zhì)，如Sugimura等(2003)、Wei等(2006)分別從黃星天牛Psacothea hilaris、桑天牛Apriona germari幼蟲腸道中純化出β-1,4-葡聚糖酶[2-3]，劉晨娟等(2010)從桑肩粒天牛腸道內(nèi)篩選到一株可降解纖維素的枯草芽孢桿菌[4]。因此，天牛可作為木質(zhì)纖維素降解菌的菌源進(jìn)一步研究。

芽孢桿菌能改善動(dòng)物的生長性能并有益于動(dòng)物健康，但其作用機(jī)理目前還知之甚少，主要包括三方面的假設(shè)：①改善腸道功能[5]；②具有抗菌活性[6]；③刺激固有或/和體液免疫系統(tǒng)[7]。由于枯草芽孢桿菌具備強(qiáng)的抗逆性結(jié)構(gòu)——芽孢，可以保證其在與飼料混合制粒、接觸飼料藥物和礦物元素等物質(zhì)時(shí)產(chǎn)生較低損失，進(jìn)而保證其在使用過程中的活力[8]。另外枯草芽孢桿菌還可以產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、淀粉酶等消化酶和拮抗病原微生物，這些功能可以增強(qiáng)腸道微生態(tài)系統(tǒng)逐步成熟、黏膜免疫以及系統(tǒng)免疫發(fā)育不健全雛雞的腸道微生態(tài)發(fā)育。芽孢桿菌是廣泛分布于自然界的需氧性細(xì)菌，在機(jī)體腸道內(nèi)通過生物奪氧作用促進(jìn)厭氧有益微生物的生長，并且芽孢桿菌在生長繁殖的過程中能產(chǎn)生抑制某些有害微生物的代謝產(chǎn)物，有助于恢復(fù)腸道微生態(tài)平衡，因而其研究和應(yīng)用價(jià)值受到廣泛重視。

本試驗(yàn)用纖維素-剛果紅培養(yǎng)基從桃紅頸天牛幼蟲腸道內(nèi)微生物篩選到了一株高纖維素酶活性枯草芽孢桿菌，并對其飼料制粒的抗逆性進(jìn)行了探討和其飼料制劑在肉仔雞生產(chǎn)中飼料潛能進(jìn)行了研究，可經(jīng)過后續(xù)的工業(yè)化擴(kuò)大培養(yǎng)或誘變育種后改善其應(yīng)用性能，為飼料生產(chǎn)提供有效的抗生素替代物，也為生物質(zhì)資源的轉(zhuǎn)化利用提供高效的微生物菌種。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)5.00 g/l、NH4H2PO40.50 g/l、K2HPO42.00 g/l、MgSO42.00 g/l、MnSO4·H2O 0.002 5 g/l、FeSO4·7H2O 0.007 5 g/l、NaCl 0.30 g/l、pH值6.8。初篩培養(yǎng)基：CMC-Na 1.88 g/l、K2HPO40.50 g/l、MgSO40.25 g/l、瓊脂 20.00 g/l、剛果紅0.2 g/l、pH值7.4。復(fù)篩培養(yǎng)基：CMC-Na 5.00 g、牛肉膏5.00 g、蛋白胨1.00 g、秸稈粉5.00 g、NaCl 5.00 g、pH值7.4。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

桃紅頸天牛(采集于鄭州市果樹研究所的桃樹)；不同齡的白羽肉雞。

1.2 菌株篩選

1.2.1 初篩

在超凈工作臺(tái)中解剖天牛幼蟲，無菌分離出天牛腸道內(nèi)容物制成菌懸液，4℃靜置3 h。吸取50 μl腸道菌懸液上清，加至裝有3 ml富集培養(yǎng)基的試管中，37℃200 r/min搖床培養(yǎng)10 h。將富集培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋，涂布于初篩平板，37℃倒置培養(yǎng)2～3 d。挑取長勢較好、水解圈明顯的菌落用三區(qū)畫線法和涂平板法交替分離單菌落。將分離到的單菌落接種到斜面種子培養(yǎng)基中4℃保藏。

1.2.2 初篩培養(yǎng)基的優(yōu)化

選擇最佳的CMC-Na用量、pH值和最適培養(yǎng)時(shí)間，按照表1所示三因素水平優(yōu)化初篩培養(yǎng)基，用接種針蘸取少量稀釋菌液在培養(yǎng)基的上下左右4個(gè)區(qū)域各自點(diǎn)4個(gè)點(diǎn)，37℃倒置培養(yǎng)5 d，每0.5 d檢測一次水解圈直徑，并用A=d/t[d：透明圈直徑(cm)；t：培養(yǎng)時(shí)間(d)]計(jì)算相對酶活。

