王婧杰， 陳玉霞， 穆立薔*

（1.東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.哈爾濱市園林科學(xué)研究所，黑龍江 哈爾濱150040）

紫椴（Tilia amurensis Rupr.）是我國東北地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)樹種，是優(yōu)質(zhì)的蜜源和木材[1]?！吨腥A本草》記載，紫椴花具有清熱解表的藥效[2]。椴樹屬植物是傳統(tǒng)的藥用植物，可以作為鎮(zhèn)靜劑、利尿劑、祛痰劑和發(fā)汗劑[3-4]。紫椴花中含有較多的多糖、黃酮類化合物、酚類、香豆素等多種天然活性物質(zhì)[5]。紫椴花乙醇提取物具有較好的抗急性炎癥及鎮(zhèn)痛作用[6]，紫椴樹皮提取物中的黃烷和脂肪酸能夠抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的活性[7]。紫椴花中多糖含量豐富，盛花期可達(dá)到約163.21 mg/g[8-9]，是一種理想的植物多糖原料。國內(nèi)外學(xué)者采用熱水浸提[10]、微波輔助[11]、超聲波輔助[12]、酶法輔助[13]等諸多方法提取植物中的多糖并對(duì)多種植物多糖進(jìn)行了抗氧化活性評(píng)價(jià)。目前尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)紫椴花多糖生物活性進(jìn)行研究的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。作者采用響應(yīng)面法優(yōu)化了紫椴花多糖的微波提取工藝，并對(duì)其體外抗氧化活性進(jìn)行了研究，旨在為紫椴資源的合理開發(fā)和深度利用提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

紫椴花，采于東北林業(yè)大學(xué)校園，經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)穆立薔教授鑒定為紫椴花，自然風(fēng)干，粉碎后過60目篩；市售鮮雞蛋；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），美國Sigma公司產(chǎn)品；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

756PC紫外可見分光光度計(jì)，北京通用儀器有限公司制造；WD800LG微波爐，天津樂津電子有限公司制造；NKTHZ-A空氣恒溫?fù)u床，常州諾基儀器有限公司制造；TDL-40B-W臺(tái)式低速大容量離心機(jī)，湖南星科科學(xué)儀器有限公司制造；FW-100型高速萬能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司制造；TGL-16G高速離心機(jī)，北京佳源興業(yè)科技有限公司制造；TDA-8002型恒溫水浴鍋，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司制造；ALC-110型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司制造；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠制造；LGJ-10臺(tái)式冷凍干燥機(jī)，北京松源華興科技發(fā)展有限公司制造；Magna-IR560型傅里葉變換紅外光譜儀，美國尼高力（Nicolet）公司制造。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 紫椴花多糖提取工藝流程 紫椴花干粉→石油醚脫脂→微波提取→離心→提取液濃縮→Sevage法除蛋白質(zhì)→體積分?jǐn)?shù)95%乙醇沉淀→洗滌沉淀→冷凍干燥→紫椴花粗多糖。

1.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 采用苯酚-硫酸比色法[14]，得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：

式（1）中，y為反應(yīng)液在490 nm處的吸光值；x為反應(yīng)液中的葡萄糖質(zhì)量濃度，μg/mL。

1.2.3 提取液中多糖得率計(jì)算方法 多糖提取液定容至100 mL，再吸取1.0 mL定容至25 mL。取定容液2.0 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟操作測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算多糖得率。

1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 考察微波時(shí)間（min）、微波功率（W）和料液比（g/mL）3個(gè)因素對(duì)紫椴花多糖得率的影響，每個(gè)處理實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 響應(yīng)面法優(yōu)化紫椴花多糖提取工藝 在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上利用Minitab16.0軟件，以紫椴花多糖得率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)微波時(shí)間、微波功率和料液比三因素三水平Box-Benhnken中心組合實(shí)驗(yàn)，建立二次回歸方程模型，優(yōu)化微波提取紫椴花多糖工藝參數(shù)，并進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平見表1。

