金 鑫， 張會(huì)欣，2*， 崔雯雯，3， 常麗萍

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040；2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北石家莊050000；3.國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室 （心腦血管絡(luò)?。?，河北 石家莊 050000；4.河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊050017；5.河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊050000）

津力達(dá)顆粒對(duì)高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌SREBP-1c的影響

金 鑫1， 張會(huì)欣1，2*， 崔雯雯1，3， 常麗萍4，5

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040；2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北石家莊050000；3.國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室 （心腦血管絡(luò)?。颖?石家莊 050000；4.河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊050017；5.河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊050000）

目的探究津力達(dá)顆粒 （人參、黃精、蒼術(shù)、苦參、麥冬、地黃、何首烏、山茱萸等）對(duì)高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相關(guān)基因的影響。方法8只雄性C57BL/6J小鼠設(shè)為正常組。40只雄性ApoE-/-小鼠喂養(yǎng)16周后分為模型組、羅格列酮組、津力達(dá)顆粒低，中和高劑量組，灌胃給藥8周.采用組織游離脂肪酸試劑盒、BCA蛋白濃度法測(cè)定骨骼肌游離脂肪酸含量；葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn) （OGTT）評(píng)價(jià)小鼠的胰島素抵抗程度；實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR和蛋白質(zhì)印跡法（Western-blot）測(cè)定小鼠骨骼肌胰島素受體、胰島素受體底物2、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果津力達(dá)顆粒能夠降低小鼠的空腹血糖、膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇，升高高密度脂蛋白，下調(diào)小鼠骨骼肌游離脂肪酸含量，提高胰島素敏感指數(shù)。同時(shí)上調(diào)小鼠胰島素受體和胰島素受體底物2，下調(diào)SREBP-1cmRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)論津力達(dá)顆粒能夠明顯改善小鼠糖耐量異常來改善高脂誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠的胰島素抵抗。

津力達(dá)顆粒；ApoE-/-小鼠；胰島素抵抗；胰島素受體；胰島素受體底物2；膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）

脂毒性在2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展中所起到的作用日益受到大家的關(guān)注［1］。所謂 “脂毒性”指的是過多的脂質(zhì)沉積超過了脂肪組織本身的儲(chǔ)存能力而轉(zhuǎn)移到非脂肪組織，如骨骼肌等，導(dǎo)致脂肪的異位沉積，促使胰島素的外周作用和分泌功能受到損害［2］。迄今為止脂毒性導(dǎo)致胰島素抵抗的機(jī)理尚未明確［3］。SREBP-1c是調(diào)控脂肪酸合成和細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量的關(guān)鍵因子［4-5］。因此，探討SREBP-1c的作用，能夠?yàn)榱私庖葝u素抵抗的能量代謝過程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 藥品與試劑

津力達(dá)顆粒由人參、黃精、蒼術(shù) （炒）、苦參、麥冬、地黃、何首烏、山茱萸、茯苓、佩蘭、黃連、知母、淫羊藿、丹參、葛根、荔枝核、地骨皮等十七味中藥組成，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)120429；鹽酸羅格列酮片由貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20120202；組織游離脂肪酸測(cè)定試劑盒購自南京建成科技有限公司；胰島素受體（INSR）、胰島素受體底物2（IRS-2）和膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）抗體均購于abcam公司；INSR、IRS-2、SREBP-1c引物由上海生工生物公司合成。

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ApoE-/-小鼠、C57BL/6J小鼠，雄性，18～20 g，SPF級(jí)，均購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，許可證號(hào)SCXK（京）2011-0012，動(dòng)物合格證號(hào)C57BL/6J小鼠（0302333），ApoE-/-小鼠（0302331）。

