趙家才，毛翔光，馬燕茹，李 雯，王春蘭，何永富

（云南省種畜繁育推廣中心凍精站，云南 昆明小哨650212）

水牛是熱帶、亞熱帶地區(qū)特有的畜種，具有乳、肉、役多種用途，飼養(yǎng)方便，成本低。河流型水牛適應(yīng)性好，生產(chǎn)性能優(yōu)良，具有體型較大，生產(chǎn)性能優(yōu)良，奶質(zhì)好，抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)。摩拉水牛成年體重：公牛平均969kg、母牛平均647kg；尼里水牛成年體重：公牛平均800.0kg、母牛平均600kg［1］；榔江水牛公牛36月齡體重709.5±34.65kg，12月齡平均體重達(dá)255±32.53kg。對河流型水牛精液質(zhì)量研究，目的在于提高其冷凍精液質(zhì)量，提高冷凍精液受胎率，充分發(fā)揮河流型水牛優(yōu)良的遺傳資源。

1 材料和方法

1.1 種公牛的來源

我站先后從廣西水牛研究所引進(jìn)摩拉水牛和尼里水牛；2008年5月從騰沖縣引進(jìn)兩頭檳榔江水牛，檳榔江水牛（Bos bubalus）是我國發(fā)現(xiàn)的唯一的河流型水牛（2n＝50），2008年已通過遺傳資源審定，2009年入選國家奶水牛良種補(bǔ)貼項(xiàng)目提供冷凍精液。摩拉水牛，尼里水牛和檳榔江水牛在云南省種畜繁育推廣中心凍精站飼養(yǎng)和生產(chǎn)冷凍精液。

1.2 種公牛的調(diào)教與日常管理

1.2.1 種公牛的飼養(yǎng)管理 水牛引進(jìn)經(jīng)隔離檢疫后實(shí)行單圈飼養(yǎng)選派責(zé)任心強(qiáng)，經(jīng)驗(yàn)豐富的飼養(yǎng)員管理。定時定量飼喂，不飼喂霉?fàn)€變質(zhì)的飼草飼料，自由飲水，飲水保持清潔，運(yùn)動場自由運(yùn)動，日糧結(jié)構(gòu)為：混合精料，成年公牛供給4～5kg，育成公牛供給3～4kg；粗飼料：常年飼喂羊草8～10kg；夏秋季飼喂羊草6～8kg，人工混播牧草30～50kg。保持牛體和圈舍清潔舒適，日常加強(qiáng)公牛肢蹄的護(hù)理和保健，定期免疫、驅(qū)蟲和環(huán)境消毒。

1.2.2 公牛的調(diào)教與采精方法 水牛用假陰道法采精［2］待公牛性興奮強(qiáng)烈，爬跨臺畜，陰莖勃起充分時把陰莖導(dǎo)入假陰道公牛即可射精。假陰道采精時，假陰道內(nèi)胎溫度為40～42℃，假陰道壓力和潤滑度適當(dāng)。采精時采精員要注意人畜安全、沉著冷靜、膽大心細(xì)、操作熟練、自然，讓公牛陰莖自主探尋插入假陰道，避免不良刺激造成公牛不快，防止形成惡癖，不利于正常采精，公牛射精后移開假陰道收集精液送入實(shí)驗(yàn)室處理。

1.3 水牛精液品質(zhì)的檢測方法和指標(biāo)

水牛精液品質(zhì)的檢測按照牛冷凍精液標(biāo)準(zhǔn)（GB4143－2008）及生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程進(jìn)行檢測，測定公牛的射精量、原精活力、原精精子密度、冷凍精液解凍活力和畸形率。

1.4 水牛冷凍精液的制作流程

采集的水牛精液，經(jīng)質(zhì)量檢測后，凡原精活力65%以上、精子密度為6.0億／mL以上其他指標(biāo)無異常的精液，在等溫條件下用冷凍稀釋液稀釋，稀釋后的水牛精液用MRS－3型塑料細(xì)管分裝噴字一體機(jī)進(jìn)行分裝、封口和噴字，分裝后的細(xì)管精液溫度降至室溫時放入＋4℃的冰箱中持續(xù)降溫平衡4h，平衡后的細(xì)管精液在低溫操作柜中水平放于冷凍架上，然后用程控冷凍儀冷凍；最后把冷后的細(xì)管冷凍精液浸入液氮中，隨機(jī)抽樣解凍，解凍溫度為40±2℃，檢查解凍活力和畸形率，冷凍精液解凍活力35%以上，其他指標(biāo)均合格者入庫保存和使用。

1.5 數(shù)據(jù)來源和處理方法

數(shù)據(jù)來源于2008年至2013年的水牛采精記錄，用生物統(tǒng)計法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析［3］。2月初至5月初為春季，5月初至8月初為夏季，8月初至11月初為秋季，11初至2月初為冬季。

