孫國(guó)鋒，張智英，白義春，魏澤輝

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

睪丸注射慢病毒生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞的研究

孫國(guó)鋒，張智英，白義春，魏澤輝

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

【目的】 采用睪丸注射慢病毒的方法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞以提高轉(zhuǎn)基因效率，使轉(zhuǎn)基因雞的批量生產(chǎn)變得簡(jiǎn)單可行?！痉椒ā?用磷酸鈣沉淀法包裝慢病毒，對(duì)慢病毒包裝體系中的質(zhì)?？偭亢虷N Buffer的pH值進(jìn)行優(yōu)化，以包裝出滴度較高的慢病毒；然后將慢病毒注射到受精雞蛋的胚胎中驗(yàn)證其活性；最后，將慢病毒注射到8日齡公雞的睪丸內(nèi)，待其性成熟以后，將精液DNA呈陽性的公雞與非轉(zhuǎn)基因母雞進(jìn)行交配生產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因雞?！窘Y(jié)果】 當(dāng)90 mm培養(yǎng)皿中質(zhì)粒總量為50 μg、HN Buffer的pH值為7.05時(shí)慢病毒的包裝效率最高，在該條件下包裝出的慢病毒滴度高達(dá)7.5×107TU/mL；采用慢病毒胚胎注射途徑成功地生產(chǎn)出增強(qiáng)綠色熒光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP)轉(zhuǎn)基因雞；采用慢病毒睪丸注射途徑生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因雞后代中能檢測(cè)到eGFP目的基因，但未檢測(cè)到其相關(guān)的表達(dá)?！窘Y(jié)論】 慢病毒睪丸注射途徑能夠?qū)⑼庠椿蛘系骄杉?xì)胞中，并遺傳給后代。

轉(zhuǎn)基因雞；慢病毒；胚胎注射；睪丸注射

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)成為發(fā)育生物學(xué)、行為生物學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)及其他相關(guān)領(lǐng)域研究的重要工具，并在許多物種，包括細(xì)菌、植物和動(dòng)物中得到了廣泛運(yùn)用[1]。長(zhǎng)久以來，雞由于其卵生、飼養(yǎng)周期短、生產(chǎn)性能高以及胚胎容易獲得等諸多優(yōu)點(diǎn)成為理想的動(dòng)物模型[2]，然而由于禽類獨(dú)特的生理構(gòu)造，使得轉(zhuǎn)基因雞的生產(chǎn)仍然處于相當(dāng)困難的局面。因此，探索出一種高效、穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)方法，將會(huì)對(duì)生命科學(xué)研究產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。在過去數(shù)十年中，人們嘗試了很多方法來生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞，包括脂質(zhì)體法[3]、電轉(zhuǎn)染法[4]、納米材料法[5]以及piggyBac轉(zhuǎn)座子法[6-8]等。盡管人們運(yùn)用這些方法已成功地生產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因雞，但這些由非病毒性載體生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞的方法由于存在著外源基因瞬時(shí)表達(dá)、轉(zhuǎn)染效率低以及外源基因并未整合到宿主基因組中等缺點(diǎn)，一直沒有得到廣泛應(yīng)用。而基于病毒性載體的轉(zhuǎn)基因方法由于具有較強(qiáng)的細(xì)胞感染能力，因而在很多物種中得到了廣泛應(yīng)用，如利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因小鼠[9]、雞[10]、豬[11-12]和牛[13]，均顯示出較強(qiáng)的、穩(wěn)定的綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)表達(dá)，這為利用慢病毒載體法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞提供了理論上的支持。據(jù)報(bào)道，一些研究團(tuán)隊(duì)通過將慢病毒注射到新生雞蛋的胚下腔成功地生產(chǎn)出了轉(zhuǎn)基因雞[14-16]；另外，Scott等[17]利用同樣的方法生產(chǎn)出組織特異性轉(zhuǎn)基因鵪鶉，其G0代的轉(zhuǎn)基因效率為10%(8/80)，G0代與G1代之間的傳遞效率在8%～33%。這些結(jié)果證實(shí)，慢病毒胚胎注射途徑是一種高效可行的轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)方法。

為了提高轉(zhuǎn)基因效率以及使轉(zhuǎn)基因雞批量生產(chǎn)變得簡(jiǎn)單可行，本研究嘗試通過睪丸直接注射慢病毒的方法來生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞，在對(duì)慢病毒包裝體系優(yōu)化之后，將包裝出的慢病毒注射到新生雞蛋的胚下腔生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞來驗(yàn)證其活性，然后將慢病毒直接注射到公雞的睪丸內(nèi)，待其性成熟后，將精液DNA呈陽性的公雞與非轉(zhuǎn)基因母雞交配檢測(cè)外源基因的傳遞效率。