1.2 實(shí)驗(yàn)飼料 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)飼料購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，熱量組成為蛋白質(zhì)24.2%，碳水化合物65.5%，脂肪10.3%，總熱量為348 kcal/ 100 g；參照文獻(xiàn) ［6］自制高脂飼料，熱量組成為蛋白質(zhì)占20.1%，碳水化合物20.1%，脂肪59.8%，總熱量為501 kcal/100 g。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組 8只雄性C57BL/6J小鼠設(shè)為正常組，給予正常飼料；40只雄性ApoE-/-小鼠，給予高脂飼料，喂養(yǎng)16周后，分為5組：模型組、羅格列酮組、津力達(dá)高劑量組、津力達(dá)中劑量組、津力達(dá)低劑量組，津力達(dá)用純水配制，參照文獻(xiàn)［6］按照小鼠體質(zhì)量高劑量3.8 g/kg，中劑量1.9 g/kg，低劑量0.95 g/kg進(jìn)行灌胃給藥，鹽酸羅格列酮片按1.33 mg/kg灌胃給藥。正常組和模型組給予純水，連續(xù)8周，處死小鼠后，留取血清、骨骼肌標(biāo)本，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 空腹血糖、甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.4.3 骨骼肌游離脂肪酸檢測(cè) 采用游離脂肪酸測(cè)試盒檢測(cè)小鼠骨骼肌游離脂肪酸含量，BCA法測(cè)定蛋白濃度校正骨骼肌游離脂肪酸含有量，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書操作。

1.4.4 胰島素敏感性評(píng)價(jià)

1.4.4.1 空腹胰島素水平和胰島素敏感指數(shù) 空腹胰島素水平測(cè)定采用放射免疫分析法檢測(cè)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)評(píng)價(jià)其胰島素抵抗程度，胰島素敏感指數(shù)=1/（空腹血糖×空腹胰島素）。

1.4.4.2 小鼠葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠的胰島素敏感性 小鼠飼養(yǎng)24周后，禁食不禁水14～16 h，尾部采血，測(cè)定空腹血糖，記為小鼠葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)0min的血糖值，隨后各組小鼠口服30%的葡萄糖溶液，用微量血糖儀測(cè)定30、60、120 min血糖水平。

1.4.5 骼肌INSR、IRS-2、SREBP-1cmRNA表達(dá)水平檢測(cè) 參照文獻(xiàn)［6］取小鼠骨骼肌組織勻漿并用Trizol法提取總RNA后，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。采用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）方法檢測(cè)小鼠骨骼肌胰島素受體 （INSR）、胰島素受體底物2（IRS-2）、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）的表達(dá)。

內(nèi)參β-actin及各目的基因引物序列如下：

INSR正向引物TTTGCCCAACCATCTGTAAG，反向引物GACCATCCAGGTAGAAGTTTCG；IRS-2正向引物TCTCTGGCAGTTCAGGTCG，反向引物AGTCCTCTGGGTAAGGGTTG；SREBP-1c正向引物CAAAGAGGAGATTGGCATTG，反向引物TGCGTGTGGAGAAGTAGATGT。反應(yīng)結(jié)束后，按照各反應(yīng)孔Ct值，以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參，根據(jù)公式2-ΔCt計(jì)算各樣品目的基因相對(duì)表達(dá)量。

1.4.6 骨骼肌INSR、IRS-2、SREBP-1c蛋白表達(dá)水平測(cè)定 小鼠骨骼肌胰島素受體 （INSR）、胰島素受體底物2（IRS-2）、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）蛋白表達(dá)水平采用Western blot法測(cè)定。參照文獻(xiàn) ［6］取骨骼肌組織100 mg，加入1 mL裂解液，充分裂解并采用改良酚試劑法定量。取30μg進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，完畢后進(jìn)行半干轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜完畢，取出聚偏氟乙烯膜室溫封閉2 h，將封閉后的PVDF聚偏氟乙烯膜置入稀釋的一抗溶液中，4℃緩慢搖動(dòng)過夜。洗膜后將聚偏氟乙烯膜置入適量稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗溶液中，室溫反應(yīng)2 h。抗體結(jié)合區(qū)帶用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。以目的蛋白的IOD與β-actin的IOD比值表示該樣品的目的蛋白相對(duì)含量。

