林 濤, 樊建麟, 劉興勇, 陳興連, 李彥剛, 劉宏程*

(1. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所, 云南 昆明 650223; 2. 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(昆明), 云南 昆明 650223)

研究論文

分散固相萃取凈化-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺殘留

林 濤1,2, 樊建麟1, 劉興勇1, 陳興連1, 李彥剛1, 劉宏程1,2*

(1. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所, 云南 昆明 650223; 2. 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(昆明), 云南 昆明 650223)

建立了雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺殘留量的分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。雞蛋和雞肉樣品經(jīng)氨水-乙腈(2∶98, v/v)提取后,提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈芍? mL后,利用C18和NH2填料進(jìn)行分散固相萃取凈化,過(guò)濾膜后分析。采用ZORBAX C18色譜柱分離,用1 mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%(v/v)甲酸)-甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。結(jié)果表明,金剛烷胺和金剛乙胺在0.15～10.0 μg/L范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系,雞蛋和雞肉中的檢出限均為0.05 μg/kg,定量限均為0.20 μg/kg。當(dāng)2種藥物在雞蛋和雞肉中的加標(biāo)水平為0.2、1.0和2.0 μg/kg時(shí),平均回收率范圍為89%～108%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為5.0%～8.6%。該方法能夠滿足雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺殘留量分析的要求。

分散固相萃取;超高效液相色譜;串聯(lián)質(zhì)譜;金剛烷胺;金剛乙胺;雞蛋;雞肉

金剛烷胺(amantadine)和金剛乙胺(rimantadine)都屬于金剛烷胺類(lèi)藥物(化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示),其結(jié)構(gòu)中都含有對(duì)稱(chēng)的3個(gè)6元環(huán),其C-C鍵的鍵長(zhǎng)為0.154 nm,具有較高的對(duì)稱(chēng)性,使其能夠在晶格中緊密堆積而具有較好的穩(wěn)定性。熔點(diǎn)較高,約為200～210 ℃。同時(shí)在其結(jié)構(gòu)中還含有氨基,呈現(xiàn)出一定的堿性,常溫條件下為白色至淡黃色粉末,易溶于有機(jī)溶劑,不溶于水[1,2]。

圖1 金剛烷胺和金剛乙胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of amantadine and rimantadine

金剛烷胺和金剛乙胺是最早用于抑制人類(lèi)流感病毒的藥物[3],隨后又廣泛用于禽類(lèi)流感的治療,對(duì)于流感的預(yù)防和治療效果較好,但是禽類(lèi)體內(nèi)過(guò)量殘留的金剛烷胺類(lèi)藥物會(huì)對(duì)機(jī)體的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生較大的危害,再加上耐藥性的日趨嚴(yán)重[4,5],因此美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)在2006年已經(jīng)禁止了金剛烷胺類(lèi)藥物在畜禽中的使用,而我國(guó)農(nóng)業(yè)部也在2005年就已經(jīng)規(guī)定了禁止在畜禽養(yǎng)殖中使用金剛烷胺類(lèi)藥物,且不得檢出。但目前違法使用金剛烷胺類(lèi)藥物的現(xiàn)象仍然時(shí)有發(fā)生,這對(duì)于我國(guó)消費(fèi)者的身體健康、畜禽及其產(chǎn)品的出口貿(mào)易都將造成很大的影響。

