■尹艷軍 郝延剛

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定 071000）

抗生素可非選擇性抑菌或殺菌來抑制腸道內(nèi)有害微生物的生長(zhǎng)[1]，作為具有防病促生長(zhǎng)的作用在集約化的畜牧業(yè)、工業(yè)化規(guī)模養(yǎng)殖中的飼料添加劑廣泛應(yīng)用[2-3]。但也造成了藥物殘留、耐藥細(xì)菌的產(chǎn)生、疾病難以控制、大規(guī)模疫病群發(fā)、疾病易感性上升、動(dòng)物免疫功能下降等危害[2-4]。因此，關(guān)于尋求抗生素替代品的研究勢(shì)在必行。有研究表明，在動(dòng)物基礎(chǔ)日糧中添加適量的微生態(tài)制劑可改善腸道內(nèi)環(huán)境，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，保護(hù)動(dòng)物健康生長(zhǎng)[5-7]。乳酸菌作為腸道內(nèi)重要的厭氧菌，具有較強(qiáng)的吸附能力，既能促進(jìn)免疫器官的快速發(fā)育，又可增強(qiáng)動(dòng)物的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，防止疾病的發(fā)生，是制備活菌制劑的優(yōu)良菌種[8-10]。本研究以凍干乳酸菌作為試驗(yàn)材料，研究其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響，為合理開發(fā)利用乳酸菌微生態(tài)制劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

微生態(tài)制劑：試驗(yàn)用微生態(tài)制劑為凍干乳酸菌(有效活菌含量≥1.0×109CFU/g)，由山東蔚藍(lán)生物科技有限公司提供。

試驗(yàn)飼料：商品日糧，購(gòu)于河北康達(dá)畜禽養(yǎng)殖有限公司。

動(dòng)物分組處理：1日齡AA肉仔雞400只（購(gòu)于北京大風(fēng)種禽公司），分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)雞舍，每個(gè)雞舍100只。其中Ⅰ雞舍為對(duì)照組，基礎(chǔ)日糧中不添加活菌微生態(tài)制劑，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ雞舍分別為低劑量、中劑量、高劑量組，基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、2.0%活菌微生態(tài)制劑凍干乳酸菌，飼養(yǎng)按常規(guī)方法進(jìn)行，試驗(yàn)期間各組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)開始后記錄每組肉雞死淘情況，每周日上午以各組為單位空腹稱重，計(jì)算每組雞均重、平均日增重、日采食量和料重比。

1.2.2 免疫器官指數(shù)

免疫器官指數(shù)的測(cè)定參照謝仲權(quán)等[11]的方法。于試驗(yàn)的第3、6周周日每個(gè)組分別隨機(jī)選取3只肉雞，剖殺，完整剔出胸腺、脾臟和法氏囊于電子天平上稱鮮重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

1.2.3 紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率和免疫復(fù)合物花環(huán)率的測(cè)定

參照易力等[12]測(cè)定方法。各組隨機(jī)選取3只肉雞分別于試驗(yàn)第3、6周周日心臟取血抗凝，Hank’s液洗滌紅細(xì)胞3次，調(diào)整紅細(xì)胞懸液濃度為1.25×107個(gè)/ml。酵母懸液、血清和紅細(xì)胞懸液各50 μl，37℃水浴30 min，搖勻加入25 μl 0.25%戊二醛靜置5 min。推片，干燥，甲醛固定，瑞氏染色10 min，水洗，晾干。計(jì)算200個(gè)紅細(xì)胞中形成花環(huán)的細(xì)胞百分率。測(cè)定紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率不加血清。

1.2.4 MTT法測(cè)定外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力

于試驗(yàn)第3、6周周日無菌采集肝素抗凝血2 ml，參照Mosmann T[13]和楊發(fā)龍等[14]研究方法對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力進(jìn)行測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)中所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行方差分析，差異顯著性用Duncan's新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