表1 Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表Table 1 Factors and levels of Box-Benhnken experiment design

1.2.6 紫椴花粗多糖定性分析及紅外光譜分析

觀察紫椴花粗多糖的顏色、狀態(tài)及其在水、甲醇、無水乙醇、丙酮等試劑中的溶解性。配制1 mg/mL紫椴花粗多糖溶液，分別通過硫酸-咔唑反應(yīng)、碘化反應(yīng)、斐林試劑和班氏試劑反應(yīng)、考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)和三氯化鐵反應(yīng)，檢測紫椴花粗多糖中是否含有糖醛酸、淀粉、還原糖、蛋白質(zhì)和酚類化合物。精確稱取紫椴花粗多糖粉末2 mg，在遠(yuǎn)紅外燈照射下與干燥的KBr研磨混合壓片后，以KBr為本底，用紅外光譜儀在4 000～400 cm-1紅外波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。

1.2.7 紫椴花粗多糖體外抗氧化活性研究

1）紫椴花粗多糖清除DPPH自由基能力的測定：參照文獻(xiàn)[15]方法，以VC作陽性對(duì)照。抗氧化劑清除DPPH自由基的能力（E0）由式（2）計(jì)算：

式（2）中，A0為2 mL DPPH甲醇溶液+2 mL溶劑的吸光度值；A1為2 mL甲醇+2 mL多糖溶液的吸光度值；A2為2 mL DPPH甲醇溶液+2 mL多糖溶液的吸光度值。

2）紫椴花粗多糖總還原能力的測定：參照文獻(xiàn)[16]的方法，略做修改，以VC作陽性對(duì)照。

3）紫椴花粗多糖清除羥自由基能力的測定：參照文獻(xiàn)[17]的測定方法，略做調(diào)整，以VC作陽性對(duì)照。羥自由基清除率（E1）計(jì)算公式如下式（3）：

式 （3）中，A為不同多糖質(zhì)量濃度下的吸光度；Aj為用水代替水楊酸時(shí)測得某質(zhì)量濃度多糖的本底吸光度；A0為用水代替抗氧化劑時(shí)測得的空白對(duì)照吸光度。

4）紫椴花粗多糖抗脂質(zhì)過氧化能力的測定：參照文獻(xiàn)[18]的方法，略做修改，以VC作陽性對(duì)照。抑制率（E2）計(jì)算公式為

式（4）中，A0為空白對(duì)照組吸光度值，A為不同質(zhì)量濃度抗氧化劑作用體系的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

2.1.1 微波時(shí)間對(duì)多糖得率的影響 由圖1（a）可知，紫椴花多糖得率隨著微波作用時(shí)間的延長而提高，微波作用時(shí)間達(dá)到8 min時(shí)，紫椴花多糖得率達(dá)到最大，而后有下降的趨勢。出現(xiàn)這種趨勢的原因可能是較短時(shí)間內(nèi)，微波對(duì)植物細(xì)胞壁及細(xì)胞膜的破壞作用大，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)大量溶出，多糖得率顯著提高；另一方面，隨著細(xì)胞破碎程度越來越大，細(xì)胞中其他雜質(zhì)的溶出也增加，多糖得率反而下降[19]。因此，8 min為較優(yōu)的微波作用時(shí)間，選擇6 min、8 min、10 min作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平。

2.1.2 微波功率對(duì)多糖得率的影響 由圖1（b）可知，紫椴花多糖得率隨著微波功率的提高呈現(xiàn)先升高而后略有下降的趨勢，微波功率為480 W時(shí)，多糖得率最大。出現(xiàn)這種趨勢的原因可能是在一定范圍內(nèi)，微波功率升高時(shí)，物料吸收的微波熱能隨之增加，有效促進(jìn)植物細(xì)胞的破碎，溶出物質(zhì)增加；當(dāng)微波功率達(dá)到一定水平后，會(huì)引起多糖降解，多糖得率稍有下降[20]。因此，480 W為較優(yōu)的微波輸出功率，選擇320 W、480 W、640 W作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平。

