■ 郭小云 吳 信， 謝春艷 李 彪周慧琦 姚 娟 印遇龍 ，3

(1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室南昌大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，江西南昌 330031；2.中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)中心，湖南長(zhǎng)沙 410125；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；4.安琪酵母股份有限公司湖北省酵母功能重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003)

血漿蛋白粉（SDPP）作為一種高檔原料在早期斷奶仔豬（21日齡左右）日糧中被廣泛應(yīng)用[1-2]。試驗(yàn)表明，在飼糧中用血漿蛋白粉替代魚(yú)粉、奶粉、乳清等，取得了良好的效果[3]，能增加仔豬的采食量、提高日增重、降低腹瀉率、緩解斷奶和環(huán)境的應(yīng)激作用、增強(qiáng)仔豬對(duì)疾病的抵抗力，提高仔豬的成活率[4-5]。但是我國(guó)飼料用血漿蛋白粉主要依靠進(jìn)口，價(jià)格昂貴。而且近年來(lái)，由于SDPP的生物安全、國(guó)外貨源不穩(wěn)定以及國(guó)內(nèi)血漿蛋白粉質(zhì)量良莠不齊等問(wèn)題，給飼料行業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了成本和安全等方面的諸多壓力。

酵母水解物（Yeast extract，YE）是酵母經(jīng)酶解破壁干燥而成，富含氨基酸、小肽、核酸/核苷酸、維生素等物質(zhì)。其中蛋白質(zhì)含量為35%～50%、氨基酸含量30%以上，核酸類(lèi)物質(zhì)8%以上、碳水化合物含量為35%～40%、脂質(zhì)含量為2.8%～3.0%。而且含有的多肽和氨基酸及某些風(fēng)味強(qiáng)化物質(zhì)5'-核苷酸，這些物質(zhì)能夠給食品提供較好的誘食性特征，另外，酵母水解物也含有天然的谷氨酸鹽。有文獻(xiàn)報(bào)道飼喂含酵母抽提物的日糧能促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，顯著改善仔豬飼料的轉(zhuǎn)化率[6]。因此，YE可增強(qiáng)斷奶仔豬對(duì)疾病的抵抗力、緩解仔豬的斷奶應(yīng)激[7]。

本試驗(yàn)?zāi)康脑谟谶M(jìn)一步研究YE替代SDPP對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血液生理生化指標(biāo)和激素水平以及腸道黏膜形態(tài)的影響，為其成分的改進(jìn)提供科學(xué)依據(jù)和參考，并為其推廣應(yīng)用提供支撐。

1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)動(dòng)物

選取21日齡的杜×長(zhǎng)×大三元雜交早期斷奶仔豬10欄，按母豬胎次和平均體重相近似的原則隨機(jī)分成2組，每組5個(gè)重復(fù)。

1.2 試驗(yàn)日糧與材料

試驗(yàn)日糧選用深圳比利美英偉集團(tuán)的乳豬飼料做為基礎(chǔ)日糧（基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1），分別添加3%血漿蛋白粉和3%谷氨酸和核苷酸強(qiáng)化的酵母水解物日糧[8]。谷氨酸和核苷酸強(qiáng)化的酵母水解物由安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 飼養(yǎng)管理

日常管理按豬場(chǎng)常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行，斷奶仔豬購(gòu)進(jìn)試驗(yàn)場(chǎng)后，開(kāi)始飼喂過(guò)渡日糧（基礎(chǔ)日糧），試驗(yàn)開(kāi)始后飼喂試驗(yàn)日糧，自由采食，自由飲水。試驗(yàn)期14 d，試驗(yàn)開(kāi)始和第14 d時(shí)稱(chēng)重；試驗(yàn)期間每周早上8:00結(jié)料，統(tǒng)計(jì)日采食量；記錄腹瀉發(fā)生情況。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

于試驗(yàn)第14 d時(shí)（35日齡），仔豬空腹12 h后，每欄選取1頭取前腔靜脈采血5 ml，置于普通離心管中，靜置30 min，3 500 r/min離心10 min，收集血清，置于-20℃保存待測(cè)。然后屠宰取樣，取出空腸段、并對(duì)肝臟和腎臟器官稱(chēng)重。

1.4 試驗(yàn)方法及測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 仔豬生長(zhǎng)性能

記錄每日每圈試驗(yàn)豬飼糧的供給量及剩余量，以測(cè)定仔豬生產(chǎn)性能，包括平均日采食量（ADFI），平均日增重（ADG），根據(jù)仔豬的ADFI和ADG計(jì)算料重比（F/G）；每天觀察試豬腹瀉情況，1頭試豬腹瀉1 d記為1次腹瀉。

腹瀉率（%）=[試驗(yàn)期內(nèi)腹瀉頭數(shù)/（試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)頭數(shù)）]×100[9]。

1.4.2 血清生理生化指標(biāo)

血清樣品4℃解凍后，取250 μl用CX4型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Beckman公司)測(cè)定血清生理生化指標(biāo)：堿性磷酸酶（ALP）、血清葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、膽固醇（CHO）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血清尿素氮（BUN）。相關(guān)生化測(cè)定試劑盒購(gòu)于北京利德曼生化股份有限公司。用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）在全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek Instuments INC.）上測(cè)定血清激素濃度，ELISA試劑盒購(gòu)于CUSABIO BIOTECH CO.,LTD。

1.4.3 血清激素水平

采用放射免疫法(RIA)測(cè)定血清中胰島素、三碘甲狀腺素（T3）、四碘甲狀腺素（T4）和皮質(zhì)醇水平。放射免疫試劑盒均購(gòu)自北京解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放射免疫研究所。

