文/張志剛

吉林省舒蘭市林業(yè)局 吉林舒蘭 132600

苦參,為豆科槐屬植物，別名苦甘草，苦參草、苦豆根、野槐根等，生于冊坡草地，平原，路旁、沙質(zhì)地和紅壤地的向陽處。在我國主要分布于西北部沙漠地區(qū)。

苦參是常用中藥。從苦參中已鑒定出20種脂肪酸成分，主要為不飽和脂肪酸，其含量占脂肪酸總量的72.79%，其中亞油酸相對含量為48.95%，苦參揮發(fā)油已鑒定出47個成分，由此產(chǎn)生多種藥理作用。

（1）抗寄生作用；（2）抗菌作用；（3）抗病菌作用；（4）抗心律失常作用；（5）抗腫瘤作用；（6）調(diào)節(jié)免疫作用；（7）抗過敏和平喘作用；（8）抗肝損傷作用；（9）對實驗性胃粘膜損傷的保護作用；（10）利尿、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛解熱作用。

苦參是耐旱耐堿野生植物。人工栽培苦參只要地理、氣候、土壤等條件合適，注重田間管理和防止病蟲害，適當施肥即可獲得較好的收成；采用無性繁殖法比有性繁殖法見效快、收益好、而且無性繁殖栽培比有性繁殖栽培更易于操作和管理?？鄥⒌漠a(chǎn)量的有效成分含量，一年生的不如二年生的，二年生的不如三年生的，從經(jīng)濟效益上看，采用二年生的比較合適，成本低，效益快。

采集的野生苦參種子中選擇發(fā)育成熟、顆粒大而飽滿的果實為種子，并經(jīng)鹽水選種。播種前進行催芽處理，即將種子和細粒河沙按1：5混合，用水浸潤，保持潮濕一個月左右，至苦參種子萌芽。根據(jù)苦參的生物學(xué)特性，選擇在秋末冬初涼爽時節(jié)播種。先將土地深翻，除去雜草，耙細平整，掏成15米左右寬的廂塊，再打坑（坑距30-40cm），將底肥施于坑中。每667平方米施農(nóng)家肥1500kg，復(fù)合肥20kg，普鈣50kg。

采用當?shù)夭赏诘孽r活苦參根作種，擇選新鮮、肥厚的中、上部根塊，截成15cm左右長的小段，并將其下端削成馬耳形備用，先深翻土地,除雜草,耙細平整泥土,然后打坑施底肥,坑距30-40cm，行距50cm，坑深20-30cm，底肥施于坑中，用肥量為農(nóng)家肥和土比灰混合肥約2500kg。將選擇好的種根植于施好底肥的坑中，每坑植1-2段，削成馬耳形的一端朝下，覆蓋8-10cm厚的細泥土。

中耕除草每年2-3次，第一次除草在播種后次年六月進行，除草后每667平方米追復(fù)合肥50kg，清糞水50擔(dān)。有性繁殖植株密集的可進行勻苗，每窩保留3-5株即可。第二次在十二月份進行，第三次在播種后的第三年三月份進行，疏松表土，鏟除雜草，每667平方米追施復(fù)合肥30-50kg和農(nóng)家肥（清糞水）30-50擔(dān)。第四次于第三年六月份進行。

組織培養(yǎng)技術(shù)育苗是苦參種植的關(guān)鍵一環(huán)，組織培養(yǎng)技術(shù)是在無菌條件下，將植物器官組織細胞，接種到人工配制的培養(yǎng)基上。此技術(shù)已廣泛應(yīng)用到農(nóng)業(yè)、林業(yè)、植物保護、生物工程、基因工程及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等諸多方面，并發(fā)揮越來越重要的作用。