2.1.3 料液比對(duì)多糖得率的影響 由圖1（c）可知，紫椴花多糖得率隨著料液比的增加呈現(xiàn)先升高而后下降的趨勢，料液比為 1∶60（g/mL）時(shí)，多糖得率達(dá)到最大值。出現(xiàn)這種趨勢的原因可能是在一定范圍內(nèi)，水量的增加使得原料與水邊界層濃度差增大，有利于多糖的溶出和擴(kuò)散，傳質(zhì)速率提高；隨著水量進(jìn)一步增加，溫度上升趨于緩慢，能耗效率下降，同時(shí)雜質(zhì)溶出增加，相當(dāng)于多糖被稀釋，得率反而降低[21]。 因此，1∶60（g/mL）為較優(yōu)的料液比，選擇1∶50、1∶60、1∶70（g/mL）作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的 3 個(gè)水平。

圖1 微波時(shí)間、微波功率和料液比對(duì)多糖得率的影響Fig.1 Effect of microwave time，microwave power and ratio of raw material to liquid on the extraction rate of polysaccharides

2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

2.2.1 工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果 Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果見表2。

2.2.2 數(shù)學(xué)二次回歸模型的建立及方差分析 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多元擬合分析，得到的二次多項(xiàng)回歸方程模型為

式（5）中，Y代表多糖得率，A、B、C分別代表微波時(shí)間、微波功率和料液比。

對(duì)上述模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3?；貧w方程F檢驗(yàn)P＜0.01，差異極顯著；失擬檢驗(yàn)P=0.310＞0.05，不顯著；相關(guān)系數(shù)R2=98.13%。綜上所述，響應(yīng)值的變化有98.13%來源于所選變量，模型對(duì)實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況擬合較好，可用來預(yù)測不同提取條件下的紫椴花多糖理論得率。

表2 Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果Table 2 Program and resultofBox-Benhnken experiment design

表3 Box-Benhnken設(shè)計(jì)二次模型方差分析Table 3 Variance analysis of the regression quadmtic model of Box-Benhnken design

回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)見表4?？芍?，對(duì)多糖得率的影響達(dá)到極顯著水平的項(xiàng)為A、B、A2和B2；達(dá)到顯著水平的項(xiàng)為C、AC和C2。其中微波功率對(duì)多糖得率影響最大，微波時(shí)間次之。圖2為根據(jù)回歸方程模型做出的3個(gè)因素之間交互作用的三維曲面圖。自變量的改變對(duì)響應(yīng)值的影響可以通過三維曲面圖直觀地反映出來。

2.2.3 提取工藝的優(yōu)化結(jié)果與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)二次回歸方程，將得率Y設(shè)定為最大值，計(jì)算相應(yīng)的變量值，得到提取工藝的優(yōu)化結(jié)果：微波時(shí)間9.14 min，微波功率 585 W，料液比 1∶67（g/mL），多糖得率模型理論預(yù)測值為12.57%。由于實(shí)驗(yàn)所用微波爐功率設(shè)定的局限性，選擇微波時(shí)間9 min，微波功率 640 W，料液比 1∶67（g/mL）的工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，在此條件下實(shí)際多糖得率為12.05%，模型理論預(yù)測值為12.11%，實(shí)際值與理論值接近，說明可以通過該模型對(duì)實(shí)際操作條件下的理論多糖得率進(jìn)行相對(duì)準(zhǔn)確的預(yù)測。

表4 二次模型回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)Table 4 Coefficient estimates of regression quadratic model

圖2 微波時(shí)間、微波功率和料液比交互作用影響的三維曲面圖Fig.2 Response surface plot of mutual-influence for microwave time，microwave power and solidliquid ratio on yield