金剛烷胺類(lèi)藥物殘留的測(cè)定方法主要包括氣相色譜[6,7]和液相色譜[8,9]等,這些方法操作復(fù)雜,通常都需要衍生化反應(yīng),耗時(shí)費(fèi)力。近年來(lái),高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜因其分析速度快、靈敏度高、定性準(zhǔn)確等而廣泛地應(yīng)用于農(nóng)獸藥殘留的檢測(cè)中[10-12],也大量應(yīng)用于畜禽及其產(chǎn)品中金剛烷胺類(lèi)藥物的快速篩查和測(cè)定[13-15]。利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)畜禽及其產(chǎn)品中金剛烷胺類(lèi)藥物的測(cè)定過(guò)程中,常采用固相萃取小柱對(duì)其進(jìn)行富集凈化[16,17],固相萃取小柱法作為經(jīng)典的樣品前處理方法,對(duì)于金剛烷胺類(lèi)藥物的凈化富集效果較好,但是利用固相萃取柱對(duì)于金剛烷類(lèi)的凈化步驟較為復(fù)雜,所需的洗脫溶劑復(fù)雜,需要多種溶劑首先對(duì)固相萃取柱進(jìn)行活化后上柱,然后再使用多種溶劑洗脫雜質(zhì)后才能對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行洗脫,且使用的固相萃取小柱通常為價(jià)格昂貴的離子交換柱,對(duì)于常規(guī)的篩查測(cè)定不具有普遍性;另一方面,我國(guó)畜禽及其產(chǎn)品中的金剛烷胺類(lèi)藥物殘留的測(cè)定方法目前尚沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),不利于相關(guān)部門(mén)對(duì)畜禽及其產(chǎn)品中金剛烷胺類(lèi)藥物的監(jiān)管。因此,利用常規(guī)的凈化填料,采用便捷簡(jiǎn)單的分散固相萃取法,建立簡(jiǎn)單快速、能夠廣泛推廣應(yīng)用的金剛烷胺類(lèi)藥物殘留的測(cè)定方法,具有十分重要的意義。本研究以雞蛋和雞肉為研究對(duì)象,優(yōu)化了分散固相萃取的條件以及色譜、質(zhì)譜等相關(guān)條件,以建立快速準(zhǔn)確的測(cè)定方法,為畜禽及其產(chǎn)品中金剛烷胺類(lèi)藥物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的建立提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1290超高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司); ZORBAX RRHD色譜柱 (50 mm×2.1 mm, 1.8 μm,美國(guó)Agilent公司); API4000三重四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)AB公司);渦旋振蕩器(美國(guó)Thermo Scientific公司); AE100電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司); TGL-15B型高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠); N-EVAP型氮吹儀(美國(guó)Organomation公司)。

金剛烷胺、金剛乙胺(純度≥97%,美國(guó)Sigma公司);氨水(分析純,含量25%～28%,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑上海有限公司);甲醇、乙腈(色譜純,德國(guó)Merck公司);甲酸、乙酸(色譜純,美國(guó)Sigma公司);無(wú)水MgSO4(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司);純凈水(杭州娃哈哈公司); ProElut C18、PSA、NH2、Florisil填料(50 μm,中國(guó)迪馬科技)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及相關(guān)溶液配制

分別稱(chēng)取適量的金剛烷胺和金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用乙腈稀釋成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。再分別準(zhǔn)確吸取1 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中,用乙腈定容至25 mL,得到40 mg/L的金剛烷胺和金剛乙胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,低溫下避光保存。

氨水-乙腈(2∶98, v/v)溶液:取2 mL氨水于100 mL容量瓶中,用乙腈定容至100 mL,混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 樣品處理

雞蛋樣品去殼后用組織搗碎機(jī)攪拌混勻(雞肉樣品去毛、去皮后用組織搗碎機(jī)攪拌混勻),稱(chēng)取2 g(精確至0.01 g)雞蛋或雞肉樣品于50 mL離心管中,加入10.0 mL氨水-乙腈(2∶98, v/v)溶液,渦旋提取3 min, 5 000 r/min下離心5 min后將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL刻度試管中,氮吹儀吹至1 mL,分別加入20 mg C18填料、30 mg NH2填料和150 mg無(wú)水MgSO4,渦旋提取15 s,混合液過(guò)0.22 μm濾膜,待分析。