2.1 凍干乳酸菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

試驗(yàn)期間因病死亡情況：對(duì)照組死亡只數(shù)17只，低劑量組死亡11只，中、高劑量試驗(yàn)組分別死亡7只和5只。

2.1.1 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞均重的影響(見表1)

表1 凍干乳酸菌對(duì)肉雞均重的影響(g)

由表1可以得出，與對(duì)照組(Ⅰ組)相比，21 d時(shí)，低劑量組對(duì)肉雞均重影響不顯著（P＞0.05），中、高劑量組肉雞均重顯著提高了3.39%、3.87%，差異顯著（P＜0.05）；42 d時(shí)，所有處理組對(duì)肉雞均重的影響差異不顯著（P＞0.05）。由此可見，在對(duì)肉雞均重的影響方面，中、高劑量組在試驗(yàn)前期（1～21 d）階段對(duì)肉雞均重影響效果較好。

2.1.2 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞平均日增重的影響(見表2)

由表2可知，與對(duì)照組相比，各處理組對(duì)試驗(yàn)后期(22～42 d)及全期(1～42 d)肉雞平均日增重影響均不顯著(P＞0.05)；試驗(yàn)前期(1～21 d)，低劑量組對(duì)肉雞平均日增重影響差異不顯著(P＞0.05)，中、高劑量組肉雞平均日增重顯著提高了20.54%、18.93%(P＜0.05)。由此可見，在對(duì)肉雞平均日增重的影響方面，中、高劑量組在試驗(yàn)前期（1～21日齡）對(duì)肉雞影響效果較好。

表2 凍干乳酸菌對(duì)肉雞平均日增重的影響（g）

2.1.3 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞料重比的影響（見表3）

由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)前期（1～21 d）低劑量組對(duì)肉雞料重比的影響不顯著（P＞0.05），中、高劑量組肉雞的料重比顯著降低了5.85%、6.43%（P＜0.05）；試驗(yàn)后期（22～42 d）各處理組肉雞料重比差異均不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)全期（1～42 d），中劑量組料重比較對(duì)照組顯著降低4.90%（P＜0.05）。由此可知，試驗(yàn)全期中劑量的凍干乳酸菌可以顯著降低肉雞的料重比。

表3 凍干乳酸菌對(duì)肉雞料重比的影響

2.2 凍干乳酸菌對(duì)肉雞免疫功能的影響

2.2.1 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響（見表4）

表4 凍干乳酸菌對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表4可知，與對(duì)照組相比，在試驗(yàn)21 d時(shí)，低劑量組對(duì)肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高33.75%、30.00%（P＜0.05）；中劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高了35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05）；高劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高了32.80%、32.50%、29.57%（P＜0.05）。42日齡時(shí)，3種劑量組對(duì)肉雞法氏囊指數(shù)的影響均不顯著（P＞0.05）；低劑量組對(duì)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)影響均不顯著（P＞0.05），中劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著提高23.56%、32.95%（P＜0.05），高劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著提高了20.19%、34.09%（P＜0.05）。由此可見，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的凍干乳酸菌，可不同程度地提高肉雞的免疫器官指數(shù)。

2.2.2 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞紅細(xì)胞花環(huán)率的影響（見表5）

表5 凍干乳酸菌對(duì)肉雞紅細(xì)胞花環(huán)率的影響（%）

由表5可知，與對(duì)照組相比，21 d時(shí)，低劑量組的RBC-CR1顯著提高13.51%（P＜0.05），對(duì)RBC-IC的影響差異不顯著（P＞0.05）；中劑量組RBC-CR1顯著提高12.53%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了141.67%（P＜0.05）；高劑量組 RBC-CR1顯著提高 12.78%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了108.10%（P＜0.05）。42日齡時(shí)，低劑量組對(duì)RBC-CR1、RBC-IC影響差異均不顯著（P＞0.05）；中劑量組RBC-CR1顯著提高52.21%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了28.10%（P＜0.05）；高劑量組RBC-CR1顯著提高57.47%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了50.37%（P＜0.05）。

