張建春， 安寶文， 何家田， 王俊麗， 蓋 靜

（1.中國人民解放軍第一醫(yī)院，甘肅 蘭州730030；2.蘭州大學藥學院，甘肅 蘭州730000；3.蘭州軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗所，甘肅蘭州730050）

GC法同時測燒傷軟膏中甲基正壬酮與冰片

張建春1，2， 安寶文2， 何家田3， 王俊麗3， 蓋 靜3

（1.中國人民解放軍第一醫(yī)院，甘肅 蘭州730030；2.蘭州大學藥學院，甘肅 蘭州730000；3.蘭州軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗所，甘肅蘭州730050）

目的建立毛細管氣相色譜法同時測定燒傷軟膏中甲基正壬酮和冰片。方法Agilent HP-5毛細管色譜柱（30m×0.32mm，0.25μm），F(xiàn)ID檢測器，柱溫采取程序升溫，進樣口溫度220℃，檢測器溫度250℃，進樣量1 μL，不分流，載氣為氮氣，柱體積流量1.0mL/min，空氣體積流量450 mL/min，氫氣體積流量40 mL/min。結果2組分的分離度和線性關系良好，甲基正壬酮、冰片線性范圍分別為4.652～116.3μg/mL（r=0.999 9）、0.2098～5.246 mg/m L（r=0.999 8），平均回收率分別為98.1%（RSD=1.7%）、98.3%（RSD=1.8%）。結論本法操作簡便、結果準確、重復性好，可用于燒傷軟膏的質(zhì)量控制。

燒傷軟膏；氣相色譜法；冰片；甲基正壬酮

燒傷軟膏主要由魚腥草、金銀花、連翹、冰片等多味中藥制成的外用軟膏劑，具有清熱解毒、去腐生肌、收斂瘡口的功效，臨床主要應用于燒燙傷的治療。魚腥草主要含有癸酰乙醛、甲基正壬酮、乙酸龍腦酯等揮發(fā)油成分和槲皮素、槲皮苷等黃酮類成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎、利尿等作用［1］。而作為主要成分的冰片具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒及促進其他藥物透皮吸收的功效［2-4］。冰片及魚腥草中有效成分甲基正壬酮是燒傷軟膏的主要藥理活性成分，為了有效控制該制劑的質(zhì)量，保證療效，本實驗采用氣相色譜法，建立了同時測定燒傷軟膏中冰片與甲基正壬酮的方法，且兩者的量在保質(zhì)期內(nèi)均穩(wěn)定，可用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 6890N型氣相色譜儀（美國Agilent公司），AE200型梅特勒電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多上海有限公司），電子調(diào)溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司），揮發(fā)油提取器。

1.2 試劑與試藥 甲基正壬酮對照品 （批號110834-200502，供含量測定用），冰片對照品（批號111673-200401，供含量測定用）均購于中國藥品生物制品檢定所；燒傷軟膏 （自制，批號分別為20140320、20140331、20140410、20140421，規(guī)格10 g/瓶，保質(zhì)期6個月），芝麻香油 （江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司，批號20130309，產(chǎn)品標準代號GB8233-2008），乙酸乙酯為色譜純，水為重蒸水。

1.3 制備工藝 取魚腥草加8倍量水，浸泡1 h，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油4 h，備用；金銀花、連翹加8倍量芝麻香油浸泡1 h，加熱至150℃0.5 h，用雙層紗布濾過，待溫度降至100℃時，將魚腥草揮發(fā)油及蜂蠟倒入過濾后的油中，待溫度降至80℃以下時，將冰片加入其中，放冷即得。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），F(xiàn)ID檢測器，程序升溫（100℃保持2 min，以5℃/min升至150℃，保持10 min），進樣口溫度220℃，檢測器溫度250℃，進樣量1μL，不分流，載氣為氮氣，柱體積流量1.0 mL/min，空氣體積流量450 m L/min，氫氣體積流量40 mL/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取冰片對照品與甲基正壬酮對照品，用乙酸乙酯配成質(zhì)量濃度分別為5.246 mg/mL和0.116 3 mg/mL的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品5 g置500 mL圓底燒瓶中，加入300 m L蒸餾水搖勻，連接揮發(fā)油提取器，自測定器上端加蒸餾水至3.0 mL刻度處，精密加入乙酸乙酯2.0 mL，連接冷凝管，加熱回流2 h，冷卻30 min。分取乙酸乙酯層至10 mL量瓶中，用乙酸乙酯洗滌提取器3次，每次2 mL，加乙酸乙酯至刻度處，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 照方中比例制備缺冰片和魚腥草的燒傷軟膏，按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀。按上述色譜條件進行分析，結果供試品溶液中2組分完全分離，陰性對照品色譜在與供試品及對照品色譜中甲基正壬酮峰、龍腦與異龍腦峰相應時間處無干擾峰出現(xiàn)，說明樣品中其他成分對測定無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 燒傷軟膏GC色譜圖Fig.1 GC chromatograms of Burn Ointment

2.4 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液0.2、1、2、3、4、5 mL分別置于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。依次吸取上述溶液1μL進樣分析，記錄色譜圖。以峰面積 （Y）對質(zhì)量濃度 （X）進行線性回歸，得甲基正壬酮、冰片的回歸方程分別為Y甲壬酮=1.489X+0.912 3（r=0.999 9），Y冰=556.8X-1.219（r=0.999 8），線性范圍分別為4.652～116.3μg/mL、0.209 8～5.246 mg/mL。說明線性關系良好。