1 材料與方法

1.1 材 料

新鮮受精伊薩雞蛋以及8日齡伊薩小公雞，由西北農(nóng)林科技大學(xué)畜牧站提供。包裝質(zhì)粒pMDL(表達(dá)Gag-Pol)、pRSV-Rev(表達(dá)Rev)和pMDG(表達(dá) VSV-G 包膜蛋白)均購自Invitrogen，轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pCD513B-1(含有eGFP基因，由EF1α啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng))由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物脂肪沉淀與肌肉發(fā)育實(shí)驗(yàn)室提供，293T細(xì)胞由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物基因組學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存，GAPDH上、下游引物以及eGFP上游引物和3′-LTR下游引物均由深圳華大基因合成，CaCl2、NaH2PO4、Hepes、NaCl、蛋白酶K等購自Sigma，EasyTaqDNA聚合酶、TaqBuffer、dNTPs、Trans2K Plus DNA Marker、Protein Ruler Ⅱ、EasySee Western Marker等購自Transgene，鼠單抗(anti-GFP)購自Abcam，羊抗鼠(Goat anti-Mouse IgG)二抗購自Santa，胎牛血清購自Hyclne，DMEM購自Gibco，Western blot用PVDF膜、ECL顯色液等購自Millipire，RIPA組織細(xì)胞裂解液購自北京CellShip。

1.2 慢病毒包裝

本研究采用4質(zhì)粒包裝系統(tǒng)、磷酸鈣沉淀法包裝慢病毒。首先將4種質(zhì)粒pMDL、pRSV-Rev、pMDG、pCD513B-1按照1∶1∶1∶2的質(zhì)量比(90 mm培養(yǎng)皿中4種質(zhì)?？偭繛?5 μg)混合后共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中，16～18 h后更換培養(yǎng)基，48 h后收集上清液中的病毒，同時(shí)采用液氮反復(fù)凍融法裂解下層細(xì)胞并收集細(xì)胞中的病毒，然后用等比例稀釋法來計(jì)算病毒的滴度。

1.3 慢病毒包裝體系的優(yōu)化

在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞時(shí)4種質(zhì)粒的總量以及磷酸鈣沉淀法中HN Buffer的pH值對(duì)最終病毒的滴度影響較大。因此，設(shè)置了6個(gè)梯度的pH值，分別為6.94，7.00，7.05，7.11，7.16和7.24，并且將4種質(zhì)粒的量加倍(90 mm培養(yǎng)皿質(zhì)?？偭繛?0 μg，比例不變)來優(yōu)化慢病毒的包裝體系，以此探索包裝高滴度慢病毒的最適條件。

1.4 胚胎注射

為了驗(yàn)證優(yōu)化后的慢病毒能否用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞，對(duì)170枚受精雞蛋，以每個(gè)胚胎2.5 μL(7.5×107TU/mL)的量注射慢病毒。首先將新鮮受精雞蛋水平放置(雞蛋的長(zhǎng)軸呈水平方向)24 h以上，使胚胎處于雞蛋的上部。用消毒酒精和碘酒擦拭蛋殼的表面后，用手持電動(dòng)打磨機(jī)在蛋殼上部打一個(gè)直徑約5 mm的孔。然后用細(xì)胞顯微注射儀將大約 2.5 μL的慢病毒懸液注射到胚胎的胚下腔，滴加20 μL的雙抗后用熱熔膠對(duì)蛋殼封口。在溫度為37.8 ℃、相對(duì)濕度為65%的條件下孵化，定時(shí)自動(dòng)轉(zhuǎn)蛋，直至出雛。然后從孵化雛雞的肝臟、心臟、皮膚、肌肉、小腸、大腸、眼球、腳趾以及喙等組織中用酚仿抽提法提取基因組DNA，用組織裂解法提取總蛋白，分別用于PCR檢測(cè)和Western blot分析。同時(shí)，對(duì)相應(yīng)組織做5 μm的冰凍切片，在倒置熒光顯微鏡下觀察eGFP的表達(dá)。