1.4.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料以表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清生化指標(biāo)比較 與正常組相比，模型組小鼠血糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇明顯升高，高密度脂蛋白膽固醇明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；與模型組相比，羅格列酮組、津力達(dá)高劑量組小鼠血糖水平明顯降低（P＜0.05）；羅格列酮組、津力達(dá)不同劑量組小鼠膽固醇、甘油三酯明顯降低 （P＜0.05）；津力達(dá)高劑量組低密度脂蛋白膽固醇明顯降低 （P＜0.05）；津力達(dá)中劑量組、高劑量組小鼠高密度脂蛋白膽固醇升高 （P＜0.05）。見表1。

表1 津力達(dá)對(duì)血液生化指標(biāo)的影響 （）Tab.1 Effects of JLD on biochem ical parameters in blood（）

表1 津力達(dá)對(duì)血液生化指標(biāo)的影響 （）Tab.1 Effects of JLD on biochem ical parameters in blood（）

注：與正常組比較，#P＜0.05，與模型組比較，*P＜0.05

組別 給藥劑量 血糖/（mmol·L-1）膽固醇/（mmol·L-1）甘油三酯/（mmol·L-1）高密度脂蛋白膽固醇/（mmol·L-1）低密度脂蛋白膽固醇/（mmol·L-1）正常組 —6.06±0.71 2.78±0.47 0.82±0.06 4.02±0.44 0.38±0.14模型組 — 7.98±0.68# 12.67±1.16# 1.80±0.18# 2.78±0.63# 3.9±0.52#羅格列酮組 1.33 mg/kg 6.69±0.54* 8.76±1.00* 1.25±0.09* 3.08±0.41 3.58±0.63津力達(dá)低劑量組 3.8 g/kg 7.74±0.34 11.03±0.46* 1.62±0.23 3.10±0.29 3.83±0.53津力達(dá)中劑量組 1.9 g/kg 7.62±0.40 9.60±0.57* 1.31±0.08* 3.39±0.60* 3.55±0.33津力達(dá)高劑量組 0.95 g/kg 6.77±0.42* 7.78±0.36* 1.17±0.06* 4.76±0.85* 3.29±0.45*

2.2 骨骼肌游離脂肪酸含量比較 與正常組相比，模型組小鼠骨骼肌游離脂肪酸水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；與模型組比較，羅格列酮組、津力達(dá)各劑量組小鼠骨骼肌游離脂肪酸水平均明顯降低 （P＜0.05）。見表2。

2.3 胰島素敏感性評(píng)價(jià)

2.3.1 空腹胰島素和胰島素抵抗指數(shù) 與正常組相比，模型組空腹胰島素水平升高，胰島素抵抗指數(shù)升高 （P＜0.05），與模型組比較，羅格列酮組、津力達(dá)低、中、高劑量組空腹胰島素水平、胰島素抵抗指數(shù)明顯下降，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表3。

表2 津力達(dá)對(duì)骨骼肌游離脂肪酸的影響 （）Tab.2 Effects of JLD on skeletalmuscle of the FFA（）

表2 津力達(dá)對(duì)骨骼肌游離脂肪酸的影響 （）Tab.2 Effects of JLD on skeletalmuscle of the FFA（）

注：與正常組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

組別 給藥劑量 骨骼肌游離脂肪酸/（mmol·L-1）正常組 —12.32±4.01模型組 — 98.19±18.23#羅格列酮組 1.33 mg/kg 27.61±6.44*津力達(dá)低劑量組 0.95 g/kg 62.55±10.26*津力達(dá)中劑量組 1.9 g/kg 41.16±6.97*津力達(dá)高劑量組 3.8 g/kg 27.57±5.30*

表3 津力達(dá)對(duì)血清胰島素和胰島素敏感指數(shù)的影響 （）Tab.3 Effects of JLD on FIns and ISI（）

表3 津力達(dá)對(duì)血清胰島素和胰島素敏感指數(shù)的影響 （）Tab.3 Effects of JLD on FIns and ISI（）

注：與正常組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

胰島素敏感指數(shù)正常組 —組別 給藥劑量 血清胰島素/（mU·L-1）26.14±7.97 -5.01±0.43模型組 — 145.28±8.22# -7.05±0.12#羅格列酮組 1.33 mg/kg 60.46±9.03* -5.99±0.18*津力達(dá)低劑量組 3.8 g/kg 121.82±2.33* -6.85±0.05*津力達(dá)中劑量組 1.9 g/kg 95.13±8.18* -6.58±0.09*津力達(dá)高劑量組 0.95 g/kg 63.94±10.04* -6.06±0.21*

