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【摘 要】 目的：用高效液相色譜法測定吉如很-10（寧心丸）中膽紅素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm），以甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）為流動相，流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果：膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r= 0.9996。精密度試驗(yàn)RSD=0.81%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD=0.21%，平均回收率為99.1%，RSD=1.2%（n=6）。結(jié)論：方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 吉如很-10（寧心丸）;膽紅素;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）13-0006-02

吉如很-10（寧心丸）由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麥冬、阿魏、人工牛黃、檀香、苦參、朱砂等十味藥材組成[1]。具有調(diào)節(jié)氣血不和，改善心腦供血，加強(qiáng)心肌心縮。用于心肌病，高心病，心腦供血不足，植物神經(jīng)紊亂，尤其是冠心病及各種心律失常有良好的療效。本試驗(yàn)對吉如很-10（寧心丸）中人工牛黃所含的有效成分膽紅素進(jìn)行含量測定方法學(xué)考察[2]，得到較滿意的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)結(jié)果，說明本試驗(yàn)方法是可行的，可作為吉如很-10（寧心丸）的質(zhì)量控制方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津LC-10A型高效液相色譜儀（日本），SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機(jī)。

1.2 試藥 膽紅素（批號：100077-200805，中國藥品生物制品檢定所）; 樣品：吉如很-10（批號： 20081003、20090217、20090509，內(nèi)蒙古通遼市科左中旗蒙醫(yī)院提）。甲醇（色譜純，天津天大化學(xué)試劑廠）;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）;以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)：N≥2000;拖尾因子：1.10。檢測過程中系統(tǒng)穩(wěn)定。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取膽紅素對照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，即得（每1ml含膽紅素15.42μg）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，進(jìn)行超聲提?。üβ?20W，頻率40kHz）10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗(yàn) 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照品（缺人工牛黃），操作同樣品分析項(xiàng)下方法，測得結(jié)果為：陰性對照品色譜圖中在與膽紅素對照品色譜相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對吉如很-10中膽紅素的測定無干擾。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取膽紅素對照品溶液（0.01542mg /ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定膽紅素峰面積值，結(jié)果峰面積平均值639133，RSD為0.81%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品（批號20081003）溶液，間隔0、3、6、12、15、19小時、精密量取10μl注入色譜儀，測定，記錄峰面積值，結(jié)果平均峰面積842207.7，RSD為0.1%，表明供試品溶液在19小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品（批號：20090217）6份，研細(xì)，精密稱取約1g，按上述色譜條件測定，測定每份樣品含量。按外標(biāo)法計(jì)算含量。平均含量為0.451 RSD為0.21%，表明本試驗(yàn)重現(xiàn)性良好，結(jié)果見表1。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取供試品（含量0.452mg/g）6份，各約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的膽紅素對照品溶液（濃度為0.01542mg/ml）1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分別按含量測定項(xiàng)下的方法操作，測定每份供試品含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.1%，RSD為1.2%，結(jié)果見表2。

2.10 樣品分析 按上述色譜條件，取三批樣品（批號分別為20081003、20090217、20090509），照供試品溶液的制備方法，各進(jìn)樣各10μl，每批試樣平行檢測三次，以外標(biāo)法計(jì)算含量。該條件下膽紅素的保留時間為16.04min。供試品含量測定結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的選擇 分別考察了不同溶劑加入量和不同超聲時間的提取方法，并考察了提取溶劑加入量（25、50、100ml），提取時間（5、10、15min）。結(jié)果得到最有化的提取方法為加三氯甲烷25ml，超聲處理10min。超聲時間過長或溶劑過熱使膽紅素不穩(wěn)定，影響測定結(jié)果。

3.2 本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，故認(rèn)為可作控制吉如很-10（寧心丸）的檢測方法。

參考文獻(xiàn)

[1]內(nèi)蒙古食品藥品監(jiān)督管理局.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范（第一冊）[S].內(nèi)蒙古：內(nèi)蒙古人民出版社，2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：2014.04.27）endprint

