王克才，李祝田，鄭洪玲，于長泳，楊國麗，張 儷，安鵬威，李紅魁

（1.遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164；2.遼寧省瓦房店市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省鐵嶺市畜產(chǎn)品安全檢測站，遼寧 鐵嶺 112000；4.遼寧省畜牧業(yè)經(jīng)濟管理站，遼寧 沈陽 110032）

豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下的高致病豬藍耳病免疫效果調(diào)查

王克才1，李祝田2，鄭洪玲1，于長泳1，楊國麗1，張 儷3，安鵬威4，李紅魁1

（1.遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110164；2.遼寧省瓦房店市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省鐵嶺市畜產(chǎn)品安全檢測站，遼寧 鐵嶺 112000；4.遼寧省畜牧業(yè)經(jīng)濟管理站，遼寧 沈陽 110032）

田間狀態(tài)下對可能遭受豬圓環(huán)病毒2型自然感染的10窩99頭仔豬，于斷奶后30日齡進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫，并分別于免疫前的28日齡、免疫后的56日齡和94日齡采血，進行豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍耳病的病毒核酸和抗體檢測。結(jié)果顯示，豬群圓環(huán)病毒2型病毒核酸和抗體陽性檢出率，3次分別為3.0%和14.1%、13.1%和96.0%、98.0%和98.0%；高致病性豬藍耳病病毒核酸和抗體陽性檢出率，3次分別為0和97.0%、10.1%和61.6%、30.3%和94.9%。結(jié)果顯示，斷奶仔豬群在受到豬圓環(huán)病毒2型自然感染狀態(tài)下，進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫后26 d時，抗體合格率未達到國家規(guī)定的70%標準，免疫后64 d時，抗體合格率明顯高于70%。

豬圓環(huán)病毒2型；自然感染；高致病性豬藍耳?。幻庖?；效果

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV 2）是現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)十分重要的免疫抑制性病原之一。PCV2感染所引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥（PMWS）、繁殖障礙（流產(chǎn)）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、呼吸道病綜合征（PRDC）、增生性和壞死性肺炎（PNP）和先天性顫抖等，統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒?。≒VCD）或豬圓環(huán)病毒相關(guān)性疾?。≒VCAD）。由PCV 2感染所引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭癥（PMWS），流行面廣、危害性大，而且可能導(dǎo)致其他疫病免疫失敗，嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展。為探究田間狀態(tài)下豬圓環(huán)病毒2型自然感染豬群進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫的效果如何，本文開展了本次調(diào)查，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗豬 試驗選擇具有豬圓環(huán)病毒2型感染病史的某種豬場進行。由該場確定2013年6月3日～5日出生的10窩105頭仔豬群，作為特定的試驗調(diào)查群體。

1.1.2 免疫用的疫苗 高致病性豬藍耳病活疫苗（JXA1-R株），購自國內(nèi)某生物制品公司（批號：1211027-1）。

1.1.3 主要檢測試劑 豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA檢測試劑盒，購自北京世紀元亨生物技術(shù)公司（批號：PCV20130508E）。

豬2型圓環(huán)病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒，購自達安基因生物技術(shù)公司（批號：2013001、2013002）。

高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光RT-PCR檢測試劑盒，購自北京生科尚儀生物技術(shù)公司（批號：20130501）。

豬繁殖與呼吸綜合征抗體間接ELISA檢測試劑盒，購自北京天之泰生物技術(shù)公司（法國LSI公司生產(chǎn)，批號：5-VETPRA-026、5-VETPRA-027）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗豬處理 選擇該場同期分娩的10窩105頭仔豬作為試驗豬，實行試驗前、后對照的方法。為便于試驗，出生后分別打上不同顏色的耳標號，與場內(nèi)同期未參加試驗的母豬和仔豬同舍飼養(yǎng),28日齡斷奶。試驗豬標記具體情況見表1。

1.2.2 參試豬免疫及采樣檢測程序

1.2.2.1 免疫程序 試驗組仔豬達30日齡時，進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫，免疫劑量按疫苗說明書要求，每頭仔豬頸部肌肉1 mL（1頭份）,共免疫99頭。

1.2.2.2 采樣程序 所有參試的仔豬分別于28、56和94日齡逐頭采血分離血清至少1 mL∕頭，送遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心實驗室分別進行豬圓環(huán)病毒2型ELISA病毒核酸和抗體、高致病性豬藍耳病病毒核酸和抗體4項檢測。

1.2.3 臨床觀測指標 試驗期間按該場常規(guī)要求實施生物安全及飼養(yǎng)管理措施，每日觀察豬群精神狀態(tài)、采食狀況是否正常，生長發(fā)育狀況是否良好，一旦發(fā)現(xiàn)臨床發(fā)病豬，及時隔離、采樣檢測。