2.3.2 小鼠葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn) 各組小鼠糖耐量于口服葡萄糖30 min后出現(xiàn)血糖水平升至高峰，以后逐漸降低；與正常組相比模型組各時(shí)間點(diǎn)的血糖水平均有明顯升高；與模型組小鼠比較，津力達(dá)各組小鼠血糖升高峰值明顯降低，降低血糖時(shí)間縮短，與模型組相比差異顯著。見表4。

表4 津力達(dá)對(duì)葡萄糖耐量的影響 （）Tab.4 Effect of JLD on glucose tolerance（）

表4 津力達(dá)對(duì)葡萄糖耐量的影響 （）Tab.4 Effect of JLD on glucose tolerance（）

注：與正常組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

0 min 30 min 60 min 120 min正常組組別 只數(shù) 血糖/（mmol·L-1）8 5.4±0.3 11.3±1.1 9.1±0.9 7.0±0.7模型組 8 7.9±0.5# 18.1±1.5#15.4±1.2#11.6±1.0#羅格列酮組 8 6.6±1.2* 12.4±1.5*12.3±1.2*7.8±0.3津力達(dá)低劑量組 8 6.8±0.7 18.3±1.3 14.5±1.5 11.1±0.5津力達(dá)中劑量組 8 6.9±1.1 16.8±1.5 13.7±1.6*9.9±1.1*津力達(dá)高劑量組 8 6.7±1.4* 15.8±2.6*12.6±1.6*8.2±0.6*

2.4 骨骼肌INSR、IRS-2、SREBP-1c mRNA水平比較 與正常組比較，模型組骨骼肌INSR、IRS-2水平均明顯低于正常組，SREBP-1c明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，羅格列酮組、津力達(dá)中、高劑量組INSR、IRS-2 mRNA水平明顯上升（P＜0.05）；津力達(dá)各個(gè)劑量組SREBP-1c mRNA水平均明顯降低（P＜0.05）。見表5。

2.5 骨骼肌INSR、IRS-2、SREBP-1c蛋白表達(dá)比較 與正常組相比，模型組INSR、IRS-2蛋白表達(dá)均有明顯降低，SREBP-1c蛋白水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；與模型組相比，羅格列酮組、津力達(dá)各組INSR蛋白水平明顯升高，羅格列酮組、津力達(dá)高、中劑量組的IRS-2蛋白表達(dá)明顯升高，津力達(dá)中、高劑量組SREBP-1c蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表6，圖1。

表5 津力達(dá)對(duì)INSR、IRS-2、SREBP-1cm RNA表達(dá)的影響 （）Tab.5 Effects of JLD on INSR，IRS-2 and SREBP-1c m RNA expression（）

表5 津力達(dá)對(duì)INSR、IRS-2、SREBP-1cm RNA表達(dá)的影響 （）Tab.5 Effects of JLD on INSR，IRS-2 and SREBP-1c m RNA expression（）

注：與正常組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

INSR IRS-2 SREBP-1c正常組 —組別 給藥劑量1.04±0.18 1.03±0.15 1.00±0.1模型組 — 0.26±0.04#0.24±0.04# 5.52±0.74#羅格列酮組 1.33 mg/kg 0.79±0.14*0.51±0.08* 5.08±0.55津力達(dá)低劑量組 3.8 g/kg 0.31±0.06 0.32±0.05 2.67±0.35*津力達(dá)中劑量組 1.9 g/kg 0.49±0.09*0.57±0.09* 2.18±0.21*津力達(dá)高劑量組 0.95 g/kg 0.60±0.10*0.74±0.12* 2.06±0.26*

表6 津力達(dá)對(duì)INSR、IRS-2、SREBP-1c蛋白表達(dá)的影響（）Tab.6 Effects of JLD on INSR，IRS-2 and SREBP-1c protein expression（）