1.4 色譜條件

流動(dòng)相A為甲醇,B為1 mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%(v/v)甲酸);流速:0.2 mL/min;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;梯度洗脫程序:0.00～3.00 min, 20%A～95%A; 3.00～4.00 min, 95%A; 4.00～4.20 min, 95%A～20%A; 4.20～6.00 min, 20%A。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源:ESI源;掃描方式:正離子掃描;GS1 55 L/min, GS2 55 L/min,氣簾氣20 L/min;輔助加熱氣溫度650 ℃,噴霧電壓5 500 V;監(jiān)測(cè)模式:MRM。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜和色譜條件的優(yōu)化

文獻(xiàn)中對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的檢測(cè)離子對(duì)的報(bào)道已經(jīng)較多,但是不同質(zhì)譜儀的結(jié)構(gòu)及設(shè)計(jì)不同,相關(guān)的電壓各不相同。在質(zhì)譜分析中,對(duì)于化合物的電離影響較大的主要包括了去簇電壓(DP)和碰撞電壓(CE)。當(dāng)DP高時(shí),化合物可能在源內(nèi)分解或碎裂,且高的DP值會(huì)導(dǎo)致多電荷離子比例低,多聚體也減少;而當(dāng)DP低時(shí),母離子豐度相對(duì)提高,靈敏度也會(huì)相應(yīng)提高,使得譜圖簡(jiǎn)單。當(dāng)CE過(guò)高時(shí),會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的碎片,使得二級(jí)質(zhì)譜信息過(guò)多而復(fù)雜;當(dāng)CE過(guò)低時(shí),則會(huì)產(chǎn)生大碎片和母離子,使得二級(jí)質(zhì)譜信息較少。因此,本實(shí)驗(yàn)中參照文獻(xiàn)[18]中的離子對(duì),利用針泵進(jìn)樣,分別對(duì)DP和CE等進(jìn)行了優(yōu)化,優(yōu)化后的離子對(duì)及其相關(guān)參數(shù)如表1所示,同時(shí)根據(jù)所得的離子對(duì)信息對(duì)金剛烷胺和金剛乙胺的斷裂方式做了初步推斷(見(jiàn)圖2)。

表1 金剛烷胺和金剛乙胺的相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)

* Quantitative ion.

圖2 金剛烷胺和金剛乙胺可能的斷裂方式Fig.2 Possible fragmentation patterns of amantadine and rimantadine

金剛烷胺和金剛乙胺中都帶有一個(gè)氨基,呈現(xiàn)出一定的堿性,本研究中首先采用了常用的乙腈-水溶液作為色譜的流動(dòng)相,但結(jié)果表明,金剛烷胺和金剛乙胺在C18色譜柱上峰形較差,拖尾嚴(yán)重,基線噪聲較大,圖3a為乙腈-水溶液作為流動(dòng)相的色譜圖;當(dāng)在水相中加入了0.1%(v/v)的甲酸后,金剛烷胺和金剛乙胺在C18色譜柱上峰形較好、無(wú)拖尾現(xiàn)象,且基線噪聲明顯降低,圖3b為乙腈-0.1%(v/v)甲酸水溶液作為流動(dòng)相的色譜圖,推測(cè)甲酸的加入能夠在一定程度上中和氨基的堿性,從而提高其在C18柱上的保留行為;另一方面,在正離子模式下,乙酸銨的加入可抑制目標(biāo)化合物[M+Na]+峰的形成,從而促進(jìn)[M+H]+峰的形成,在進(jìn)行子離子碎片掃描時(shí)可以得到較強(qiáng)的碎片;同時(shí)乙酸銨的加入還能夠調(diào)節(jié)溶液的離子強(qiáng)度,使色譜峰形更對(duì)稱(chēng),也提高了化合物的響應(yīng)。因此,本研究在水相中加入了1 mmol/L的乙酸銨,金剛烷胺和金剛乙胺都達(dá)到了較好的響應(yīng)值。

圖3 金剛烷胺和金剛乙胺在不同流動(dòng)相中的色譜圖Fig.3 Chromatograms of amantadine and rimantadine in different mobile phases a. acetonitrile-water; b. acetonitrile-0.1%(v/v) formic acid.