由此可知，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌均能提高紅細(xì)胞花環(huán)率。

2.2.3 不同劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響（見表6）

表6 凍干乳酸菌對(duì)肉雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響(OD570 nm)

由表6可知，與對(duì)照組相比，低劑量組在21、42日齡時(shí)對(duì)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異性影響均不顯著（P＞0.05），21日齡時(shí)，中、高劑量組T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著提高20%、12%（P＜0.05）；42日齡時(shí)，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著提高9.80%、8.61%（P＜0.05）。由此可見，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌，均可顯著提高肉雞的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。

3 討論

3.1 凍干乳酸菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

益生菌被動(dòng)物攝入后，主要以兩種形式進(jìn)入動(dòng)物胃腸道，一種以活菌形式直接進(jìn)入胃腸道，改善腸道內(nèi)環(huán)境，維護(hù)腸道微生態(tài)平衡；而另一種則以內(nèi)生孢子形式進(jìn)入胃腸道，復(fù)活后分泌多種酶類和抑制腸道致病菌多肽類物質(zhì)，參與飼料消化，起到抑菌預(yù)防疾病的作用[15]。大量試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加益生菌可不同程度地提高肉雞均重、平均日增重、降低料重比及死亡率等。唐志剛等[16]的研究結(jié)果表明，添加益生菌對(duì)肉雞前期（1～21日齡）增重、平均日增重較對(duì)照組分別提高了7.2%（P＜0.05），料重比降低了6.04%（P＜0.05）；后期(22～42日齡)平均日增重較對(duì)照組提高1.00%(P＜0.05)。趙新海等[17]的研究也得到了類似的結(jié)果，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加微生態(tài)制劑，可減少肉雞的死淘率。本研究結(jié)果表明，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加乳酸菌，試驗(yàn)前期(1～21日齡)高劑量組與對(duì)照組相比肉雞均重、日增重分別提高了3.87%、18.93%(P＜0.05)，料重比降低 6.43%(P＜0.05)。試驗(yàn)全期中劑量組料重比較對(duì)照組顯著性降低4.90%（P＜0.05）。與唐志剛等[16]、趙新海等[17]的研究結(jié)果相一致，肉雞生長(zhǎng)前期，消化系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，飼料中的乳酸菌在肉雞腸道內(nèi)定植后，分泌的酶類有助于飼料的消化，因而前期肉雞生產(chǎn)性能較對(duì)照組相比提高顯著，肉雞生長(zhǎng)后期已具備完善的消化系統(tǒng)，故乳酸菌對(duì)肉雞后期生長(zhǎng)性能影響效果不明顯。

3.2 凍干乳酸菌對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

作為禽類的重要免疫器官，胸腺、脾臟、法氏囊的發(fā)育狀態(tài)和機(jī)能的強(qiáng)弱直接決定禽類的免疫水平[18]。免疫器官重量的相對(duì)增加，可以反映出機(jī)體免疫水平的增強(qiáng)[2，19]。目前，大多數(shù)關(guān)于益生菌對(duì)免疫器官影響的研究結(jié)果都表現(xiàn)為促進(jìn)作用。張建梅等[2]的研究表明，復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉雞的法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于對(duì)照組。本試驗(yàn)中劑量組肉雞21日齡時(shí)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著高于對(duì)照組35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05），高劑量組3種免疫器官指數(shù)依次較對(duì)照組提高32.80%、32.50%、29.75%（P＜0.05），高劑量組對(duì)免疫器官指數(shù)的提升幅度更高。本試驗(yàn)與張建梅等的研究結(jié)果相比，免疫器官指數(shù)提高幅度較高，這可能與肉雞的品種、微生態(tài)制劑種類及飼養(yǎng)環(huán)境存在一定的關(guān)系。試驗(yàn)后期各組法氏囊指數(shù)差異性不顯著，可能是42日齡時(shí)各組肉雞的法氏囊均處于退化消失階段的原因。