主要臨床監(jiān)測指標：28日齡斷奶成活率及個體平均體重，1～3月齡期間發(fā)病及死亡數(shù)，3月齡時成活率及個體平均體重。

1.2.4 實驗室檢測程序 依據(jù)豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR試劑盒給出的檢測方法，分別對采集的豬血清樣品進行熒光PCR檢測和結(jié)果判定。試驗成立條件：陽性對照Ct值≤28，陰性對照Ct值應(yīng)等于none。樣品的熒光PCR擴增的Ct值≤35，判定為核酸陽性，否則，均判為陰性。

依據(jù)豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒給出的檢測方法，分別對采集的豬血清樣品進行ELISA抗體檢測和結(jié)果判定。試驗成立條件：陰性對照平均OD值≤0.15，陽性對照平均OD值≥0.60。計算該次試驗的臨界OD值=陽性對照平均OD值×0.25，樣品OD值≥臨界OD值時，樣品抗體判為陽性，否則，判為陰性。

依據(jù)高致病性豬藍耳病病毒熒光RT-PCR試劑盒給出的檢測方法，分別對采集的豬血清樣品進行熒光RT-PCR檢測和結(jié)果判定。試驗成立條件：陽性對照Ct值≤28，陰性對照Ct值應(yīng)等于none。樣品的熒光PCR擴增的Ct值≤30，判定為核酸陽性，否則，均判為陰性。

依據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征抗體間接ELISA抗體檢測試劑盒給出的檢測方法，分別對采集的豬血清樣品進行ELISA抗體檢測和結(jié)果判定。試驗成立條件：樣品的IRPC值＞20時，判為抗體陽性，IRPC值≤20時，判為抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀測結(jié)果

2.1.1 10窩初生仔數(shù)共105頭，28日齡前死亡6頭，采集病料樣品進行圓環(huán)病毒2型病毒核酸和高致病性豬藍耳病病毒核酸檢測，結(jié)果檢出圓環(huán)病毒2型病毒核酸和高致病性豬藍耳病病毒核酸均為陽性的1頭，高致病性豬藍耳病病毒核酸陽性的1頭，其他均為陰性。

2.1.2 試驗豬斷奶時99頭稱重總重量為735 kg，平均個體重為7.42 kg，死亡率為2.86%。

2.1.3 試驗豬達3月齡時，稱重總重量為4 062 kg，平均個體重為41.03 kg，臨床觀察有10頭豬發(fā)病，主要表現(xiàn)為精神及采食不佳，體溫升高，生長發(fā)育不良，漸進性消瘦，背毛粗亂無光，咳喘、頑固性腹瀉、關(guān)節(jié)腫大等癥狀，未發(fā)生死亡。主要臨床監(jiān)測項目及結(jié)果見表2。

表1 試驗分組明細表Table1 Experimental grouping list

2.2 實驗室檢測結(jié)果

2.2.1 試驗豬28日齡斷奶且進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫前，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽性檢出率為3.0%，抗體陽性率為14.1%；高致病性豬藍耳病病毒核酸無陽性檢出，抗體陽性率為97.0%。檢測結(jié)果統(tǒng)計詳見表3。

表2 臨床觀測結(jié)果統(tǒng)計表Table2 Statistics o f clinical m onitoring result

表3 實驗室檢測結(jié)果統(tǒng)計表Table3 statistical stable of test result in laboratory

2.2.2 試驗豬56日齡且進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫26 d后，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽性檢出率為13.0%，豬圓環(huán)病毒2型抗體陽性率為96.0%；高致病性豬藍耳病病毒核酸陽性檢出率為10.1%，抗體陽性率為61.6%。檢測結(jié)果統(tǒng)計詳見表3。

2.2.3 試驗豬94日齡且進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫64 d后，豬圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽性檢出率為98.0%，抗體陽性率為98.0%；高致病性豬藍耳病病毒核酸陽性檢出率為30.3%，抗體陽性率為94.9%。檢測結(jié)果統(tǒng)計詳見表3。

2.3 結(jié)果分析

2.3.1 仔豬在28日齡斷奶前，一是臨床上表現(xiàn)為各種原因?qū)е碌乃劳雎瘦^高（5.71%）,但發(fā)生豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍耳病感染的比率較低（1.90%）,因此,仔豬的整體生長發(fā)育水平基本正常。二是通過28日齡檢測發(fā)現(xiàn)，2種病毒核酸的陽性檢出率很低（3.0%和0）,豬圓環(huán)病毒2型母源抗體陽性率較低（14.1%）,高致病性豬藍耳病抗體陽性率很高（97.0%）,表現(xiàn)為三低一高。說明高致病性豬藍耳病母源抗體水平較高且在豬體內(nèi)維持時間較長，豬圓環(huán)病毒2型母源抗體在仔豬體內(nèi)維持時間較短，說明這一時期的仔豬處于豬圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍耳病病毒感染的低風險時期。