1.4.4 腸道組織學(xué)相關(guān)指標(biāo)

空腸組織切片的制備：2 cm的空腸段經(jīng)冰凍生理鹽水輕輕沖洗后用濾紙吸干水分，浸入到10%的中性福爾馬林溶液中固定，72 h后取出。將固定的樣本經(jīng)沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋等處理后切片，每段縱切各6張，厚度為5 μm，蘇木精-伊紅染色，中性樹(shù)膠封固。制備腸道組織切片。參照Phillips等[10]的方法觀察測(cè)定，每張切片選取10根最長(zhǎng)，且走向平直、伸展良好的絨毛，采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)作定量分析，測(cè)量其絨毛高度及與之相連的隱窩深度，各指標(biāo)取其平均數(shù)作為測(cè)定數(shù)據(jù)。

絨毛高度（VH）：從絨毛頂端至隱窩開(kāi)口處的垂直距離[5]；

隱窩深度（CD）：從隱窩開(kāi)口至隱窩基部的垂直距離[5]；

絨毛高度/隱窩深度比值（V/C值）。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel2003初步整理后用SPSS17.0的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，以P＜0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率（見(jiàn)表2）

表2 仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率

由表2可知，SDPP組和YE組的ADFI、ADG、F/G、器官指數(shù)和腹瀉率均差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 仔豬血清生化指標(biāo)（見(jiàn)表3）

表3 SDPP與YE對(duì)仔豬血清生理生化指標(biāo)的影響

從表3可知，SDDP和YE組各項(xiàng)生理生化指標(biāo)差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 血清激素水平(見(jiàn)表4)

表4 SDPP與YE對(duì)仔豬血清激素水平的影響

由表4可知，與SDPP組相比，YE組仔豬血清的T3含量顯著提高（P＜0.05），胰島素、T4和皮質(zhì)醇含量均差異不顯著（P＞0.05），但飼喂YE后，皮質(zhì)醇含量降低了15.13%。

2.4 腸道組織學(xué)相關(guān)指標(biāo)（見(jiàn)表5）

表5 SDPP與YE對(duì)仔豬腸道形態(tài)（空腸）的影響

由表5可知，與SDPP組相比，YE組仔豬空腸段的隱窩深度降低，且差異顯著（P＜0.05），絨毛高度和V/C值均差異不顯著（P＞0.05），但飼喂YE后，仔豬空腸的V/C值提高了24.10%。

3 討論

斷奶應(yīng)激過(guò)強(qiáng)可能會(huì)影響仔豬終生的生長(zhǎng)性能，斷奶期間發(fā)病率和死亡率都會(huì)上升。與SDPP相比，YE對(duì)仔豬的生長(zhǎng)性能和血清生化指標(biāo)均無(wú)顯著性差異。與文獻(xiàn)報(bào)道的SDPP完全被YE替代后不影響仔豬的生長(zhǎng)性能和其胃腸道發(fā)育[11]結(jié)果相符。

本試驗(yàn)所用的YE除了富含多種必需氨基酸外，還含有豐富的核酸和核苷酸。研究表明，核苷酸能顯著降低腹瀉率，改善仔豬腸道形態(tài)[12]；Superchi等研究也發(fā)現(xiàn)額外補(bǔ)充核苷酸顯著降低了仔豬斷奶后的皮質(zhì)醇激素水平進(jìn)而緩解斷奶應(yīng)激[13]，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

甲狀腺在動(dòng)物體內(nèi)是一個(gè)很重要的內(nèi)分泌器官，由他分泌的T3和T4是保證機(jī)體維持正常生理機(jī)能的重要激素，而且對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、物質(zhì)和能量代謝等都有重要作用[14]。本試驗(yàn)中，與SDPP組相比，YE組仔豬血清的T3含量顯著提高（P＜0.05），說(shuō)明飼料中添加YE可能更有利于仔豬生長(zhǎng)。

腸道形態(tài)學(xué)變化可直接反映腸道的屏障功能。完整的腸絨毛可有效阻止病原微生物及毒素的入侵。仔豬斷奶后發(fā)生大面積腹瀉與腸絨毛脫落、絨毛變短、隱窩加深有關(guān)。絨毛高度和黏膜厚度增加可使小腸吸收面積擴(kuò)大，有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，腸道隱窩深度可以反映細(xì)胞的生成率：隱窩變淺則表明細(xì)胞的成熟率上升，其分泌功能相應(yīng)增強(qiáng)[15]，在功能上將影響消化吸收機(jī)能[16]。

腸道V/C值通常可以反映小腸上皮細(xì)胞的更新代謝程度，可以綜合反映小腸的功能狀態(tài)：比值下降則表明消化吸收功能降低，并常常會(huì)伴隨腹瀉發(fā)生；若比值上升則表明消化吸收功能增強(qiáng)，并伴隨腹瀉率的下降[17]。

本試驗(yàn)中，與SDPP組相比，YE組仔豬空腸段的隱窩深度降低，且差異顯著（P＜0.05）；V/C值雖差異不顯著（P＞0.05），但提高了24.10%，與Carlson等[11]的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

對(duì)早期斷奶仔豬而言，日糧中添加3%SDPP與3%YE對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和血清生化指標(biāo)無(wú)明顯差異，但仔豬血清激素水平和腸道黏膜形態(tài)有一定的差異。因此，在早期斷奶仔豬階段，酵母水解物替代血漿蛋白粉具有可行性，但對(duì)后期生長(zhǎng)性能的影響有待進(jìn)一步研究。