【摘 要】 目的：用高效液相色譜法測定吉如很-10（寧心丸）中膽紅素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm），以甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）為流動相，流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果：膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r= 0.9996。精密度試驗(yàn)RSD=0.81%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD=0.21%，平均回收率為99.1%，RSD=1.2%（n=6）。結(jié)論：方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 吉如很-10（寧心丸）;膽紅素;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）13-0006-02

吉如很-10（寧心丸）由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麥冬、阿魏、人工牛黃、檀香、苦參、朱砂等十味藥材組成[1]。具有調(diào)節(jié)氣血不和，改善心腦供血，加強(qiáng)心肌心縮。用于心肌病，高心病，心腦供血不足，植物神經(jīng)紊亂，尤其是冠心病及各種心律失常有良好的療效。本試驗(yàn)對吉如很-10（寧心丸）中人工牛黃所含的有效成分膽紅素進(jìn)行含量測定方法學(xué)考察[2]，得到較滿意的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)結(jié)果，說明本試驗(yàn)方法是可行的，可作為吉如很-10（寧心丸）的質(zhì)量控制方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津LC-10A型高效液相色譜儀（日本），SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機(jī)。

1.2 試藥 膽紅素（批號：100077-200805，中國藥品生物制品檢定所）; 樣品：吉如很-10（批號： 20081003、20090217、20090509，內(nèi)蒙古通遼市科左中旗蒙醫(yī)院提）。甲醇（色譜純，天津天大化學(xué)試劑廠）;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）;以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)：N≥2000;拖尾因子：1.10。檢測過程中系統(tǒng)穩(wěn)定。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取膽紅素對照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，即得（每1ml含膽紅素15.42μg）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，進(jìn)行超聲提?。üβ?20W，頻率40kHz）10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗(yàn) 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照品（缺人工牛黃），操作同樣品分析項(xiàng)下方法，測得結(jié)果為：陰性對照品色譜圖中在與膽紅素對照品色譜相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對吉如很-10中膽紅素的測定無干擾。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取膽紅素對照品溶液（0.01542mg /ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定膽紅素峰面積值，結(jié)果峰面積平均值639133，RSD為0.81%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品（批號20081003）溶液，間隔0、3、6、12、15、19小時、精密量取10μl注入色譜儀，測定，記錄峰面積值，結(jié)果平均峰面積842207.7，RSD為0.1%，表明供試品溶液在19小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品（批號：20090217）6份，研細(xì)，精密稱取約1g，按上述色譜條件測定，測定每份樣品含量。按外標(biāo)法計(jì)算含量。平均含量為0.451 RSD為0.21%，表明本試驗(yàn)重現(xiàn)性良好，結(jié)果見表1。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取供試品（含量0.452mg/g）6份，各約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的膽紅素對照品溶液（濃度為0.01542mg/ml）1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分別按含量測定項(xiàng)下的方法操作，測定每份供試品含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.1%，RSD為1.2%，結(jié)果見表2。

2.10 樣品分析 按上述色譜條件，取三批樣品（批號分別為20081003、20090217、20090509），照供試品溶液的制備方法，各進(jìn)樣各10μl，每批試樣平行檢測三次，以外標(biāo)法計(jì)算含量。該條件下膽紅素的保留時間為16.04min。供試品含量測定結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的選擇 分別考察了不同溶劑加入量和不同超聲時間的提取方法，并考察了提取溶劑加入量（25、50、100ml），提取時間（5、10、15min）。結(jié)果得到最有化的提取方法為加三氯甲烷25ml，超聲處理10min。超聲時間過長或溶劑過熱使膽紅素不穩(wěn)定，影響測定結(jié)果。

3.2 本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，故認(rèn)為可作控制吉如很-10（寧心丸）的檢測方法。

參考文獻(xiàn)

[1]內(nèi)蒙古食品藥品監(jiān)督管理局.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范（第一冊）[S].內(nèi)蒙古：內(nèi)蒙古人民出版社，2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：2014.04.27）endprint