2.3 紫椴花多糖的定性分析及紅外光譜分析結(jié)果

2.3.1 物化性質(zhì)分析結(jié)果 紫椴花粗多糖為淡黃色纖維狀固體，溶于水和甲醇，不溶于無水乙醇和丙酮。碘化反應(yīng)、斐林試劑反應(yīng)、班氏試劑反應(yīng)及三氯化鐵反應(yīng)呈陰性，說明紫椴花粗多糖中不含淀粉、還原糖及酚類化合物；硫酸-咔唑反應(yīng)和考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)呈陽性，說明紫椴花粗多糖中含有糖醛酸和蛋白質(zhì)。

2.3.2 紅外光譜分析結(jié)果 由圖3可見，3 418 cm-1處的吸收峰是很強(qiáng)的O—H鍵的伸縮振動(dòng)吸收峰；2 926 cm-1處的吸收峰是 CH3、CH2和 CH的 C—H鍵的伸縮振動(dòng)吸收峰；1 727 cm-1處的吸收峰為羰基吸收峰，說明含有糖醛酸[22]；1 419 cm-1和1 378 cm-1處的多重吸收峰是C—H的伸縮和變角振動(dòng)吸收峰[23]；1 323 cm-1處是C—H彎曲振動(dòng)吸收峰；1 043 cm-1處的則是醇羥基—OH的變角振動(dòng)吸收峰；1 150 cm-1處的吸收峰是環(huán)上碳—氧（C—O）吸收峰；909 cm-1處的小吸收峰是β-糖苷鍵吸收峰，說明存在β-糖苷鍵；813 cm-1處的吸收峰是甘露糖的特征吸收峰，表明多糖的糖基中含有甘露糖[24]；在 1 616 cm-1處有 NH2和—NH3+的特征吸收峰，說明紫椴花粗多糖中有蛋白多糖。

圖3 紫椴花多糖紅外光譜掃描圖Fig.3 Infra-red spectrogram of polysaccharides of Tilia amurensis Rupr

2.4 紫椴花多糖體外抗氧化活性的測定結(jié)果分析

2.4.1 紫椴花粗多糖清除DPPH自由基能力的測定結(jié)果分析 DPPH自由基在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，溶液在波長517 nm處有特征吸收峰，呈紫紅色。自由基清除劑可與其單電子配對(duì)而使其吸收減弱，減弱程度與其所接受的電子數(shù)成定量關(guān)系，因此可用分光光度法評(píng)價(jià)自由基的清除情況[25]。如圖4（a）所示，一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的VC和紫椴花多糖對(duì)DPPH自由基都具有一定的清除效果，隨著質(zhì)量濃度的增加，VC對(duì)DPPH的清除率基本保持在50%左右，沒有顯著的量效關(guān)系。大多數(shù)研究植物多糖清除DPPH自由基活性的文獻(xiàn)報(bào)道中，VC對(duì)DPPH自由基的清除率基本上能達(dá)到100%，本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因可能是由于DPPH的溶劑不同造成的，因?yàn)樽祥不ǘ嗵怯鲆掖汲恋恚蔬x擇用甲醇溶解DPPH；紫椴花多糖對(duì)DPPH的清除效果在較低質(zhì)量濃度范圍內(nèi)時(shí)呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系，質(zhì)量濃度達(dá)到600 μg/mL后，逐漸趨于穩(wěn)定；且同質(zhì)量濃度的VC對(duì)DPPH的清除效果優(yōu)于紫椴花多糖的。

2.4.2 紫椴花粗多糖總還原能力的測定結(jié)果分析抗氧化劑的抗氧化能力與其還原力有關(guān)，還原力越大，抗氧化能力越強(qiáng)?？寡趸瘎┠軌蛟谝欢ǖ臈l件下將Fe3+還原為Fe2+。根據(jù)1.2.7之2）的方法，反應(yīng)后的生成物在700 nm處的吸光度的大小即反映了其抗氧化能力的大小，值越大則樣品的還原能力越強(qiáng)[26]。 如圖 4（b）所示，不同質(zhì)量濃度（8～80 μg/mL）的紫椴花多糖溶液具有一定的總還原能力，且隨著質(zhì)量濃度增加呈現(xiàn)線性升高趨勢，與同質(zhì)量濃度的VC相比，紫椴花多糖的總還原能力相對(duì)較弱。