1.5 睪丸注射

15只8日齡的小公雞在試驗(yàn)前1 d停止喂料，正常飲水(添加0.2%維生素C、0.03%維生素K3和0.5%的阿莫西林)。乙醚麻醉(自然吸入乙醚氣體約30 s)后沿最后一根肋骨外緣劃開小公雞皮膚(創(chuàng)口約1 cm)，鈍性分離肌肉，打開腹腔曝露出一側(cè)睪丸。將30 μL(7.5×107TU/mL)慢病毒懸液用微量進(jìn)樣器分多個(gè)位點(diǎn)注射到睪丸中，然后縫合創(chuàng)口，將小公雞正常飼養(yǎng)至性成熟。采集供試公雞的精液，提取基因組DNA進(jìn)行PCR鑒定。將精液呈陽性的公雞與非轉(zhuǎn)基因母雞進(jìn)行交配，對(duì)其后代進(jìn)行eGFP轉(zhuǎn)基因檢測(cè)。

1.6 轉(zhuǎn)基因雞的PCR和Western blot分析

以5′-CAGAACATCATCCCAGCGTCCAC-3′(3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)上游引物) 和 5′-CACTGGCTCCTACCTCCTGACAC-3′(GAPDH下游引物)為引物，以提取的基因組DNA作為模板，使用“94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸10 min”的反應(yīng)程序，擴(kuò)增116 bp的GAPDH片段作為對(duì)照，以檢測(cè)所提取的基因組DNA的品質(zhì)。以5′-CAGTGCTTCAGCCGCTACCC-3′(eGFP上游引物)和5′-ACACAACAGACGGGCACACAC-3′(3′-LTR下游引物)為引物，以提取的基因組DNA作為模板，使用“94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸10 min”的反應(yīng)程序，擴(kuò)增1 654 bp的eGFP&3′-LTR片段作為目的片段，用于檢測(cè)是否攜帶外源基因。以eGFP上游引物和3′-LTR下游引物為引物，以正常雞的基因組DNA、質(zhì)粒pCD513B-1以及雙蒸水為模板，使用“94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸10 min”的反應(yīng)程序分別進(jìn)行擴(kuò)增，作為陰性對(duì)照(N)、陽性對(duì)照(P)和水對(duì)照(W)。PCR反應(yīng)體系均為20 μL：DNA模版1 μL，上游引物和下游引物各1 μL，TaqDNA聚合酶0.2 μL，TaqBuffer 2 μL，dNTPs 1.6 μL，ddH2O 13.2 μL。

采用Western blot檢測(cè)eGFP是否在雛雞的組織中表達(dá)。用RIPA細(xì)胞組織裂解液對(duì)上述組織裂解，將提取到的組織裂解產(chǎn)物用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然后將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜上，用50 g/L脫脂牛奶室溫下封閉2 h，10 mL TBST緩沖液清洗3次。之后用GFP抗體(鼠單抗，1∶500)在4 ℃下孵育過夜，10 mL TBST緩沖液清洗3次；再用羊抗鼠二抗(1∶3 000)在室溫下孵育2 h，10 mL TBST緩沖液清洗3次，最后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察目的條帶。

采用冰凍切片觀察目的蛋白的表達(dá)。將相應(yīng)的組織塊經(jīng)中性固定液固定24 h以上后，分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%，20%和30%的梯度蔗糖溶液脫水24 h，冰凍后切片，厚度5 μm，選取不同位置的切片在熒光倒置顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 慢病毒包裝及其體系的優(yōu)化

采用磷酸鈣沉淀法，當(dāng)HN Buffer的pH值為原始的7.10、90 mm培養(yǎng)皿中質(zhì)?？偭繛?5 μg時(shí)，獲得的慢病毒最高滴度為8.0×104TU/mL。在pH值維持不變，4種質(zhì)粒的量加倍后(90 mm培養(yǎng)皿中質(zhì)?？偭繛?0 μg)慢病毒包裝效率明顯提高，滴度為9.5×105TU/mL，結(jié)果如圖1-Ⅰ，Ⅱ所示。在90 mm培養(yǎng)皿中質(zhì)?？偭繛?0 μg條件下，慢病毒包裝效率在不同pH值(6.94，7.00，7.05，7.11，7.16，7.24)下有很大差異，結(jié)果如圖1-A-F所示，其中在pH值為7.05時(shí)包裝效率最高，滴度為7.5×107TU/mL。