2.5 精密度試驗 取同一供試品溶液，分別精密吸取1μL，重復進樣6次，測定甲基正壬酮峰面積、冰片峰面積 （龍腦與異龍腦峰面積的和），并計算。結果RSD分別為1.7%、1.4%，精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別精密吸取1μL，在0、2、4、8、12、24 h進樣測定甲基正壬酮峰面積、冰片峰面積 （龍腦與異龍腦峰面積的和），并計算。結果RSD分別為2.1%、1.5%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗 取同一批 （批號20140320）樣品，按 “2.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，分別進樣1μL，測定并計算。結果平均含有量分別為0.105 0 mg/g和5.949 mg/g，RSD分別為2.1%和1.3%，說明方法重復性良好。

2.8 加樣回收試驗 精密量取9份已知含有量的燒傷軟膏（甲基正壬酮0.105 0 mg/g，冰片5.949 mg/g）2.5 g于圓底燒瓶中，分為低、中、高三個梯度，每梯度平行3份，分別對應精密加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對照品溶液 （甲基正壬酮0.210 5 mg/mL、0.268 1 mg/mL、0.313 5 mg/mL，冰片11.87 mg/mL、14.87 mg/mL、17.84 mg/mL）1 mL，按 “2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并按前述色譜條件進行測定，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果Tab.1 Results of recovery tests

2.9 樣品測定 為確保保質(zhì)期內(nèi)樣品的穩(wěn)定，特在樣品接近保質(zhì)期時做成分定量測定。按上述各樣品供試液制備方法及GC條件，對3批樣品進行成分定量測定，結果見表2。

表2 燒傷軟膏中甲基正壬酮和冰片的測定結果 （n=3）Tab.2 Contents of methyl nonyl ketone and borneol in Burn Ointm ent（n=3）

3 討論

由于甲基正壬酮為揮發(fā)性成分，故采用水蒸氣蒸餾方法進行提取，并在揮發(fā)油提取器的水層上滴加適量乙酸乙酯使揮發(fā)油得到完全提取。關于提取時間，曾做過1.5、2、3、4 h的提取試驗，其測定值見表3，甲基正壬酮2、3、4 h提取率差別不大，但與1.5 h提取率差距較大，而冰片在1.5、2、3、4 h提取率差異均不大，綜合效率考慮，提取時間選擇2 h。

表3 不同提取時間燒傷軟膏中甲基正壬酮和冰片的量Tab.3 Contents of methyl nonyl ketone and borneol in Burn Ointm ent for d ifferent extraction periods

［5］可知，超臨界萃取的魚腥草揮發(fā)油中癸酰乙醛的含有量較高，是魚腥草的主要有效成分之一。但經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的魚腥草揮發(fā)油不含癸酰乙醛，甲基正壬酮含有量較高的原因可能為癸酰乙醛在加熱條件下降解為甲基正壬酮。甲基正壬酮具有抗病毒、抗過敏、抗菌活性，因此選用甲基正壬酮作為定量指標成分。參考文獻 ［6-13］方法，經(jīng)過反復摸索，確定本實驗色譜條件。

本實驗曾采用Agilent INNOWAX毛細管色譜柱，其固定相為PEG-20M，為強極性毛細管柱，但結果發(fā)現(xiàn)主成分與雜質(zhì)的分離效果不好。

氣相色譜法測定冰片時，先后有2個色譜峰，即異龍腦（isoborneol）和龍腦（borneol），可將兩者的峰面積之和作為冰片的總峰面積進行含有量計算。

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Determ ination ofmethyl nonyl ketone and borneol from Burn Ointment by GC

ZHANG Jian-chun1，2， AN Bao-wen2， HE Jia-tian3， WANG Jun-li3， GAI Jing3

（1.The First Hospital of PLA，Lanzhou 730030，China；2.School of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China；3.Institute for Drug Control of Lanzhou Military Region，Lanzhou 730050，China）

AIMTo establish amethod for determiningmethyl nonyl ketone and borneol in Burn Ointment.METHODSThe methyl nonyl ketone and borneol were determined by gas chromatography with Agilent HP-5 capillary chromatographic column（30 m×0.32 mm，0.25μm）.The column was in programming temperature mode，220℃injector temperature，250℃FID temperature，1μL injector volumewere adopted without split ratio. Nitrogen was used as carrier gaswith 1.0 mL/min volume flow of column，400mL/min air and 40mL/min hydrogen.RESULTSThe linear ranges were 4.652-116.3μg/mL（r=0.999 9）for methyl nonyl ketone，0.209 8-5.246 mg/m L（r=0.999 8）for borneol，respectively.The corresponding average recovery rates were 98.1%（RSD=1.7%）and 98.3%（RSD=1.8%），respectively.CONCLUSIONThe established gas chromatography presents simplicity，accuracy，high sensitive and good reproducibility，it can be used for quality control of Burn Ointment.

Burn Ointment；GC；borneol；methyl nonyl ketone

R927.2

A

1001-1528（2015）04-0782-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.019

2014-06-11

軍隊醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金課題資助 （CLZ2JB22）

張建春 （1968—），女，主任藥師，碩士生導師，研究方向為藥物新劑型及中藥制劑。Tel：（0931）8993383，E-mail：zjc1508@126.com