利用組織培養(yǎng)技術(shù)為苦參育苗同播種相比有以下幾點優(yōu)點：(1)優(yōu)良性狀保持穩(wěn)定，研究材料單一。培養(yǎng)中可獲得各種水平的無性系，如細胞、組織塊、器官或小植株。這些材料均來自單一的各體，遺傳性狀非常一致，可保證親代各種優(yōu)良性狀得以很好的保存和不變化。(2)經(jīng)濟方便、效率高，實驗微型化、精密化，節(jié)約人力物力，方便管理，比田間生產(chǎn)、盆栽、水培、沙培都精細得多。而且避免了其它生物天敵。(3)條件可控誤差小，培養(yǎng)基中各種成份，環(huán)境條件的溫度、光質(zhì)、光周期、變溫處理等，安全可控。(4)生長快、周期短，重復(fù)性強。五、不受季節(jié)、外界環(huán)境等因素限制，可全年連續(xù)實驗生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

將苦參種子放入一個小燒杯中，用自來水沖洗干凈，必要時加一些洗滌劑，再用蒸餾水沖洗，洗后待用。

1.2 培養(yǎng)基制備

本次實驗所采用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。其營養(yǎng)元素種類全面，含量適中，應(yīng)用歷史較長，能為植物組織培養(yǎng)的生長提供可靠的保證。加入瓊脂、蔗糖，調(diào)節(jié)PH值。

貯備液的制備與保存：在配制培養(yǎng)基之前，為簡便起見，將配方中藥品一次稱量供一段時間使用，即配一些濃溶液，作為貯備液。注意制鐵鹽溶液時，要分別溶解硫酸亞鐵和鈉EDTA二水在各自的450毫升蒸餾水中，適當加熱并不斷攪拌，然后兩種溶液混合在一起，調(diào)PH值到5.5，最后再加蒸餾水定容到1000毫升。在配置各種毒母液后，還要配置各種植物激素母液，方法與上述方法相似，實驗用到的植物激素主要是6BA和IBA。6BA用HCI溶，IBA用酒精溶，溶解后再用蒸餾水溶解，制成母液，放入冰箱待用。

培養(yǎng)基配制：先用潔凈的銹鋼鍋里放入約880ml蒸餾水，加入9克瓊脂，在電爐子上加熱，在加熱的同時不斷用玻璃棒進行攪拌，防止在鍋底燒焦或沸騰滲出。有時也可以對一半的鍋底進行加熱，以防起瀑沸。按照大量元素、微量元素、鐵鹽、有機、肌醉的順序分別取各種母液進行混合（其中大量元素10倍取100毫升，微量元素200倍取5毫升，鐵鹽200倍母液取5毫升、有機100倍母液取10毫升，肌醉用100倍母液取10毫升），五種母液混合后，用天平稱30克庶糖放入混合物中充分攪拌，使之均勻，然后按不同激素配方加入植物激素，并用氫氧化鈉溶液來調(diào)PH值到5.8，趁熱將液態(tài)培養(yǎng)基分別裝入小三角瓶中，并用錫紙封好。

培養(yǎng)基滅菌：向手提式滅菌鍋里加一定的水，把封好的小三角瓶放入滅菌鍋中進行滅菌。要使鍋內(nèi)的氣壓達到0.05大氣壓，然后斷電源，打開放氣閥排出鍋底的空氣，直到氣壓表指針為零，關(guān)閉排氣閥，接通電源繼續(xù)加熱，當鍋內(nèi)氣壓達到0.1大氣壓時，人為控制電源，使鍋內(nèi)保持這一狀態(tài)15分鐘。斷開電源后，待指針為零時打開鍋，取出三角瓶，放入無菌室內(nèi)冷卻待用。

接種：把消毒的種子帶入操作室，用0.1%升汞溶液消毒9分鐘，然后用無菌水清洗4次，瀝去水分，放在濾紙上吸去多余水分，同時對操作臺及所用工具消毒，點酒精燈，用70%酒精棉擦凈操作工具。用鑷子夾起種子，接到各種培養(yǎng)基上。

培養(yǎng)條件:接種完外植體后把小三角瓶放在培養(yǎng)室內(nèi),光照強度2000-3000LX,溫度26攝氏度.每隔3日觀察一次并做記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 無菌苗的獲得