2.4.3 紫椴花粗多糖清除羥自由基能力的測定結(jié)果分析 H2O2與FeSO4反應(yīng)（Fenton反應(yīng)）會(huì)產(chǎn)生羥自由基，羥自由基具有很強(qiáng)的氧化能力，通過攻擊水楊酸分子中的苯環(huán)使其發(fā)生氧化反應(yīng)，生成的有色物質(zhì)在510 nm處的吸光值與羥自由基的量成正比[27]。若在反應(yīng)體系中加入抗氧化劑，羥自由基受到抑制，有色物質(zhì)生成量將會(huì)減少。如圖4（c）所示，不同質(zhì)量濃度（200～1800 μg/mL）的紫椴花多糖對(duì)羥自由基具有明顯的清除作用，且清除率隨著質(zhì)量濃度的增加而升高，當(dāng)其質(zhì)量濃度為1 800 μg/mL時(shí)，對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)88.19%。VC對(duì)羥自由基的清除能力強(qiáng)于同質(zhì)量濃度的紫椴花多糖，當(dāng)VC質(zhì)量濃度為1 800 μg/mL時(shí)，羥自由基清除率達(dá)到100%。

2.4.4 紫椴花粗多糖抑制脂質(zhì)過氧化能力的測定結(jié)果分析 Fe2+能誘導(dǎo)卵黃中磷脂C-2位上所含的多不飽和脂肪酸（PUFA）發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，生成的過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）等在加熱條件下可與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)生成粉紅色的化合物，在波長532 nm處有特征吸收峰，抗氧化劑可在一定程度上延緩或抑制脂質(zhì)過氧化過程[28-29]。如圖4（d）所示，不同質(zhì)量濃度（400～2000 μg/mL）的紫椴花多糖對(duì)Fe2+誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化具有顯著的抑制作用，且質(zhì)量濃度越大，抑制作用越強(qiáng)。當(dāng)紫椴花多糖質(zhì)量濃度為1 600 μg/mL時(shí)，其對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用已接近于同質(zhì)量濃度的VC；當(dāng)紫椴花多糖質(zhì)量濃度為2 000 μg/mL時(shí)，對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制率已達(dá)到75.42%，高于相同質(zhì)量濃度的VC。

圖4 紫椴花多糖和VC的體外抗氧化活性Fig.4 Antioxidant activity in vitro of Tilia amurensis Rupr.polysaccharides and VC

3 結(jié)語

微波輔助提取技術(shù)具有時(shí)間短、效率高、節(jié)能等特點(diǎn)。采用微波法提取紫椴花多糖，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以多糖得率為響應(yīng)值，微波時(shí)間、微波功率和料液比作為自變量，利用Minitab軟件進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，得到微波提取紫椴花多糖的最佳工藝條件：微波時(shí)間9.14 min，微波功率585 W，料液比1∶67（g/mL），多糖得率模型理論預(yù)測值可達(dá)到12.57%。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，回歸模型可以較準(zhǔn)確地對(duì)實(shí)際操作條件下的多糖得率進(jìn)行預(yù)測。