2.3.2 仔豬斷奶后并于30日齡進行高致病性豬藍耳病免疫之后的2個月內(nèi)，通過臨床觀測和實驗室4個項目的檢測，所有指標均顯示上升態(tài)勢。一是臨床上表現(xiàn)為雖然整體生長水平良好，但群體疑似多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）發(fā)病率較高（10.10%）。二是檢測的2種病毒核酸陽性檢出率和2種病毒抗體均呈明顯上升態(tài)勢，圓環(huán)病毒2型病毒核酸陽性檢出率3次分別為3.0%、13.1%和98.0%，與此同期，高致病性豬藍耳病病毒核酸陽性檢出率分別為0.0%、10.1%和30.3%，豬圓環(huán)病毒2型抗體陽性率分別為14.1%、96.0%和98.0%，豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽性率分別為97.0%（母源抗體）、61.6%和94.9%。說明豬群進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫后，進入豬圓環(huán)病毒2型感染活躍期時，高致病性豬藍耳病疫苗毒的陽性檢出率呈上升態(tài)勢，相應(yīng)的抗體陽轉(zhuǎn)率也從61.6%上升至94.9%。

3 討論與小結(jié)

3.1 討論 豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）是現(xiàn)階段養(yǎng)豬業(yè)普遍關(guān)注的免疫抑制性疫病。該病的發(fā)生及流行具有普遍性、頑固性和嚴重性。關(guān)于豬圓環(huán)病毒2型感染后引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、呼吸道病綜合征（PRDC）等免疫抑制性綜合征的報道文獻資料很多[1-2]。其中，有報道證實引起此類綜合征的主要元兇是豬圓環(huán)病毒2型與豬藍耳病病毒的混合或協(xié)同感染[3]；有報道證實豬關(guān)于圓環(huán)病毒2型和高致病性豬藍耳病病毒在豬體內(nèi)均存在病毒抗原與抗體共存現(xiàn)象[4-5]；還有報道關(guān)于高致病性豬藍耳病活疫苗免疫后檢測疫苗毒持續(xù)期一般為6周[6]。本次田間調(diào)查高致病性豬藍耳病活疫苗免疫后2個月還能檢測到30%的病毒核酸，說明檢出的病毒核酸主要是疫苗毒，如果如此，那么是否可以斷定在豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下，進行高致病性豬藍耳病免疫后，其持續(xù)帶毒現(xiàn)象會明顯延長。至于豬圓環(huán)病毒2型感染后對高致病性豬藍耳病活疫苗免疫產(chǎn)生何種影響以及程度如何，將有待于進一步開展試驗研究驗證。

3.2 小結(jié) 本次調(diào)查初步結(jié)論是：斷奶仔豬在受到豬圓環(huán)病毒2型自然感染條件下，進行高致病性豬藍耳病活疫苗免疫后26 d時，抗體合格率未達到國家規(guī)定的70%標準，免疫后64 d時，抗體合格率明顯高于70%。

[1][美]斯特勞（Barbara E.St raw）等主編；趙德明等主譯.豬病學（第9版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2008.2：313-318，423-446.

[2]李樹根,孫穎杰.豬繁殖與呼吸綜合癥（PRRS）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，1999.

[3]任靜柏，郜博.引種導(dǎo)致豬圓環(huán)病毒和藍耳病混合感染的診斷與防制[J].農(nóng)業(yè)科學，2009（10）：137-138.

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[6]楊本勇,曹東，姜鳳華等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥活疫苗（JXA1-R）免疫后在血清中存在時間的報告[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2014（9）：1-4.

Investigation immunity effective of the porcine circovirus type 2 of the highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome in natural infection

Wang Kecai1,Li Zhutian2,Zheng Hongl ing1,Yu Changyong,Yang Guol i1, Zhang Li3,An Pengwei4,Li Hongkui1
(1.Animal Epidemic Diseases Control and Prevention Center of Liaoning Province,Liaoning Shenyang 110164; 2.Animal Sanitary cont rol station of Wafangdian City,Liaoning Wafangdian 116300; 3.security detection station of livestock products of Tieling City,Liaoning Tiel ing 112000; 4.Animal husbandry economic management stations in l iaoning province，Liaoning Shenyang 110032)

99 piglets f rom 10 l itters which were probably infected with porcine cirvirus type 2 were immunized with the pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome activated vaccine on the 30th day af ter bir th.Blood were col lected at the 28th,56thand the 94thdays af ter bir th to detects antibody and viral nucleic acid of PCV2 and PRRS2.The test resul ts that,the viral nucleic acid and antibody positive detection rate di f ference were 3.0%and 14.1%、13.1%and 96.0%、98.0% and 98.0%of PCV2,0 and 97.0%、10.1%and 61.6%、30.3%and 94.9%of HP-PRRS.The resul ts suggested that the antibody qual i fied rate didn’t achieve 70%that was formulary count ry af ter immunity HPPRRS S l ive vaccine 26 days,it obviously top 70%af ter immunity HP-PRRS l ive vaccine 64 days when the weaning swinery was ef fected porcine cirvirus type 2 in natural to under take,

Porcine circovirus type 2;Natural ef fective;HP-PRRS;Immunity;Ef fect

S852.65

1672-9692(2015)07-0035-05

2015-04-26

王克才（1965-），男，漢族，?？?，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控等工作。