苦參種子接種后，種子的萌發(fā)效果因植物激素種類和濃度不同而存在明顯差異，培養(yǎng)30d的調(diào)查結(jié)果見表3。將苦參種子接種在表2中所提到的1-4號培養(yǎng)基上，4周后生長1-2cm，觀察表明（2）培養(yǎng)基中萌發(fā)最早，種子發(fā)芽率也最高，到后期萌發(fā)幾乎達到目的100%；（1）培養(yǎng)基發(fā)芽率最低，可能是由于播種品質(zhì)較差的緣故；（3）和（4）培養(yǎng)基中的苦參發(fā)芽率也很低，而且莖節(jié)間極度濃縮，已形成的芽不能萌發(fā)成長，這可能是細胞分裂素（6BA）濃度過高的緣故：在6BA濃度相同而IBA濃度不同的條件下，（3）培養(yǎng)基中的發(fā)芽比（4）中的小，說明了在苦參萌發(fā)過程中可能與IBA濃度有關(guān)。

2.2 激素與增殖

2.2.1 芽的誘導(dǎo)

表1 MS培養(yǎng)基的貯備液

表2 增殖培養(yǎng)基激素各類與濃度（基本培養(yǎng)基為MS） 單位：mg/1

表3 無菌苗培養(yǎng)在不同的培養(yǎng)基下苦參的發(fā)芽率

表4 不定芽及側(cè)芽的發(fā)生情況

表5 繼代培養(yǎng)的側(cè)芽生長情況

無菌苗轉(zhuǎn)接到5-8號（表2）培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，不定芽及其側(cè)芽的發(fā)生率因培養(yǎng)基中激素種類和濃度不同而存在明顯差異，見表4（培養(yǎng)10d的調(diào)查結(jié)果）。將初步培養(yǎng)得到的無菌苗，轉(zhuǎn)入增殖的培養(yǎng)基（5），分化出的側(cè)芽多而健壯；而（6）、（7）和（8）號培養(yǎng)基中的側(cè)芽不但數(shù)量少，而且莖節(jié)短，特別是（8）號培養(yǎng)基中的側(cè)芽幾乎不能生長，這可能是因為它們的6BA濃度過高的緣故；（5）號和（7）號培養(yǎng)基中無菌苗形成的愈傷組織較緊密，多處出現(xiàn)半球形突起，而（6）號和（8）號的愈傷組織多，細胞團松散且表面少有粒狀突起，可能是IBA濃度過高所導(dǎo)致細胞快速增殖的緣故。

2.2.2 繼帶代培養(yǎng)

將帶芽莖段（1-2cm），接種在表2的(5)號培養(yǎng)基中,進行繼代培養(yǎng)。繼代效果見表5。繼代周期為3-4周，增殖率為10。

3 小結(jié)

3.1 激素與種子萌發(fā)

本次實驗選用苦參種子做外植體，在MS培養(yǎng)基中加入不同濃度的吲哚丁酸（IBA）和6芐基氨基腺嘌呤（6BA）配制成4種培養(yǎng)基，篩選出了適合苦參萌發(fā)的初代培養(yǎng)基為MS+6BA0.5mg/l+IBA0.2mg/l,生長素濃度過低時，種子萌發(fā)率低，細胞分裂素過高時，芽莖節(jié)縮短，甚至停止生長。

3.2 激素與增殖

將1-2cm的帶芽莖段，接種在加入4種不同濃度的吲哚丁酸（IBA）和6芐基氨基腺嘌呤（6BA）的MS培養(yǎng)基中，根據(jù)增殖效果篩選出適宜苦參增殖的培養(yǎng)基為MS+6BA1.5mg/l+LIBA0.1mg/l。繼代周期為3-4周，增殖率為10。當IBA濃度過高時，愈傷組織分化得多，細胞團松散且表面突起少，分化出的不定芽也少。

[1]呂振華，苦參的藥用價值及其在中草農(nóng)藥中的應(yīng)用. 科技情報廳發(fā)展經(jīng)濟，2002，(3)

[2]李俊明，植物組織培養(yǎng)教程。北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1992，25-47