2.2 胚胎注射生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞

注射的170枚受精雞蛋共孵化出21只雛雞(12.4%)。對(duì)其組織樣提取基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示6只雞(28.3%)能檢測(cè)到1 654 bp的目的基因eGFP&3′-LTR，其編號(hào)分別為2、6、10、11、17以及19號(hào)(圖2-A)。提取這6只雞的組織總蛋白進(jìn)行Western blot分析，發(fā)現(xiàn)其中3只雞(14.3%)能夠檢測(cè)到eGFP的表達(dá)，編號(hào)分別為2、10和19號(hào)(圖2-B)。通過組織冰凍切片觀察，發(fā)現(xiàn)在2號(hào)雞的皮膚和肌肉、10號(hào)雞的肝臟以及19號(hào)雞的眼球中均能觀察到綠色熒光(圖2-C)。

2.3 睪丸注射生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞

供試公雞精液DNA的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，編號(hào)為02502和02506的2只雞的精液呈陽性(圖3-A)。將這2只公雞與非轉(zhuǎn)基因母雞交配，產(chǎn)生了80只G1代，對(duì)其進(jìn)行PCR和Western blot分析檢測(cè)，結(jié)果顯示02506號(hào)雞的38只G1代中僅有1只(編號(hào)為02506-35)能檢測(cè)出eGFP目的基因(部分結(jié)果如圖3-B)，但沒有檢測(cè)到eGFP的表達(dá)(圖略)；02502號(hào)雞的42只G1代中均沒有檢測(cè)到eGFP目的基因及其表達(dá)(圖略)。

圖1 質(zhì)?？偭亢虷N Buffer的pH值對(duì)慢病毒包裝效率的影響(×100)Ⅰ.質(zhì)粒總量為25 μg時(shí)(90 mm培養(yǎng)皿)慢病毒的包裝效率，滴度為8.0×104TU/mL；Ⅱ.質(zhì)粒總量為50 μg時(shí)(90 mm培養(yǎng)皿)慢病毒的包裝效率，滴度為9.5×105TU/mL；A.pH值為6.94，滴度為5.9×103TU/mL；B.pH值為7.00，滴度為4.4×106TU/mL；C.pH值為7.05，滴度為7.5×107TU/mL；D.pH值為7.11，滴度為9.0×105TU/mL；E.pH值為7.16，滴度為8.6×104TU/mL；F.pH值為7.24，滴度為7.8×102TU/mL
Fig.1 Effect of plasmid quantity and pH of the HN buffer on lentivirus packaging efficiency(×100) Ⅰ.Lentivirus packaging efficiency when the total amount of the four plasmids was 25 μg in each 90 mm petri dish,the titer was 8.0×104TU/mL；Ⅱ.The double amount of plasmids,the titer was 9.5×105TU/mL；A.HN buffer’s pH=6.94,titer was 5.9×103TU/mL;B.pH=7.00,titer was 4.4×106TU/mL;C.pH=7.05,titer was 7.5×107TU/mL;D.pH=7.11,titer was 9.0×105TU/mL;E.pH=7.16,titer was 8.6×104TU/mL;F.pH=7.24,titer was 7.8×102TU/mL

圖2 嵌合體轉(zhuǎn)基因雞的PCR、Western blot分析及冰凍切片檢測(cè)結(jié)果
A.嵌合體轉(zhuǎn)基因雞的PCR分析：N.非轉(zhuǎn)基因雞(陰性對(duì)照)；P.陽性對(duì)照；W.水對(duì)照；M.Trans2K Plus Marker B.嵌合體轉(zhuǎn)基因雞的Western Blot分析：P.陽性對(duì)照(目標(biāo)條帶27 ku)。1～21.雞只編號(hào)C.嵌合體轉(zhuǎn)基因雞的組織冰凍切片檢測(cè)：Ⅰ-Ⅳ分別為皮膚(2號(hào))、肌肉(2號(hào))、肝臟(10號(hào))和眼球(19號(hào))(×200)
Fig.2 PCR,Western blot and tissues freezing section analysis of chimera chicken
A. PCR analysis of chimera chicken：N.Non-transgenic chicken (negative control);P.Positive control;W.Water control;M.Trans2K Plus MarkerB.Western blot analysis of chimera chicken：P.eGFP positive control (target band 27 ku).1-21.The numbers of chicken C.Tissues freezing section analysis of chimera chicken：Ⅰ-Ⅳ were skin (2#), muscle (2#), liver (10#) and eyeball (19#) respectively (×200)

圖3 睪丸注射生產(chǎn)的G0和G1代雞的PCR檢測(cè)