實(shí)驗(yàn)中還比較了甲醇和乙腈作為流動(dòng)相的色譜峰形,結(jié)果表明,采用甲醇作為流動(dòng)相時(shí),對(duì)于金剛乙胺的影響不大,但是可以明顯地改善金剛烷胺的峰形,使其由原來(lái)的寬峰變?yōu)閷?duì)稱(chēng)的尖峰,如圖4所示。因此實(shí)驗(yàn)最終選擇了1.4節(jié)的流動(dòng)相條件。

圖4 金剛烷胺和金剛乙胺在甲醇和乙腈中的色譜圖Fig.4 Chromatograms of amantadine and rimantadine in methanol and acetonitrile a. amantadine in acetonitrile; b. rimantadine in acetonitrile; c. amantadine in methanol; d. rimantadine in methanol.

2.2 提取溶劑的選擇

本研究選擇雞蛋作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,首先比較了純乙腈、甲酸-乙腈(1∶99, v/v)、乙酸-乙腈(1∶99, v/v)和氨水-乙腈(1∶99, v/v)對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的提取效果,結(jié)果表明氨水-乙腈(1∶99, v/v)溶液對(duì)于兩種化合物的提取效果最好,平均提取率分別達(dá)到了103%和92%,比其他提取溶液的提取率高,原因可能為金剛烷胺和金剛乙胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)中都帶有氨基,呈現(xiàn)出一定的堿性,氨水-乙腈的堿性環(huán)境可抑制金剛烷胺和金剛乙胺的電離,使得目標(biāo)化合物在乙腈中的分配系數(shù)增加,從而提高了提取效率。

其次,比較了氨水-乙腈(0.5∶99.5, v/v)、氨水-乙腈(1∶99, v/v)、氨水-乙腈(2∶98, v/v)和氨水-乙腈(4∶96, v/v)對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的提取效果,如圖5所示,氨水-乙腈(2∶98, v/v)和氨水-乙腈(4∶96, v/v)溶液具有較好的提取效果,由于氨水的揮發(fā)性較大,且刺激性較強(qiáng),不利于實(shí)驗(yàn)操作者的身體健康,因此,選擇氨水-乙腈(2∶98, v/v)溶液作為提取溶液。

圖5 氨水與乙腈的體積比對(duì)金剛烷胺和金剛乙胺提取率的影響Fig.5 Effect of volume ratio of ammonium hydroxide and acetonitrile on extraction rate for amantadine and rimantadine

2.3 凈化填料的選擇

在本實(shí)驗(yàn)中,首先考察了將提取溶液濃縮后直接進(jìn)樣分析的效果,結(jié)果表明,金剛烷胺和金剛乙胺的平均回收率均大于130%,可能存在一定的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),同時(shí)經(jīng)濃縮后的提取溶液顏色較深,且含有少量的脂肪和蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì),不利于質(zhì)譜分析。因此,本實(shí)驗(yàn)中選擇在濃縮后的提取溶液中加入凈化填料,以期得到較好的凈化效果。

在農(nóng)獸藥殘留分析中,常用的凈化填料主要有C18、Florisil、NH2和PSA等,本研究中比較了上述4種填料對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的凈化效果。分別在1 mL的濃縮提取液中加入50 mg填料和150 mg無(wú)水MgSO4,結(jié)果表明,4種填料的加入都能夠使金剛烷胺和金剛乙胺的提取率保持在70%～110%之間,都能夠滿足凈化的要求;而通過(guò)提取率的比較可知,C18和NH2填料對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的凈化效果較好,提取率都在100%左右,可以對(duì)提取溶液中的雜質(zhì)等干擾物質(zhì)進(jìn)行有效的吸附,且對(duì)于目標(biāo)化合物的吸附較小;而Florisil和PSA填料相對(duì)于C18和NH2填料的提取率稍差,對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺具有一定程度的吸附,影響了提取效率。因此,選擇C18和NH2的混合填料作為本實(shí)驗(yàn)的凈化填料。