表1 CMC-Na用量、pH值和培養(yǎng)時(shí)間3因素水平

1.2.3 揺瓶復(fù)篩

將選取的相對酶活較高的菌株進(jìn)行10 h富集培養(yǎng)，再按1%的接種量搖瓶復(fù)篩，37℃，160 r/min震蕩培養(yǎng)，每24 h取1次樣測定酶活，連續(xù)測定5 d。

1.3 酶活測定

1.3.1 FPA酶活測定

將濾紙放入硅膠干燥器中平衡24 h后制成寬1 cm、質(zhì)量(50±0.5)mg的濾紙條，折成M形豎直放入試管底部。加入1.8 ml pH值4.8的0.1 mol/l的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液。取菌株發(fā)酵液4 000 r/min離心10 min，上清即為原酶液。加入0.2 ml適當(dāng)稀釋的原酶液，使試管內(nèi)溶液浸沒濾紙、蓋塞、搖勻，50℃水浴60 min，加入2.0 ml DNS試劑搖勻。煮沸10 min滅活、顯色，取出后迅速冷卻至室溫，加蒸餾水至15 ml，550 nm波長測量OD值。

1.3.2 CMC酶活測定

操作過程同濾紙酶活，不同之處是將濾紙改為1.8 ml 1%的羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，50℃水浴30 min。酶活定義：在上述條件下，每分鐘產(chǎn)生1 μmol葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位(U/ml)。根據(jù)試驗(yàn)測得的OD值，利用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出A(還原糖量，mg)，再利用酶活公式X=A×5×n×1 000/(180×t)求出酶活(X：羧甲基纖維素酶酶活力；n：試樣的稀釋倍數(shù)；t：反應(yīng)時(shí)間，min)。

1.4 菌落16S rDNA PCR與測序

上下游引物P1，P2(P1，5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGA ACG AAC GCT-3’；P2，5’-TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT TCA CCC C-3’)各1 μl、含有目的菌的純水3 μl，加純水至50 μl。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。瓊脂糖凝膠，凝膠成像系統(tǒng)照相，割膠回收，PCR產(chǎn)物送交上海生工測序。

1.5 菌株發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)

將篩選到的BSAB1306菌株先接種至3.0 ml的LB試管中，37 ℃、200 r/min的搖床培養(yǎng)8～12 h，再按1∶100的比例接種至50 ml的LB培養(yǎng)基的錐形瓶中，37℃、200 r/min培養(yǎng)12 h后轉(zhuǎn)接至5 L優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，37℃、800 r/min、pH值7.0、通氣量10 L/min的穩(wěn)定條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，并間隔一定時(shí)間提取適量發(fā)酵液，離心取上清液測定酶活力。

1.6 菌株對飼料制粒的耐受性及pH值2.0胃蛋白酶對菌株存活的影響

在白羽肉雞核心飼料中加入所篩選菌株，通過攪拌、調(diào)質(zhì)和制粒后，取10組樣品，每組不少于35個(gè)樣，每個(gè)樣品不少于5 g[9]。樣品分別在不同溫度下密封放置1、10、20、30、40、50 d，檢測其中菌株的含量變化，并將樣品中菌株含量與配方中菌株含量對比，每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，取平均值。取200萬CFU/g的菌株，置入pH值2.0胃蛋白酶濃度0.32%的溶液中，39℃處理不同時(shí)間，檢測其中菌的含量變化，每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.7 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇體重相近的20只30日齡白羽肉雞，先預(yù)飼無BSAB1306菌株飼料72 h，空腹2 h，然后飼喂含BSAB1306菌株飼料（200萬CFU/g），在禁食（自由飲水）1.5 h后進(jìn)行屠宰。

1.8 BSAB1306菌株的腸道萌發(fā)率試驗(yàn)及其在雞糞便中芽孢的變化

取白羽肉雞的十二指腸、小腸、大腸食糜，分別分為兩份，一份直接平板計(jì)數(shù)，另一份100℃水浴處理20 min后平板計(jì)數(shù)，每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，取平均值。萌發(fā)率=[1-(高溫處理后菌株含量/未處理時(shí)菌株含量)]×100%。飼喂后不同時(shí)間分別收集雞糞樣品，經(jīng)勻漿后，75℃熱處理20 min，生理鹽水稀釋，LB培養(yǎng)基平板涂布，37℃培養(yǎng)36 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。雞糞樣品芽孢含量(CFU/g)=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×10×1 000/6。