【摘 要】 目的：用高效液相色譜法測定吉如很-10（寧心丸）中膽紅素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm），以甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）為流動相，流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果：膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r= 0.9996。精密度試驗(yàn)RSD=0.81%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD=0.21%，平均回收率為99.1%，RSD=1.2%（n=6）。結(jié)論：方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 吉如很-10（寧心丸）;膽紅素;高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）13-0006-02

吉如很-10（寧心丸）由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麥冬、阿魏、人工牛黃、檀香、苦參、朱砂等十味藥材組成[1]。具有調(diào)節(jié)氣血不和，改善心腦供血，加強(qiáng)心肌心縮。用于心肌病，高心病，心腦供血不足，植物神經(jīng)紊亂，尤其是冠心病及各種心律失常有良好的療效。本試驗(yàn)對吉如很-10（寧心丸）中人工牛黃所含的有效成分膽紅素進(jìn)行含量測定方法學(xué)考察[2]，得到較滿意的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)結(jié)果，說明本試驗(yàn)方法是可行的，可作為吉如很-10（寧心丸）的質(zhì)量控制方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津LC-10A型高效液相色譜儀（日本），SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機(jī)。

1.2 試藥 膽紅素（批號：100077-200805，中國藥品生物制品檢定所）; 樣品：吉如很-10（批號： 20081003、20090217、20090509，內(nèi)蒙古通遼市科左中旗蒙醫(yī)院提）。甲醇（色譜純，天津天大化學(xué)試劑廠）;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱（150×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液（86∶10∶4）;以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長為450nm;進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)：N≥2000;拖尾因子：1.10。檢測過程中系統(tǒng)穩(wěn)定。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取膽紅素對照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，即得（每1ml含膽紅素15.42μg）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，進(jìn)行超聲提?。üβ?20W，頻率40kHz）10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗(yàn) 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照品（缺人工牛黃），操作同樣品分析項(xiàng)下方法，測得結(jié)果為：陰性對照品色譜圖中在與膽紅素對照品色譜相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對吉如很-10中膽紅素的測定無干擾。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取膽紅素對照品溶液（0.01542mg /ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定膽紅素峰面積值，結(jié)果峰面積平均值639133，RSD為0.81%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品（批號20081003）溶液，間隔0、3、6、12、15、19小時、精密量取10μl注入色譜儀，測定，記錄峰面積值，結(jié)果平均峰面積842207.7，RSD為0.1%，表明供試品溶液在19小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品（批號：20090217）6份，研細(xì)，精密稱取約1g，按上述色譜條件測定，測定每份樣品含量。按外標(biāo)法計(jì)算含量。平均含量為0.451 RSD為0.21%，表明本試驗(yàn)重現(xiàn)性良好，結(jié)果見表1。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取供試品（含量0.452mg/g）6份，各約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的膽紅素對照品溶液（濃度為0.01542mg/ml）1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分別按含量測定項(xiàng)下的方法操作，測定每份供試品含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.1%，RSD為1.2%，結(jié)果見表2。

2.10 樣品分析 按上述色譜條件，取三批樣品（批號分別為20081003、20090217、20090509），照供試品溶液的制備方法，各進(jìn)樣各10μl，每批試樣平行檢測三次，以外標(biāo)法計(jì)算含量。該條件下膽紅素的保留時間為16.04min。供試品含量測定結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的選擇 分別考察了不同溶劑加入量和不同超聲時間的提取方法，并考察了提取溶劑加入量（25、50、100ml），提取時間（5、10、15min）。結(jié)果得到最有化的提取方法為加三氯甲烷25ml，超聲處理10min。超聲時間過長或溶劑過熱使膽紅素不穩(wěn)定，影響測定結(jié)果。

3.2 本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，故認(rèn)為可作控制吉如很-10（寧心丸）的檢測方法。

參考文獻(xiàn)

[1]內(nèi)蒙古食品藥品監(jiān)督管理局.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范（第一冊）[S].內(nèi)蒙古：內(nèi)蒙古人民出版社，2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

（收稿日期：2014.04.27）endprint