另一方面,本實(shí)驗(yàn)以C18和NH2作為混合凈化填料進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在1 mL濃縮提取液中加入150 mg無(wú)水MgSO4,并加入50 mg C18和NH2的混合填料,比較了C18和NH2的質(zhì)量比分別為1∶4、2∶3、1∶1、3∶2、4∶1時(shí)對(duì)于金剛烷胺和金剛乙胺的凈化效果,如圖6所示,對(duì)于金剛烷胺,當(dāng)C18和NH2的質(zhì)量比為1∶4、2∶3和1∶1時(shí),提取效果較好,而當(dāng)C18和NH2的質(zhì)量比為2∶3和3∶2時(shí),對(duì)于金剛乙胺的提取效果較好。因此,選擇C18和NH2的質(zhì)量比為2∶3,對(duì)于兩種化合物的提取效果都較好。

2.4 線性范圍和檢出限

將金剛烷胺和金剛乙胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成不同的濃度,以定量離子的峰面積對(duì)其各自的濃度進(jìn)行線性回歸;同時(shí)利用雞蛋空白基質(zhì)進(jìn)行檢出限和定量限的考察,以3倍和10倍信噪比來(lái)確定金剛烷胺和金剛乙胺的檢出限和定量限。如表2所示,金剛烷胺和金剛乙胺的相關(guān)系數(shù)(R2)較好,檢出限較低,能夠滿足獸藥殘留的測(cè)定要求。

圖6 C18與NH2的質(zhì)量比對(duì)金剛烷胺和金剛乙胺提取率的影響Fig.6 Effect of mass ratio of NH2 to C18 on the extraction rate for amantadine and rimantadine

表2 金剛烷胺和金剛乙胺的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)(R2)、檢出限和定量限

y: peak area of quantitative ion;x: mass concentration, μg/L.

2.5 回收率和精密度

分別采用雞蛋和雞肉的空白基質(zhì),根據(jù)金剛烷胺和金剛乙胺的定量限,分別以1倍、5倍、10倍定量限作為添加濃度進(jìn)行回收率試驗(yàn),每個(gè)試驗(yàn)對(duì)象做6次平行試驗(yàn),計(jì)算其平均回收率。通過(guò)表3可知,金剛烷胺和金剛乙胺的平均回收率范圍為89%～108%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為5.0%～8.6%,符合獸藥殘留測(cè)定的要求。

表3 金剛烷胺和金剛乙胺的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

3 結(jié)論

本文建立了分散固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺殘留的方法。以氨水-乙腈(2∶98, v/v)作為提取溶液,C18和NH2混合填料凈化,采用優(yōu)化后的MRM模式,外標(biāo)法定量,能夠快速完成雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺的定性和定量分析,具有較好的準(zhǔn)確度和精確度,適合雞蛋和雞肉中金剛烷胺和金剛乙胺的快速分析測(cè)定。

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2016第十屆中國(guó)科學(xué)儀器發(fā)展年會(huì)(ACCSI 2016)第一輪通知

“2016第十屆中國(guó)科學(xué)儀器發(fā)展年會(huì)(Annual Conference of China Scientific Instruments 2016,簡(jiǎn)稱(chēng)ACCSI 2016)”,將于2016年4月22日在北京隆重召開(kāi)。

第十屆ACCSI 2016將繼續(xù)秉承“科學(xué)儀器行業(yè)的達(dá)沃斯”論壇的高端定位,以研究和探討科學(xué)儀器行業(yè)以及相關(guān)產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀、追蹤發(fā)展趨勢(shì)、促進(jìn)行業(yè)交流為宗旨。