3.3 凍干乳酸菌對(duì)肉雞紅細(xì)胞免疫功能的影響

紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)即通過紅細(xì)胞膜上的C3b受體實(shí)現(xiàn)紅細(xì)胞識(shí)別、黏附、殺傷抗原及加速清除免疫復(fù)合物的能力[14，20]。目前，關(guān)于微生態(tài)制劑對(duì)肉雞紅細(xì)胞免疫功能影響的研究報(bào)道雖然不多，但有關(guān)此方面的研究都表明微生態(tài)制劑能夠提高動(dòng)物機(jī)體的紅細(xì)胞花環(huán)率。司振書等[21]的研究結(jié)果表明，21日齡時(shí)，試驗(yàn)組E-C3bR和E-ICR比對(duì)照組高16.24%和19.93%，差異顯著（P＜0.05）。本試驗(yàn)21日齡時(shí)，中劑量試驗(yàn)組RBC-CR1和RBC-IC分別顯著高出對(duì)照組12.53%、141.67%，高劑量試驗(yàn)組RBC-CR1和RBC-IC分別較對(duì)照組提高12.78%、108.10%(P＜0.05)。與司振書等[21]的結(jié)果相比，本試驗(yàn)結(jié)果對(duì)RBC-CR1和RBC-IC花環(huán)率提升幅度不同，一方面可能是所用肉雞品種不同，紅細(xì)胞免疫活性不同；另一方面可能是所用微生態(tài)制劑不同，不同微生態(tài)制劑對(duì)紅細(xì)胞的刺激程度不同。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組RBC-CR1數(shù)值高于對(duì)照組，說明乳酸菌提高了機(jī)體的非特異性免疫，當(dāng)外界抗原入侵時(shí)，可結(jié)合更多的免疫復(fù)合物，清除抗原；中、高劑量試驗(yàn)組RBC-IC顯著高于對(duì)照組，說明機(jī)體免疫復(fù)合物含量高于對(duì)照組，因而紅細(xì)胞表面吸附的免疫復(fù)合物也明顯高于對(duì)照組。其原因可能是乳酸菌既作為抗原物質(zhì)刺激其它免疫器官，同時(shí)又改變了紅細(xì)胞的免疫功能。

3.4 凍干乳酸菌對(duì)肉雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力影響

T淋巴細(xì)胞是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫中占主導(dǎo)作用的免疫活性細(xì)胞，因此可以把外周血液中T淋巴細(xì)胞的數(shù)量作為評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)[22]。鐘德金等[23]的研究表明，微生態(tài)制劑的添加可提高蛋雞T淋巴細(xì)胞水平。本試驗(yàn)研究結(jié)果中、高劑量?jī)龈扇樗峋奶砑釉谠囼?yàn)全期均可顯著提高T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力（P＜0.05），與鐘德金等[23]研究結(jié)果相一致。說明乳酸菌能促進(jìn)肉雞外周血T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，提高肉雞的細(xì)胞免疫水平，低劑量組T淋巴細(xì)胞水平與對(duì)照組差異顯著性不明顯，可能與進(jìn)入機(jī)體后乳酸菌定制劑量有關(guān)。

4 結(jié)論

①在1～21 d的肉雞基礎(chǔ)日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌，可顯著提高肉雞的平均日增重和肉雞均重（P＜0.05），且中劑量的凍干乳酸菌可顯著降低試驗(yàn)全期的料重比（P＜0.05）。

②3種劑量的凍干乳酸菌對(duì)不同日齡肉雞的免疫功能有不同程度的提高。其中低劑量?jī)龈扇樗峋鷮?duì)肉雞免疫器官指數(shù)、外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和紅細(xì)胞免疫功能無不良影響，與對(duì)照組相比較，中、高劑量?jī)龈扇樗峋娠@著提高肉雞胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)、紅細(xì)胞花環(huán)率和外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力（P＜0.05）。

③在1～21 d階段，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加凍干乳酸菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及免疫功能提升效果較好。