1.9 復(fù)合芽孢桿菌制劑對肉雞腸道中微生物區(qū)系及生產(chǎn)性能的影響

試驗(yàn)于2013年6月在山東省濰坊地區(qū)邵家雞場進(jìn)行，共有8棟雞舍的白羽肉雞參與試驗(yàn)，每棟雞舍約20 000只雞，遵循正常的用藥程序和免疫程序，8棟雞舍隨機(jī)分為對照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組在用藥2 h后添加復(fù)合芽孢桿菌制劑。試驗(yàn)周期從第2周齡、第3周齡和第5周齡選擇，每周齡第7 d采樣分析。每次采樣每棟雞舍隨機(jī)取4只活雞帶回實(shí)驗(yàn)室，屠宰后取盲腸食糜，分析盲腸食糜中大腸桿菌菌落數(shù)目、微生物菌體蛋白和氨態(tài)氮水平；同時(shí)記錄每棟雞舍的生產(chǎn)性能，包括死淘率、胴體重和料肉比。

1.10 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Microsoft Excel初步處理后,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，并采用LSD法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單菌落分離及初篩及纖維素酶活

通過多次反復(fù)在初篩培養(yǎng)基上涂平板、劃線，挑選出十一株水解圈明顯、長勢較好的菌落進(jìn)行種子保存。通過連續(xù)5 d培養(yǎng)得到不同配比的培養(yǎng)基的相對酶活，用SPSS提供的一般線性模型的“Univariate”過程，對其進(jìn)行方差分析。各因素對試驗(yàn)結(jié)果的重要順序依次為時(shí)間＞CMC-Na＞pH值，綜合各種因素，確定其最適CMC-Na用量為1.88 g/l，pH值為7.4，培養(yǎng)時(shí)間為1 d。篩選到長勢較好的11株菌的CMC酶活性和FPA酶活性見表2，其中4、6號的CMC和FPA酶活最高。

表2 11株菌株CMC酶活、FPA酶活(U/ml)

2.2 菌落形態(tài)和16S rDNA PCR

其中酶活較高的4、6號菌株的菌落形態(tài)、顏色及革蘭氏染色等理化性質(zhì)如表3所示。并對其16S rDNA進(jìn)行菌落PCR擴(kuò)增，瓊脂糖電泳圖見圖1，PCR產(chǎn)物送上海生工測序，測序的結(jié)果通過NCBI-BLAST的序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)彼此相似度為99%，且與Gen Bank數(shù)據(jù)庫中的枯草芽孢桿菌的基因序列相似度達(dá)到99%。故確定它們?yōu)榭莶菅挎邨U菌，將6號命名為BSAB1306。

表3 4號和6號菌株理化性質(zhì)

圖1 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果

2.3 BSAB1306菌株發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)后的酶活

對BSAB1306菌株上發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)后的酶活進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)其CMC酶活性由培養(yǎng)前的68.27 U/ml提高到163.86 U/ml，相關(guān)的木聚糖酶、β-葡聚糖酶、中性蛋白酶和α-淀粉酶活性分別是9.20、21.10、216和723 U/ml。

2.4 BSAB1306菌株對飼料制粒的耐受性以及菌株在腸道萌發(fā)率試驗(yàn)

BSAB1306菌株耐受飼料制粒試驗(yàn)表明該菌種通過飼料制粒后，在不同的溫度、不同時(shí)間保存后菌株的菌量損失較小，不會(huì)影響到配方成分的效果發(fā)揮(見表4)。該菌株在十二指腸萌發(fā)率為94.6%，在小腸萌發(fā)率為80.4%，在大腸的萌發(fā)率為45.1%，能達(dá)到定點(diǎn)萌發(fā)，可在相應(yīng)位置發(fā)揮相應(yīng)的作用，且芽孢菌營養(yǎng)體在大腸又開始形成芽孢。

表4 BSAB1306菌株在不同溫度、時(shí)間下的成活率(%)

