陳立藝 李玉新 黃倍源 吳俊霖 曾星華 盧慧玲陳 健

（桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541000）

·研究報告·

參附注射液對小鼠抗缺氧抗疲勞作用的實驗研究*

陳立藝 李玉新 黃倍源 吳俊霖 曾星華 盧慧玲△陳 健

（桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541000）

目的研究參附注射液抗缺氧抗疲勞的作用機制。方法選用單一雄性健康昆明種小鼠60只，體質(zhì)量（22±2）g，隨機分成6組，每組10只，分別注射等量的高劑量參附注射液0.2 mg/kg、低劑量參附注射液（原液稀釋一半）0.2 mg/kg以及0.9%氯化鈉注射液0.2 mg/kg。1周后，測量缺氧狀態(tài)下以及疲勞狀態(tài)下小鼠生存的時間，同時取肝組織測定組織中的MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量。結(jié)果耐缺氧和負重游泳狀態(tài)下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05）；負重游泳狀態(tài)下，SOD含量高劑量組比生理鹽水組顯著增高（P＜0.01）。結(jié)論參附注射液具有抗缺氧抗疲勞的作用。

參附注射液 抗缺氧 抗疲勞

參附注射液含人參皂苷、烏頭生物堿等生物活性成分，應(yīng)用于冠心病及心力衰竭治療以及心血管疾病。人參在參附注射液中起重要的作用［1］，常用于肢冷脈微、體虛欲脫、崩漏下血和氣不攝血，以及心力衰竭和心源性休克等，為扶正補虛第一要藥。附子屬于溫里藥，用于胃寒、肢冷、脈微欲絕之虛脫，有“回陽救逆第一品藥”之稱，配伍紅參有較強的回陽救逆、益氣固脫之功效，主要用于陽氣暴脫的厥脫證［2］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明參附注射液藥效強，能顯著對抗丙二醛（MDA）活性的增高以及超氧化物歧化酶（SOD）的降低［3］。在近年小鼠抗缺氧抗疲勞試驗研究中，發(fā)現(xiàn)紅景天納米粉比普通粉在使用量和作用強度上具有明顯優(yōu)勢［4］，西藏人參果能顯著提高小鼠抗疲勞抗缺氧能力［5］。本研究深入探討參附注射液與小鼠抗缺氧抗疲勞之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級單一雄性昆明種小鼠60只（來自桂林醫(yī)學(xué)院動物中心），體質(zhì)量（22±2）g，每天12 h日光、12 h黑暗，控制室溫在23～26℃，相對濕度49%～51%，自由飲水，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑 參附注射液（規(guī)格10 mL/支，批號Z20043117，雅安三九藥業(yè)有限公司），超氧化物歧化酶 （SOD）試劑盒 （艾美捷科技有限公司）和丙二醛（MDA）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）。

1.3 分組與給藥 選用單一雄性昆明種小鼠60只，游泳負重實驗和常壓耐缺氧實驗各設(shè)生理鹽水組、參附低劑量組、參附高劑量組，共6組，每組10只。參附低劑量組腹腔注射稀釋1倍的參附注射液原液0.2 mg/kg、參附高劑量組腹腔注射參附注射液原液0.2 mg/kg，生理鹽水組每天腹腔注射0.9%氯化鈉注射液0.2 mg/kg，每日1次，連續(xù)7 d，基礎(chǔ)飼料自由攝食，2 d換水1次。

1.4 游泳負重試驗 每組小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次給藥1 h后將小鼠放入游泳箱內(nèi)做力竭游泳試驗。小鼠尾部負重為體質(zhì)量5%的鐵絲，放入自制玻璃游泳缸游泳，水深約為35 cm，水溫25℃，計取游泳開始到小鼠游泳疲勞而沉入水中8 s不能浮起為止的時間為游泳時間。處死后并立即取出肝臟，制作肝臟勻漿，離心機分離取上清備用。