3 討 論

近年來，有很多關(guān)于病毒載體通過胚胎注射法成功生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞的報(bào)道[14-18]，說明慢病毒能夠感染活體內(nèi)具有分裂和分化能力的細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上，本研究著重探索了通過睪丸注射慢病毒來生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞的方法。

應(yīng)用磷酸鈣沉淀法將慢病毒載體4質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞進(jìn)行包裝，是慢病毒包裝的常用方法，但細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中的質(zhì)?？偭亢虷N Buffer的pH值會(huì)嚴(yán)重影響到慢病毒的包裝效率。本研究發(fā)現(xiàn)，90 mm培養(yǎng)皿中質(zhì)?？偭繛?0 μg、HN Buffer的pH值為7.05時(shí)收獲的慢病毒滴度最高。將包裝好的慢病毒注射到雞受精蛋胚胎中，發(fā)現(xiàn)孵化得到的雞雛中28.3%的個(gè)體能檢測(cè)到外源基因，14.3%的個(gè)體能夠檢測(cè)到外源蛋白表達(dá)，說明利用慢病毒進(jìn)行胚胎注射可以獲得較高的轉(zhuǎn)基因效率[14-18]。

慢病毒的胚胎注射法雖然已被證明是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雞的高效可行辦法[14-18]，但這種方法獲得的嵌合體其生殖細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率卻并不穩(wěn)定。如果能夠?qū)⒙《局苯幼⑸涞焦u的睪丸中，使其在睪丸發(fā)育的早期就能對(duì)精原干細(xì)胞的基因組進(jìn)行修飾，就可以提高后代中攜帶外源基因的比例。本研究通過對(duì)15只8日齡的小公雞進(jìn)行睪丸注射，發(fā)現(xiàn)性成熟后有2只公雞(13.3%)的精液呈陽性，其中從1只公雞的38只后代中篩選到1只(2.6%)攜帶外源基因，略低于McGrew等[14]報(bào)道的胚胎注射獲得G0代嵌合體到G1代的傳遞效率(4%～45%)，但本研究結(jié)果初步證明，通過在小公雞睪丸內(nèi)注射慢病毒可以將外源基因整合到精原干細(xì)胞，并可通過精子將外源基因傳遞到下一代中。另外，利用睪丸注射生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以縮短研究周期，減少轉(zhuǎn)基因個(gè)體的篩選數(shù)量。如果能夠通過進(jìn)一步研究提高慢病毒對(duì)精原干細(xì)胞的感染效率并增加后代中攜帶外源基因的個(gè)體比率，利用睪丸注射慢病毒的方法必將對(duì)轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)的研究起到促進(jìn)作用。

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Transgenic chicken generated by testis injection of recombinant lentivirus

SUN Guo-feng,ZHANG Zhi-ying,BAI Yi-chun,WEI Ze-hui

(CollegeofAnimalScience&Technology,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

【Objective】 We applied testis injection with recombinant lentivirus to improve transgene efficiency to make generation of transgenic chicken simple. 【Method】 Plasmid quantity and pH of HN buffer in the packaging system were optimized to produce recombinant lentiviruses by calcium phosphate precipitation with high titers.Then,the activity of recombinant lentiviruses was tested by being injected into embryos of new fresh fertilized eggs.Testis of 8-day-old male chicken was injected with lentivirus.After being sexual mature,chicken with transgenic sperm were verified by examining sperm DNA and were mated with normal female chicken to generate transgenic offspring.【Result】 The titers of lentivirus was up to 7.5×107TU/mL when the plasmid quantity was 50 μg in 90 mm petri dish and the pH of HN Buffer was 7.05.Transgenic chicken were successfully generated.Target eGFP gene was verified in the transgenic offspring generated by testis injection method based on lentivirus,but no protein was detected. 【Conclusion】 The exogenous gene could be integrated into spermatogonial stem cells and transferred to offspring through testis injection approach based on lentivirus.

transgenic chicken;lentivirus;embryo injection;testis injection

時(shí)間:2015-11-11 16:16

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.12.001

2014-04-08

教育部高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(利用慢病毒建立轉(zhuǎn)基因雞動(dòng)物模型的研究，項(xiàng)目編號(hào)：QN2009018)

孫國(guó)鋒(1987-)，男，河南洛陽人，在讀碩士，主要從事轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究。E-mail：sunguofeng1129@126.com

魏澤輝(1974-)，男(蒙古族)，遼寧朝陽人，副教授，主要從事轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究。E-mail：weizehui7848@163.com

S831.2

A

1671-9387(2015)12-0001-06

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