2.5 pH值2.0胃蛋白酶對BSAB1306菌株存活率及肉雞糞便中菌株芽孢變化的影響

對BSAB1306菌株用pH值2.0值、胃蛋白酶0.32%的處理不同時(shí)間后產(chǎn)品中菌量和0 min(對照)差異并不顯著，說明BSAB1306菌株能以較高存活率通過動(dòng)物的胃部，能夠耐受一般胃液的消化(見表5)。從圖2可以看出，試驗(yàn)組白羽肉雞飼喂芽孢桿菌3 h后，雞糞中開始檢測到飼喂芽孢的存在，24 h腸道中的芽孢排出達(dá)到最高峰，以后糞便中的芽孢數(shù)成下降趨勢，直至120 h后，腸道中的芽孢基本全部排出，證明芽孢桿菌在肉雞的腸道中有所滯留。排出的BSAB1306菌株芽孢的總數(shù)為(30.63±2.72)×108CFU/g，排出的芽孢總數(shù)為飼喂芽孢總數(shù)的3.06倍，表明該菌株在肉雞的腸道內(nèi)萌發(fā)繁殖后又形成了芽孢，并最終排出體外。

表5 pH值2.0胃蛋白酶對BSAB1306菌株存活的影響（×109個(gè)/ml）

圖2 不同取樣時(shí)間試驗(yàn)組雞糞樣品中芽孢的數(shù)量

2.6 BSAB1306菌株復(fù)合制劑對肉雞腸道中微生物區(qū)系及生產(chǎn)性能的影響

在遵循正常用藥程序的白羽肉雞日糧中添加BSAB1306菌株復(fù)合制劑后，腸道中大腸桿菌及生產(chǎn)性能的表現(xiàn)見表6，其中第2、第3和第5周齡試驗(yàn)組雞腸道食糜中大腸桿菌的數(shù)量顯著低于對照組(P＜0.05)，表明日糧中添加BSAB1306菌株復(fù)合制劑顯著降低了白羽肉雞盲腸食糜中大腸桿菌的數(shù)量。腸道食糜微生物菌體蛋白含量從側(cè)面反映出腸道微生物的總數(shù)，第2和第3周齡試驗(yàn)組腸道食糜中微生物菌體蛋白含量顯著高于對照組(P＜0.05)，表明BSAB1306菌株復(fù)合制劑顯著降低了第2周齡盲腸食糜中微生物的數(shù)量，分析認(rèn)為BSAB1306菌株復(fù)合制劑可能促進(jìn)了除大腸桿菌外其它微生物的生長，從而有益于動(dòng)物健康。而飼料中添加BSAB1306菌株復(fù)合制劑后白羽肉雞的死淘率和料肉比有所減少、酮體重有所增加，但差異不顯著，表明其能夠通過降低腸道大腸桿菌數(shù)量改善腸道微環(huán)境，提高雞的生產(chǎn)性能。

表6 BSAB1306菌株復(fù)合制劑對不同周齡肉雞腸道中微生物區(qū)系及生產(chǎn)性能的影響

3 討論

3.1 一株高纖維素酶活菌株的篩選

目前已經(jīng)有多位研究者報(bào)道了天牛腸道內(nèi)的高纖維酶活性，如星天牛Anoplophora chinensis和松墨天牛Monochamus alternatus Hope等[10-11]。天牛和食木白蟻均以木材為食，木材中纖維素含量較高，而維生素、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成份含量較低。研究表明，天牛對粗纖維的消化率為12%～57%，白蟻對粗纖維的消化率為65%～99%。而桑粒肩天牛和高等白蟻腸道微生態(tài)結(jié)構(gòu)較為相似[12]。也有從天牛腸道內(nèi)分離到可降解纖維素微生物的報(bào)道，表明天牛腸道內(nèi)木質(zhì)纖維素的降解依賴與天牛內(nèi)源性木質(zhì)纖維素酶和腸道共生微生物的共同作用，因此天牛腸道微生物也是尋找降解木質(zhì)纖維素酶的一個(gè)重要來源。