表6 津力達(dá)對(duì)INSR、IRS-2、SREBP-1c蛋白表達(dá)的影響（）Tab.6 Effects of JLD on INSR，IRS-2 and SREBP-1c protein expression（）

注：與正常組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05

INSR IRS-2 SREBP-1c正常組 —組別 給藥劑量1.12±0.10 0.90±0.02 0.22±0.04模型組 — 0.34±0.04#0.16±0.02# 0.63±0.05#羅格列酮組 1.33 mg/kg 0.75±0.07*0.46±0.04* 0.67±0.09津力達(dá)低劑量組 3.8 g/kg 0.49±0.03*0.36±0.07 0.59±0.02津力達(dá)中劑量組 1.9 g/kg 0.60±0.05*0.40±0.03* 0.50±0.08*津力達(dá)高劑量組 0.95 g/kg 0.84±0.06*0.45±0.04* 0.28±0.02*

圖1 津力達(dá)對(duì)INSR、IRS-2、SREBP-1c蛋白表達(dá)的影響Fig.1 E ffects of JLD on protein expression of INSR，IRS-2 and SREBP-1c in skeletalmuscle

3 討論

胰島素抵抗 （IR）指的是正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)，也就是胰島素對(duì)其靶器官的敏感性下降［7］。沒有高脂誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠，就會(huì)產(chǎn)生很明顯的脂代謝紊亂［8］，經(jīng)過長期高脂誘導(dǎo)之后，發(fā)現(xiàn)模型組小鼠相對(duì)于正常組的血脂水平明顯升高；胰島素敏感指數(shù)明顯下降，小鼠的糖耐量實(shí)驗(yàn)都表明模型組小鼠產(chǎn)生了明顯的胰島素抵抗特征；骨骼肌的游離脂肪酸含量明顯上升。而津力達(dá)能夠不同程度的改善小鼠的以上指標(biāo)，可以看出津力達(dá)具有一定的改善胰島素抵抗的作用。

胰島素抵抗的發(fā)生是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，其牽涉到復(fù)雜的胰島素信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的共同作用，任何一個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生改變都可能會(huì)產(chǎn)生胰島素抵抗。INSR存在于多數(shù)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞表面，是胰島素信號(hào)的起始部位。胰島素到達(dá)靶細(xì)胞后，與其表面的INSR的α亞基特異性結(jié)合，構(gòu)型改變，導(dǎo)致酪氨酸激酶活化，激活β亞基，導(dǎo)致受體磷酸化激活I(lǐng)RS。然后被磷酸化的 IRS與 p85結(jié)合，激活PI3K，再激活葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子，促進(jìn)糖的轉(zhuǎn)運(yùn)活動(dòng)［9-10］。INSR和IRS在胰島素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起到十分重要的作用。2型糖尿病的患者普遍存在INSR蛋白、基因不同程度的下降，可見INSR在胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的重要性。IRS在胰島素的信號(hào)傳導(dǎo)過程中也起到十分重要的作用，其中IRS的家族成員中主要有IRS-1和IRS-2廣泛分布在外周組織中。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，剔除IRS-1基因純合子的大鼠只發(fā)生胰島素抵抗，血糖變化不明顯；而敲除IRS-2的純合子大鼠不僅胰島素抵抗嚴(yán)重，而且血糖升高明顯，我們可以猜測(cè)在胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程中，IRS-2的作用可能較IRS-1更為重要［11］。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，HF組的INSR和IRS-2的蛋白和mRNA含量明顯下降，而津力達(dá)能夠不同程度的增加INSR和IRS-2的表達(dá)，從而改善胰島素的傳導(dǎo)過程來調(diào)節(jié)外周脂代謝，從這一點(diǎn)我們推測(cè)津力達(dá)改善小鼠骨骼肌的胰島素抵抗可能與這個(gè)原因有關(guān)，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