2 結(jié)果與分析

2.1 水牛原精液品質(zhì)

摩拉水牛公牛的射精量為5.1±2.37mL（n＝2688）、精子密度為7.8±3.68億／ml、原精活力57.4±16.42%；尼里水牛公牛的射精量為5.3±1.99mL（n＝1370）、精子密度為8.4±3.54億／mL、原精活力62.7±12.51%；檳榔江水牛公牛的射精量為5.6±2.26mL（n＝271）、精子密度為8.6±5.13億／mL、原精活力65.2±9.19%。

2.2 水牛冷凍精液品質(zhì)

水牛精液經(jīng)稀釋、分裝、平衡和冷凍解凍以后，解凍活力達(dá)到0.35以上，牛冷凍精液國家標(biāo)準(zhǔn)按（GB 4143—2008）要求的冷凍精液才能保存使用，摩拉牛精液報廢率為37.20%，尼里水牛精液報廢率為32.51%，檳榔江水牛精液報廢率為12.92%。摩拉水牛冷凍精液解凍活力平均36.0±2.13%（n＝1680），畸形率為20.62±11.04%（n＝873）；尼里水牛冷凍精液解凍活力平均36.5±2.43%（n＝1102），畸形率為15.2±5.71%（n＝481）；檳榔江水牛冷凍精液解凍活力平均37.2±2.48%（n＝239），畸形率為19.6±6.08%（n＝110）。

2.3 不同品種水牛精液品質(zhì)分析

水牛24～30月齡開始試采精，試采精初期（30月齡以前）每兩周采精一次，30～36月齡后，每周采精兩次。水牛精液品質(zhì)和精子冷凍解凍活力及畸形率詳見表1、表2、表3、表4、表5、表6和表7。

表1 不同品種水牛凍精畸形率比較表

表1的結(jié)果分析得出：春季尼里水牛冷凍精液解凍后畸形率極顯著（P＜0.01）低于摩拉水牛和檳榔江水牛，摩拉水牛與檳榔江水牛間的差異不顯著；夏季尼里水牛冷凍精液解凍后畸形率極顯著（P＜0.01）低于摩拉水牛和檳榔江水牛，摩拉水牛與檳榔江水牛間的差異顯著（P＜0.05）；秋季尼里水牛冷凍精液解凍后畸形率極顯著（P＜0.01）低于摩拉水牛和檳榔江水牛，摩拉水牛與檳榔江水牛間的差異不顯著；冬季尼里水牛冷凍精液解凍后畸形率極顯著（P＜0.01）低于摩拉水牛和檳榔江水牛，摩拉水牛與檳榔江水牛間的差異不顯著。

表2 不同品種水牛射精量比較表

表2的結(jié)果分析得出：春季摩拉水牛、檳榔江水牛和尼里水牛射精量差異均不顯著（P＞0.05）；夏季摩拉水牛和尼里水牛射精量均極顯著（P＜0.01）低于檳榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛差異不明顯；秋季摩拉水牛射精量顯著低于尼里水牛（P＜0.05），摩拉水牛和檳榔江水牛射精量的差異不明顯，尼里水牛與檳榔江水牛射精量差異亦不明顯（P＞0.05）；冬季摩拉水牛射精量顯著低于尼里水牛（P＜0.05），摩拉水牛和檳榔江水牛射精量的差異不明顯，尼里水牛與檳榔江水牛射精量差異亦不明顯（P＞0.01）。

表3 不同品種水牛原精活力比較表

表3的結(jié)果得出：春季摩拉水牛原精活力極顯著低于尼里水牛和檳榔江水牛（P＜0.01），尼里水牛和檳榔江水牛間差異不顯著；夏季摩拉水牛原精活力極顯著低于檳榔江水牛（P＜0.01），顯著低于尼里水牛（P＜0.05），尼里水牛和檳榔江水牛間的差異不顯著；秋季摩拉水牛、尼里水牛和檳榔江水牛間原精活力差異均不明顯；冬季摩拉水牛原精活力極顯著（P＜0.01）低于尼里水牛和檳榔江水牛，尼里水牛和檳榔江水牛間差異不顯著。

表4 不同品種水牛精子密度比較表

表4的結(jié)果同理得出：春季摩拉水牛和尼里水牛精子密度極顯著（P＜0.01）低于檳榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛間精子密度不顯著（P＞0.05）；夏季尼里水牛精子密度極顯著（P＜0.01）高于檳榔江水牛，顯著（P＞0.05）高于摩拉水牛，摩拉水牛和檳榔江水牛間差異不明顯（P＞0.05）；秋季摩拉水牛、尼里水牛和檳榔江間精子密度差異不明顯（P＞0.05）；冬季尼里水牛和摩拉水牛精子密度極顯著（P＜0.01）低于檳榔江水牛，摩拉水牛和尼里江水牛間差異不顯著。