研究表明，機(jī)體的衰老、炎癥、癌癥和免疫疾病等均與體內(nèi)過剩氧自由基（ROS）有關(guān)，其中羥基自由基（·OH）可直接作用于生物膜，引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，危害最大[30-31]。植物多糖作為一類天然自由基清除劑，能夠清除和平衡多種活性氧自由基，減少自由基對(duì)人體的損傷。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，紫椴花多糖具有還原能力，能夠清除DPPH自由基和Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH，同時(shí)對(duì)Fe2+誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有較強(qiáng)的抑制作用，顯示出較好的體外抗氧化活性。與同質(zhì)量濃度的VC相比，其還原力、清除自由基能力稍弱，但其抑制脂質(zhì)過氧化的效果在達(dá)到一定質(zhì)量濃度后，有強(qiáng)于同質(zhì)量濃度VC的趨勢。紫椴花多糖清除自由基的機(jī)制可能與多糖鏈的結(jié)構(gòu)有關(guān)，抑制脂質(zhì)過氧化的機(jī)理可能是其具有螯合金屬離子的能力，使其不能產(chǎn)生啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的羥自由基，進(jìn)而抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生[32]。

作者對(duì)紫椴花多糖粗提物進(jìn)行了體外抗氧化活性評(píng)價(jià)，有必要在此基礎(chǔ)上對(duì)其純化組分的結(jié)構(gòu)、功能及單糖組成進(jìn)行更加深入的研究，以期為其構(gòu)效關(guān)系提供更加充分的理論依據(jù)。同時(shí)，可在體外抗氧化實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對(duì)紫椴花多糖的體內(nèi)抗氧化活性進(jìn)行研究，為開發(fā)安全性高的天然抗氧化劑和保健產(chǎn)品奠定理論基礎(chǔ)。

[1]馬微微，許穎，穆立薔．紫椴的研究進(jìn)展及其資源的開發(fā)利用[J]．中國林副特產(chǎn)，2009（2）：88-90．MA Weiwei，XU Ying，MU Liqiang．The resource development and research progress of Tilia amurensis Rupr.[J]．Forest Byproduct and Specialty in China，2009（2）：88-90．（in Chinese）

[2]國家中醫(yī)管理局《中華本草》編委會(huì)．中華本草［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：4312．

[3]Ahn D K．Illustrated Book of Korean Medicinal Herbs[M].Seoul：Kyo-Hak Publishing Co Ltd，2003：56．

[4]Park J H．Medicinal Plants of Korea[M].Seoul：Shinil Book Co，2004：896-900．

[5]穆立薔，鄭健，王洋，等．紫椴花和果實(shí)化學(xué)成分及其地理變異[J]．林業(yè)科學(xué)，2009，45（4）：46-52．MU Liqiang，ZHENG Jian，WANG Yang，et al．Chemical compositions and geographic variation in flowers and fruits of Tilia amurensis[J]．Scientia Silvae Sinicae，2009，45（4）：46-52．（in Chinese）

[6]馬微微．紫椴花抗炎鎮(zhèn)痛及抗菌的藥效學(xué)研究[D]．哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2009．

[7]Choi J Y，Seo C S，Zheng M S，et al．Topoisomerase I and II inhibitory constituents from the bark of Tilia amurensis[J]．Archives of Pharmacal Research，2008，31（11）：1413-1418．

[8]劉立平.紫椴地上器官化學(xué)成分的初步研究[D]．哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2009．

[9]MU Liqiang，LIU Liping，MA Dalong．Optimal ultrasonic extraction condition and determination of polysaccharides in Tilia amurensis flowers[J]．Journal of Forest Research，2010，21（1）：77-80．

[10]WU Yan，Steve W Cui，TANG Jian，et al．Optimization of extraction process of crude polysaccharides from boat-fruited sterculia seeds by response surface methodology[J]．Food Chemistry，2007，105：1599-1605．

[11]盧丹，呂淼華，姚善涇．微波輔助法提取獼猴桃多糖的條件優(yōu)化[J]．食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，29（3）：401-405．LU Dan，LV Miaohua，YAO Shanjing．Optimization of the extraction of polysaccharides with microwave-assisted extraction from Actinidia chinensis[J]．Journal of Food Science and Biotechnology，2010，29（3）：401-405．（in Chinese）

[12]ZHONG Kui，WANG Qiang．Optimization of ultrasonic extraction of polysaccharides from dried longan pulp using response surface methodology[J]．Carbohydrate Polymers，2010，80：19-25．