SREBP-1c作為骨骼肌細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)糖代謝和調(diào)控脂肪酸的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控脂肪酸合成酶、己糖激酶Ⅱ、乙酰輔酶A羧化酶2，能夠調(diào)控細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量，控制脂肪酸的合成。有研究證明：胰島素可以調(diào)節(jié)SREBP-1c的水平。高糖可以誘導(dǎo)SREBP-1c的表達(dá)［12］；早期胰島素治療后肌細(xì)胞的脂質(zhì)合成減少，SREBP-1c的蛋白和mRNA含量均降低［13］。骨骼肌的SREBP-1c表達(dá)增加會(huì)促進(jìn)脂質(zhì)合成，增加細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的含量，促進(jìn)脂毒性的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠骨骼肌內(nèi)游離脂肪酸含量明顯高于正常組組，并且SREBP-1c的蛋白和基因水平發(fā)生上調(diào)。津力達(dá)干預(yù)的小鼠骨骼肌內(nèi)SREBP-1c基因、蛋白水平發(fā)生不同程度的下調(diào)，可能是由于津力達(dá)能夠下調(diào)SREBP-1c的表達(dá)，因此而減少津力達(dá)小鼠骨骼肌內(nèi)的脂質(zhì)沉積，降低其脂毒性，以改善胰島素抵抗，但其具體機(jī)制還不是很明確。在胰島素抵抗和糖尿病的動(dòng)物模型中，IRS-2的基因敲除鼠均可觀察到SREBP-1c在肝臟的過度表達(dá)［14］。大量研究證明，SREBP-1c的過度表達(dá)可以抑制IRS-2和糖原合成酶基因的的表達(dá)，但是這些研究大多集中在肝臟上，對(duì)骨骼肌的研究關(guān)注較少。本實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠骨骼肌的IRS-2的表達(dá)下降，可能和SREBP-1c的過度表達(dá)或者直接參與抑制骨骼肌胰島素信號(hào)通路的作用有關(guān)，仍需進(jìn)一步研究。

［1］McGarry JD.Banting lecture 2001 Dysregulation of fatty acid metabolism in the etiology of type 2 diabetes［J］.Diabetes，2002，51（1）：7-18.

［2］Raz I，Eldor R，Cernea S，et al.Diabetes：insulin resistance and derangements in lipid metabolism.Cure through intervention in fat transportand storage［J］.DiabetesMetab Res，2005，21（1）：3-14.

［3］李映紅，郭文鵬，戎志斌，等.糖胰敏對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰島素抵抗糖尿病大鼠脂毒性和胰島素抵抗的影響［J］.中國中醫(yī)藥科技，2014，21（2）：128-131.

［4］Krebs M，Roden M.Molecularmechanisms of lipid‐induced insulin resistance inmuscle，liver and vasculature［J］.Diabetes ObesMetab，2005，7（6）：621-632.

［5］Ferre P，F(xiàn)oufelle F.SREBP-1c transcription factor and lipid homeostasis：clinical perspective［J］.Horm Res，2007，68（2）：72-82.

［6］金 鑫，張彥芬，秘 堯，等.津力達(dá)對(duì)高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌膽固醇相關(guān)基因的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2014，25（11）：1415-1420.

［7］戴 冰，邢 瑞，周方亮，等.六味地黃湯及其水提醇沉物對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響［J］.中成藥，2014，36（3）：608-610.

［8］Phillips JW，Barringhaus K G，Sanders JM，et al.Rosiglitazone reduces the accelerated neointima formation after arterial injury in amouse injurymodel of type 2 diabetes［J］.Circulation，2003，108（16）：1994-1999.

［9］嚴(yán)哲琳，董正平，孫 文，等.翻白草水提液對(duì)2型糖尿病胰島素抵抗大鼠糖脂代謝的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（7）：216-219.

［10］牛燕媚，劉艷輝，李慧閣，等.胰島素受體底物蛋白l及其絲氨酸磷酸化活性在胰島素抵抗發(fā)生中的作用［J］.中國糖尿病雜志，2012，20（2）：136.