在“新一代信息技術(shù)與制造業(yè)深度融合”的大趨勢(shì)下,作為“立國(guó)之本、科技強(qiáng)國(guó)之基”的科學(xué)儀器行業(yè)有哪些新趨勢(shì)、新熱點(diǎn)、新應(yīng)用,是業(yè)界管理者共同關(guān)心的問(wèn)題。在國(guó)家十三五的開(kāi)局之年,會(huì)議將邀請(qǐng)業(yè)內(nèi)專(zhuān)家、行業(yè)領(lǐng)袖深度解讀過(guò)去10年科學(xué)儀器行業(yè)發(fā)展的經(jīng)驗(yàn),與科學(xué)儀器制造企業(yè)管理者、研發(fā)者一起,從運(yùn)營(yíng)、技術(shù)、和市場(chǎng)角度,共同探討科學(xué)儀器行業(yè)趨勢(shì)、新機(jī)遇以及如何抓住機(jī)遇。

主辦單位:

中國(guó)儀器儀表行業(yè)協(xié)會(huì)

中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)

中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)分析儀器分會(huì)

儀器信息網(wǎng)(www.instrument.com.cn)

協(xié)辦單位:

首都科技條件平臺(tái)

我要測(cè)網(wǎng)(www.woyaoce.cn)

年會(huì)網(wǎng)站:

http://accsi.instrument.com.cn

會(huì)務(wù)組聯(lián)系方式:

電話:4000074077 傳真:(010)82051730

會(huì)議贊助:(010)51654077-8044齊先生

報(bào)名參會(huì):(010)51654077-8055杜女士

E-mail:accsi@instrument.com.cn

儀器信息網(wǎng) 供稿

Determination of amantadine and rimantadine residues in egg and chicken samples by dispersive solid phase extraction purification-ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

LIN Tao1,2, FAN Jianlin1, LIU Xingyong1, CHEN Xinglian1, LI Yangang1, LIU Hongcheng1,2*

(1.InstituteofQualityStandards&TestingTechnique,YunnanAcademyofAgriculturalScience,Kunming650223,China; 2.LaboratoryofQuality&SafetyRiskAssessmentforAgro-Products(Kunming),MinistryofAgriculture,Kunming650223,China)

A method was developed for the determination of residual amantadine and rimantadine in eggs and chickens by dispersive solid phase extraction-ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Egg and chicken samples were extracted with ammonia water-acetonitrile (2∶98, v/v). The extraction solution was dried to 1 mL under nitrogen, and then purified by dispersive solid phase extraction method with C18 and NH2sorbents. After purification, the extraction solution was filtered through a filter. The target compounds were analyzed by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) on a ZORBAX C18 column using a mixture of 1 mmol/L ammonium acetate solution (containing 0.1% (v/v) formic acid) and methanol as mobile phases with gradient elution. The mass spectrometer was operated under multiple reaction monitoring (MRM) mode in positive mode. The good linearities were obtained for amantadine and rimantadine at a concentration range of 0.15-10.0 μg/L. The limits of detection for amantadine and rimantadine were all 0.05 μg/kg, and the limits of quantification were 0.20 μg/kg. The recoveries of amantadine and rimantadine in eggs and chickens at three spiked levels (0.2, 1.0 and 2.0 μg/kg) were in the range of 89%-108% with the relative standard deviations of 5.0%-8.6%. The results demonstrated that the method is suitable for the determination of amantadine and rimantadine in eggs and chickens.

dispersive solid phase extraction; ultra high performance liquid chromatography (UHPLC); tandem mass spectrometry (MS/MS); amantadine; rimantadine; eggs; chickens

10.3724/SP.J.1123.2015.08010

云南省社會(huì)發(fā)展科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013RA012);云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃青年項(xiàng)目(2013FD064);云南省科技創(chuàng)新平臺(tái)建設(shè)計(jì)劃項(xiàng)目(2014DA001).

2015-08-09

O658

:A

:1000-8713(2015)11-1169-06

*通訊聯(lián)系人.E-mail:liuorg@163.com.