1.5 常壓耐缺氧試驗 每組小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次給藥1 h后將小鼠放進250 mL的密封性好的磨口玻璃瓶內(nèi)，將用紗布包好的15 g鈉石灰裝入瓶內(nèi)，將小鼠放入瓶內(nèi)后立即用凡士林密封蓋緊，當(dāng)小鼠開始出現(xiàn)全身性痙攣癥狀時，立即開啟瓶蓋，將動物取出。記錄從密封至小鼠發(fā)生全身性痙攣的時間為耐缺氧時間。處死后并立即取出肝臟，制作肝臟勻漿，離心機分離取上清備用。

1.6 標(biāo)本檢測 1）MDA檢測方法。依照MDA試劑盒，取小鼠肝臟勻漿上清夜2 mL（對照組取2 mL蒸餾水），再加2 mL 0.6%TBA（2-硫代巴比妥酸）混勻，在試管上加棉塞，置沸水中加熱15 min，迅速拿出水浴鍋冷卻，以4000 r/min離心15 min，于波長450 nm下測定OD值，并計算MDA值。2）SOD檢測方法。依照SOD試劑盒，取1.5 mL緩沖液，在25℃水浴中保溫15 min，加入3 mL小鼠肝臟勻漿上清夜，加入10 μL連苯三酚液，迅速搖勻（對照組取2 mL蒸餾水），計算加酶后連苯三酚自氧化速率，并計算SOD值。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠抗缺氧作用時間、SOD、MDA水平比較見表1。結(jié)果示耐缺氧狀態(tài)下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05）。SOD和MDA測定未見統(tǒng)計學(xué)差異。

表1 各組小鼠常壓耐缺氧實驗結(jié)果比較（±s）

表1 各組小鼠常壓耐缺氧實驗結(jié)果比較（±s）

與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n M D A含量（n m o l / m L）耐缺氧時間（s）S O D含量（U / m g）生理鹽水組 1 0 6 . 2 9 ± 2 . 4 3參附低劑量組1 0 5 . 6 3 ± 1 . 1 3 9 8 6 . 7 5 ± 1 1 3 . 5 5 2 5 7 . 5 0 ± 1 2 . 2 4 1 0 9 5 . 2 5 ± 9 4 . 3 2 2 6 2 . 2 0 ± 5 . 4 7參附高劑量組1 0 4 . 9 6 ± 0 . 7 2 1 1 7 6 . 6 2 ± 1 4 3 . 5 6△2 6 6 . 6 3 ± 7 . 0 7

2.2 各組小鼠抗疲勞作用的時間、SOD、MDA水平比較 見表2。負重游泳狀態(tài)下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05），低劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05），測定SOD含量低濃度組比生理鹽水組高（P＜0.05），高劑量組比生理鹽水組顯著增高（P＜0.01）。MDA測定未見統(tǒng)計學(xué)差異。

表2 各組小鼠游泳負重結(jié)果比較（±s）

表2 各組小鼠游泳負重結(jié)果比較（±s）

組別 n M D A含量（n m o l / m L）抗疲勞時間（s）S O D含量（U / m g）生理鹽水組 1 0 5 . 7 8 ± 1 . 6 1參附低劑量組1 0 5 . 4 4 ± 0 . 7 7 4 3 3 . 1 3 ± 1 6 8 . 1 5 2 1 4 . 5 0 ± 1 2 . 0 6 5 1 8 . 3 8 ± 2 5 5 . 4 0△2 5 5 . 4 2 ± 3 8 . 2 9△參附高劑量組1 0 5 . 1 2 ± 0 . 6 0 6 4 5 . 0 0 ± 1 8 1 . 9 1△2 4 7 . 0 8 ± 2 5 . 7 3△△

3 討 論

抗缺氧、抗疲勞的存活時間是機體生理活力的綜合反映，可以表征機體組織、臟器的健康狀況和疲勞程度。由表1及表2時間部分可以看出，參附注射液可有效提高小鼠的抗缺氧抗疲勞能力。參附注射液能改善小鼠體內(nèi)血流動力學(xué)，穩(wěn)定血壓，增加心肌收縮力，擴張冠脈［6-7］，有效保護大腦、心臟、肝、肺等重要器官，具有較好的抗缺氧、抗疲勞的作用。之前的臨床實驗表明參附注射液能夠調(diào)節(jié)血壓，維持血壓正常水平［8-9］，參附注射液促進機體產(chǎn)生冠脈舒血管活性物質(zhì)，增加冠脈血流量，減少冠脈阻力。參附注射液組成中烏頭堿在保護心肌細胞、心率、心律、血壓等方面有積極的作用［10］，其代謝中間產(chǎn)物去烏頭堿能增強心肌收縮力、改善心肌循環(huán)及緩解急性心肌缺血損傷，其顯著功能在于變力性和變時性，同時降低主動脈壓［11-12］。參附注射液抗缺氧疲勞的能力可能與上述因素有關(guān)，也可能與應(yīng)急狀態(tài)下機體產(chǎn)生SOD，增加抗氧化作用減輕自由基損傷的機制有關(guān)。