3.2 BSAB1306菌株的飼料制劑的耐受性探討

本試驗(yàn)從桃紅頸天牛幼蟲腸道中篩選到一株CMC酶活較高的枯草芽孢桿菌，經(jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)纖維素酶活性遠(yuǎn)高于同類昆蟲來源的微生物[13]，又由于枯草芽孢桿菌可自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等酶類，在消化道中與動(dòng)物體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用，同時(shí)其芽胞是一種致密的蛋白結(jié)構(gòu)，將菌體的完整包裹在其中，可克服飼料制粒時(shí)存在高溫、高濕、高壓及物理剪切等不利于普通微生物的生長因素，而BSAB1306菌株飼料制粒后在50℃下保存50 d菌株存活率仍能達(dá)到94.58%，表現(xiàn)出很強(qiáng)的耐熱、耐物理剪切力的能力。動(dòng)物的消化道多為酸性環(huán)境，尤其胃內(nèi)pH值更低，大多數(shù)微生物不能在酸性環(huán)境中存活，而BSAB1306菌株以芽孢的形式存在能夠耐受一般濃度的胃液消化，pH值、胃蛋白酶對菌株存活率影響不大。不萌發(fā)的枯草芽孢菌處于休眠狀態(tài)，只有在十二指腸、小腸中脫去芽孢時(shí)候才能發(fā)揮應(yīng)有的作用，該菌株在十二指腸的萌發(fā)率為94.6%，萌發(fā)后的芽孢桿菌以營養(yǎng)體的形式存在，有較強(qiáng)的產(chǎn)酶、產(chǎn)酸、抑菌能力，故該菌株具有極高的制作飼料的潛能。

3.3 BSAB1306菌株復(fù)合制劑對肉雞腸道中微生物區(qū)系及生產(chǎn)性能的影響

本試驗(yàn)分析了BSAB1306菌株復(fù)合制劑對白羽肉雞腸道微生物區(qū)系的影響，結(jié)果表明BSAB1306菌株復(fù)合制劑可改善了腸道微生物區(qū)系和微生物菌體蛋白含量。Vila等(2009)證明給肉仔雞飼喂東洋芽孢桿菌可抑制腸炎沙門氏菌的生長，表明枯草芽孢桿菌制劑可以改善白羽肉雞的腸道微生物環(huán)境[14]。本試驗(yàn)考察了BSAB1306菌株復(fù)合制劑對白羽肉雞生產(chǎn)性能的影響，結(jié)果沒有達(dá)到顯著性影響（P＞0.05）。有研究表明在日糧中添加芽孢能提高飼料轉(zhuǎn)化率[15]。然而，芽孢桿菌對動(dòng)物生長性能影響的結(jié)果并不一致，Edens(2003)報(bào)道在日糧中添加以枯草芽孢桿菌為主的益生菌雖然改善了42日齡肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率，但對體增重沒有影響[16]。而Vila(2009)等研究發(fā)現(xiàn)東洋芽孢桿菌的添加同時(shí)改善了42日齡肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和體增重[14]。芽孢桿菌對肉雞腸道微生物區(qū)系的作用效果和肉雞生產(chǎn)性能的影響不一致可能與添加的不同種芽孢桿菌菌株有關(guān)，也許與芽孢桿菌添加的方式和劑量等有關(guān)。另外，本試驗(yàn)中抗生素在日糧中的使用可能也影響了復(fù)合芽孢桿菌效果的發(fā)揮。因此本試驗(yàn)中篩選的枯草芽胞桿菌具有較高的纖維素酶活性，也具有很好的飼料應(yīng)用潛力，其復(fù)合制劑可以通過產(chǎn)生纖維素酶、蛋白酶等消化酶類有助于食物的消化；通過抑制大腸桿菌和提高總微生物含量改善腸道微生物群落結(jié)構(gòu)，改善肉仔雞的生產(chǎn)性能，可以作為益生菌添加到飼料中，改善畜禽的腸道生態(tài)結(jié)構(gòu)，替代抗生素的應(yīng)用。

4 結(jié)論

①本試驗(yàn)從桃紅頸天牛幼蟲腸道中篩選到一株酶活性高的枯草芽孢桿菌，即BSAB1306菌株。

②BSAB1306菌株通過飼料制粒、不同的培養(yǎng)時(shí)間和溫度及添加含有低pH值的胃蛋白酶溶液都對其存活率沒有明顯影響，并且該菌株在十二指腸有極高的萌發(fā)率。

③BSAB1306菌株復(fù)合制劑通過改善白羽肉仔雞腸道微生物區(qū)系進(jìn)而影響其生產(chǎn)性能，但該菌株的復(fù)合制劑是否可以替代抗生素，并對肉仔雞的生產(chǎn)性能產(chǎn)生明顯影響，還需要進(jìn)一步的研究。