［11］彭定瓊，高 妍.Ⅱ型糖尿病病人脂肪組織胰島素受體底物1和含2個(gè)SH2結(jié)構(gòu)的蛋白酪氨酸磷酸酶的蛋白表達(dá)［J］.中華內(nèi)科雜志，2000，39（11）：739-742.

［12］Commerford SR，Peng L，DubéJ J，et al.In vivo regulation of SREBP-1c in skeletalmuscle：effects of nutritional status，glucose，insulin，and leptin［J］.Am JPhysiol Regul Integr Comp Physiol，2004，287（1）：218-227.

［13］Bi Y，Cai M，Liang H，et al.Increased carnitine palmitoyl transferase1 expression and decreased sterol regulatory elementbinding protein 1c expression are associated with reduced intramuscular triglyceride accumulation after insulin therapy in highfat-diet and streptozotocin-induced diabetic rats［J］.Metabolism，2009，58（6）：779-786.

［14］畢 艷，朱大龍，翁建平.膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c與胰島素抵抗——早期胰島素治療改善胰島素抵抗的可能分子機(jī)制［J］.中華內(nèi)科雜志，2011，50（11）：982-984.

Effect of Jinlida Granules on SREBP-1c in skeletalmuscle in fat-induced insulin resistance ApoE-/-m ice

JIN Xin1， ZHANG Hui-xin1，2*， CUIWen-wen1，3， CHANG Li-ping4，5
（1.Heilongjiang University of ChineseMedicine，Harbin 150040，China 2.Yiling Medical Research Institute of Hebei Province，Shijiazhuang 050000，China；3.Key Laboratory of State Administration of Traditional ChineseMedicine（Cardio-Cerebral Vascular Network Disease），Shijiazhuang 050000，China；4.Yiling Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050017，China；5.Key Laboratory of Network Disease of Hebei Province，Shijiazhuang 050000，China）

ABSTRACT：AIMTo investigate the effect of Jinlida Granules（Ginseng Radix et Rhizoma，Polygonati Rhizoma，Atractylodis Rhizoma，Sophorae flavescentis Radix，Ophiopogonis Radix，Rehmanniae Radix，Polygonimultiflori Radix，Corni Fructus，etc）on SREBP-1c in skeletalmuscle in fat-induced insulin resistance ApoE-/-mice.METHODSEightmale C57BL/6Jmice were assigned to the normal group.Forty male ApoE-/-mice fed for sixteen weeks were divided into model group，rosiglitazone group，Jinlida Granules low，middle and high-dose groups，and then gavaged for eightweeks.The organization free fatty acid kit，BCA protein concentration determination method was used to determine skeletalmuscle FFA levels，glucose tolerance test（OGTT）was adopted to evaluate the degree of insulin resistance in mice.Real-time fluorescent quantitative reverse transcription PCR（RTPCR）and Western-blot（Western-blot）method were used to determinemice skeletalmuscle insulin receptor（INSR），insulin receptor substrate 2（IRS-2），cholesterol regulating element binding protein 1c（SREBP-1c）mRNA and protein expression.RESULTSJinlida Granules could decrease fasting blood glucose，cholesterol，triglyceride and low density lipoprotein cholesterol in blood and skeletalmuscle FFA content in mice，while increase high density lipoprotein and raise insulin sensitive index.Jinlida Granules significantly improved abnormal glucose tolerance and up-regulated the skeletalmuscle INSR，IRS-2，down-regulated SREBP-1c mRNA and protein expression in mice.CONCLUSIONJinlida Granules can adjust the skeletalmuscle SREBP-1c protein and gene expression，improve the ApoE-/-mice induced by high fat of insulin resistance.

Jinlida Granules；ApoE-/-mice；insulin resistance；INSR；IRS-1；SREBP-1c

R285.5

A

1001-1528（2015）04-0705-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.004

2014-08-12

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃 （973計(jì)劃）項(xiàng)目 （2012CB518606）

金 鑫（1989—），女，碩士生，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。E-mail：jinxin19890712@163.com

*通信作者：張會(huì)欣（1976—），女，博士，正高級(jí)工程師，研究方向?yàn)樘悄虿∥⒀懿?。E-mail：zhanghuixin@yiling.cn