小鼠注射參附注射液后，測量肝組織中SOD含量，表明參附注射液能提高機體SOD含量，清除體內(nèi)氧自由基，尤其是重要器官，如大腦、心臟、肝等的自由基，有效保護臟器。小鼠在抗缺氧和抗疲勞環(huán)境下，劇烈運動，乳酸堆積，肌肉pH值下降，氧自由基增多，損害機體組織，從而產(chǎn)生疲勞。參附注射液介導(dǎo)的SOD水平提高有助于減少缺血再灌注后產(chǎn)生的氧自由基，減輕腎臟缺血再灌注引起的氧化應(yīng)激，減輕器官的損傷。參附注射液可以顯著提高SOD的活性，使得體內(nèi)氧自由基減少，減少了氧自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化損傷［13］。

MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的穩(wěn)定代謝物，測定MDA含量可反映腎組織中自由基的含量及其引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，間接反映細胞受自由基氧化損傷的程度。有資料表明SFI可減輕缺血再灌注對腎臟組織的脂質(zhì)過氧化損傷［14］，降低MDA水平［15］。黃瓊等［16］發(fā)現(xiàn)SFI處理可提高心肌組織ATP含量和SOD活性，減少MDA生成，保護缺血再灌注后的大鼠心臟。本次實驗小鼠耐缺氧抗疲勞實驗數(shù)據(jù)未獲得統(tǒng)計學(xué)差異，可能和實驗動物數(shù)量不足有關(guān)。

參附注射液作為一種中藥制劑，具有臨床應(yīng)用劑量安全范圍寬、毒副作用小的優(yōu)良特性，具有廣闊的應(yīng)用前景。參附注射液含人參皂苷、烏頭生物堿等生物活性成分，能夠增強體力、防止衰老和增加活力，具有較好的抗缺氧、抗疲勞作用，其藥理特性被廣泛應(yīng)用于臨床治療，尤其是心臟病的治療，有效提高患者預(yù)后質(zhì)量。

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Experimental Study on Anti-hypoxic and Anti-fatigue Effect of Shenfu Injection on Mice

CHEN liyi，LI Yuxin，HUANG Beiyuan，et al. Guilin Medical University，Guangxi，Guilin 541004，China

Objective：To study the anti-hypoxic and anti-fatigue effect of Shenfu injection.Methods：60 single healthy male Kunming mice，weighing（22±2）g，were chosen，randomly divided into 6 groups，10 in each group，respectively injected with the same amount of the reagent.The high concentration of the group was attached to the injection of 0.2 mg/kg，while the low concentration（the half of concentrate）was 0.2 mg/kg and normal saline 0.2 mg/kg.A week later，the survival time of mice was measured under the state of hypoxia and fatigue.At the same time，the content of MDA（malondialdehyde）and SOD（superoxide dismutase）in liver tissues were measured，too.Results：The survival time of mice injected with high concentration of shenfu injection was longer than that of mice injected with physiological saline under the condition of anti-hypoxia and loaded-swimming（P＜0.05）.Content of SOD in high concentration of shenfu injection was significantly more than that of physiological saline group（P＜0.01）.Conclusion：Shenfu injection has an anti-hypoxic and anti-fatigue effect.

Shenfu injection；Anti-hypoxic；Anti-fatigue

R285.5

A

1004-745X（2015）06-0960-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.008

2015-02-18）

廣西教育科學(xué)“十二五”規(guī)劃課題（2013C047）

△通信作者（電子郵箱：626382529@qq.com）