[13]郭輝娟，魏定國．半夏多糖提取工藝優(yōu)化及其清除自由基能力研究[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19341-19342，19345．GUO Huijuan，WEI Dingguo．Study on optimization of extraction process of Pinellia ternate （Thunb.） Breit.polysaccharide and its scavenging effect on radical[J]．Journal of Anhui Agricultural Sciences，2010，38（34）：19341-19342，19345．（in Chinese）

[14]孟憲軍，孫希云，朱金艷，等．藍(lán)莓多糖的優(yōu)化提取及抗氧化性研究[J]．食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，29（1）：56-60．MENG Xianjun，SUN Xiyun，ZHU Jinyan，et al．Extraction and antioxidant capability of blueberry polysaccharides[J]．Journal of Food Science and Biotechnology，2010，29（1）：56-60．（in Chinese）

[15]SONG Houfang，ZHANG Quanbin，ZHANG Zhongshan，et al．In vitro antioxidant activity of polysaccharides extracted from Bryopsis plumosa[J]．Carbohydrate Polymers，2010，80：1057-1061．

[16]謝佳，張靜．不同苦瓜多糖的體外抗氧化活性研究[J]．廣州化工，2010，38（5）：87-90．XIE Jia，ZHANG Jing．Study on antioxidant activity in vitro of different polysaccharides from Momordica charantia[J]．Guangzhou Chemical Industry，2010，38（5）：87-90．（in Chinese）

[17]王希，吳向陽，仰榴青，等．大麥多糖的提取及清除羥自由基活性研究[J]．食品研究與開發(fā)，2008，29（11）：64-67．WANG Xi，WU Xiangyang，YANG Liuqing，et al．Study on extraction and ability to scavenge hydroxyl radicals of polysaccharides from barely[J]．Food Research and Development，2008，29（11）：64-67．（in Chinese）

[18]張爾賢，方黎，張捷，等．菊花提取物的抗氧化活性研究[J]．食品科學(xué)，2000，21（7）：6-9．ZHANG Erxian，F(xiàn)ANG Li，ZHANG Jie，et al．Study on anti-oxidative activity of flos chrysanthemum extract[J]．Food Science，2000，21（7）：6-9．（in Chinese）

[19]楊穎，孫文武，周晨，等．響應(yīng)曲面法優(yōu)化玉竹水溶性多糖提取及體外抗氧化研究[J]．食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2013，32（3）：298-306．YANG Ying，SUN Wenwu，ZHOU Chen，et al．Optimization of water-soluble polysaccharides extraction from rhizome of Polygonatum odoratum using response surface methodology and its antioxidant activities in vitro[J]．Journal of Food Science and Biotechnology，2013，32（3）：298-306．（in Chinese）

[20]陳小梅，甘純璣，陳彩玲，等．響應(yīng)面法優(yōu)化微波輔助提取滸苔多糖工藝[J]．食品研究與開發(fā)，2011，32（4）：44-48．CHEN Xiaomei，GAN Chunji，CHEN Cailing，et al．Microwave-assisted extraction of polysaccharides from Enteromorpha prolifera（EP） by response surface methodology[J]．Food Research and Development，2011，32（4）：44-48．（in Chinese）

[21]王磊，劉秀鳳，邱芳萍，等．微波輔助提取玉米須多糖及其組成的研究[J]．食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2009，28（1）：72-75．WANG Lei，LIU Xiufeng，QIU Fangping，et al．Extraction of corn-silk polysaccharides by microwave-assisted technology[J]．Journal of Food Science and Biotechnology，2009，28（1）：72-75．（in Chinese）

[22]夏朝紅，戴奇，房韋，等．幾種多糖的紅外光譜研究[J]．武漢理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，29（1）：45-47．XIA Chaohong，DAI Qi，F(xiàn)ANG Wei，et al．Research on the IR spectrscopy of kinds of polysaccharide[J]．Journal of Wuhan University of Technology，2007，29（1）：45-47．（in Chinese）

[23]張賽金，李文權(quán)，鄧永智，等．海洋微藻多糖的紅外光譜分析初探[J]．廈門大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，44（z1）：212-214．ZHANG Saijin，LI Wenquan，DENG Yongzhi，et al．Analysis of marine microalgal polysaccharides by gas chromatography and IR spectroscopy[J]．Journal of Xiamen University：Natural Science，2005，44（z1）：212-214．（in Chinese）

[24]蓋英萍，牟志美，冀憲領(lǐng)，等．桑葉多糖的提取與分析[J]．蠶業(yè)科學(xué)，2005，31（1）：31-35．GAI Yingping，MU Zhimei，JI Xianling，et al．The extracting and analyses of polysaccharides in mulberry leaf[J]．Acta Sericologica Sinica，2005，31（1）：31-35．（in Chinese）

[25]張匯，鄢嫣，聶少平，等．黑靈芝不同部位多糖成分分析及抗氧化活性[J]．食品科學(xué)，2011，32：56-61．ZHANG Hui，YAN Yan，NIE Shaoping，et al．Monosaccharide composition and antioxidant activity in vitro of polysaccharides from different parts of Ganoderma atrum[J]．Food Science，2011，32：56-61．（in Chinese）

[26]LIU Xin，SUN Zhenliang，ZHANG Miansong，et al．Antioxidant and antihyperlipidemic activities of polysaccharides from sea cucumber Apostichopus japonicus[J]．Carbohydrate Polymers，2012，90：1664-1670．

[27]XIONG Shuangli，LI Anlin，HUANG Ni，et al．Antioxidant and immunoregulatory activity of different polysaccharide fractions from tuber of Ophiopogon japonicus[J]．Carbohydrate Polymers，2011，86：1273-1280．

[28]曹煒，宋紀(jì)蓉，陳衛(wèi)軍，等．蜂膠對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用[J]．食品科學(xué)，2004，25（1）：34-36．CAO Wei，SONG Jirong，CEHN Weijun，et al．Study on the action of propolis inhibit the peroxidation of polyunsaturated fatty acid from yelk lipoprotein induced by Fe2+[J]．Food Science，2004，25（1）：34-36．（in Chinese）

[29]張強(qiáng)，王松華，孫玉軍，等．洋蔥中黃酮類化合物體外抗氧化活性研究[J]．農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào)，2009，40（8）：139-142．ZHANG Qiang，WANG Songhua，SUN Yujun，et al．Study on antioxidant activity in vitro of onion flavonoids[J]．Transactions of the Chinese Society for Agricultural Machinery，2009，40（8）：139-142．（in Chinese）

[30]丁紅秀，高蔭榆，晁紅娟，等．毛竹葉多糖體內(nèi)抗氧化作用研究[J]．食品科學(xué)，2008，29（5）：427-430．DING Hongxiu，GAO Yinyu，CHAO Hongjuan，et al．Study on antioxidation effect in vivo of polysaccharide from moso bamboo leaves[J]．Food Science，2008，29（5）：427-430．（in Chinese）

[31]王德才，高麗君，高艷霞．泰山四葉參多糖體外抗氧化活性的研究[J]．中國生化藥物雜志，2008，29（2）：104-106．WANG Decai，GAO Lijun，GAO Yanxia．Antioxidative effects of polysaccharide extracted from Radix Codonopsis Lanceolatae from Mount Taishan in vitro[J]．Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics，2008，29（2）：104-106．（in Chinese）

[32]梁俊，李建科，趙偉，等．石榴皮多酚體外抗脂質(zhì)過氧化作用研究[J]．食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2012，31（2）：159-165．LIANG Jun，LI Jianke，ZHAO Wei，et al．Effect of pomegranate peel polyphenols on lipid peroxidation in vitro[J]．Journal of Food Science and Biotechnology，2012，31（2）：159-165．（in Chinese）