表5 不同品種水牛不同季節(jié)精子解凍活力比較表

表5的結(jié)果得出：春季摩拉水牛冷凍精液解凍活力極顯著低于尼里水牛和檳榔江水牛，摩拉水牛冷凍精液解凍活力極顯著低于尼里水牛（P＜0.01）；夏季摩拉水牛和尼里水牛冷凍精液解凍活力極顯著（P＜0.01）低于檳榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛冷凍精液解凍活力不顯著（P＞0.05）；秋季摩拉水牛和尼里水牛冷凍精液解凍活力極顯著低于檳榔江水牛，摩拉水牛冷凍精液解凍活力極顯著低于尼里水牛（P＜0.01）；冬季尼里水牛冷凍精液解凍活力顯著高于摩拉水牛和檳榔江水牛（P＜0.05），摩拉水牛和檳榔江水牛間差異不顯著（P＞0.05）。

表6 不同月齡水牛精液品質(zhì)分析比較

表7 不同年度水牛精液品質(zhì)分析比較表

3 討論與小結(jié)

公牛不同個體間、不同品種間、不同季節(jié)、不同年齡原精活力、凍精解凍活力、采精量和精子密度存在差異，部分公牛精液品質(zhì)低，個別公牛精子耐凍性差，這與王英群［4］報道相一致，水牛精子畸形率比較高，尼里水牛冷凍精液精子畸形率及顯著低于摩拉水牛，采精量較低。種公牛精液品質(zhì)的變化隨不同的采精年度，飼養(yǎng)管理水平和種公牛月齡的變化而變化，種公牛個體間的差異極為明顯，公牛射精量與精子密度呈負(fù)相關(guān)。

3.1 季節(jié)對水牛精液品質(zhì)的影響

雖然水牛是常年多次發(fā)情的動，但它們的繁殖效率在一年當(dāng)中的不同季節(jié)表現(xiàn)出很大的差異［5］。云南屬亞熱帶和熱帶高原季風(fēng)氣候，以亞熱帶氣候分布較廣，緯度較低，海拔較高，年溫差小，日溫差大，干濕季分明，但日照時間的季節(jié)變化明顯。水牛射精量、原精活力、精子密度、精子畸形率和冷凍精液解凍活力隨季節(jié)的節(jié)律變化而發(fā)生一定的變化。摩拉水牛，泥里水牛和檳榔江水牛精子畸形率夏季和秋季低于冬季和春季；摩拉水牛和檳榔江水牛射精量夏季和秋季較高，均高于冬季和春季，尼里水牛射精量秋季和冬季較高；原精活力摩拉水牛夏季和秋季較高，尼里水牛春季和秋季較高，檳榔江水牛秋季和冬季較高；精子密度摩拉水牛和尼里水牛夏季和秋季較高，檳榔江水牛春季和冬季較高；凍精解凍活力摩拉水牛和尼里水牛秋季和冬季較高，檳榔江水牛夏秋季較高。

3.2 品種對精液品質(zhì)的影響

尼里水牛冷凍精液解凍精子畸形率最低，摩拉水牛最高；檳榔江水牛原精活力、精子密度、冷凍精液解凍活力和射精量均高于摩拉水牛和尼里水牛，摩拉水牛最低，這與王英群［4］報道不一致。

3.3 種公牛月齡對精液品質(zhì)的影響

處于不同月齡的種公牛其精液品質(zhì)差異較大，采精量，原精活力和冷凍精液解凍活力隨月齡的增加而有所增加，精子密度則呈下降趨勢，61至84月齡射精量、原精活力和解凍活力較高，30至36月齡射精量最低，差異極顯著；61至84月齡精子密度最低，30至36月齡精子密度最高，差異極顯著，37至72月齡時比較穩(wěn)定。

3.4 采精年度對種公牛精液品質(zhì)的影響

不同的采精年度種公牛精液品質(zhì)具有不同的差異，2011年度射精量最高，2008和2009年度最低，原精活力2012年度最高，2008年度最低，精子密度2010年度最高，2013年度最低，冷凍精液解凍活力2013和2012年度最高，2009年度最低.2013年原精活力較低，試采精青年公牛比例較高，部分青年公牛原精精子活力低，報廢率高。2010年部分公牛每個采精日采精兩次，第一次和第二次采精間隔時間30～40min，對精液品質(zhì)無不良影響。

總之，河流型水牛精液品質(zhì)較好，精子冷凍復(fù)蘇率高，解凍活力好，冷凍效果穩(wěn)定，種公?？梢猿Ｄ赀B續(xù)采精。水牛品種、不同季節(jié)、個體和年度因素等對精液品質(zhì)具有影響。不同品種水牛精液品質(zhì)存在差異，檳榔江水牛精液品質(zhì)優(yōu)于尼里水牛和摩拉水牛。不同公牛個體間存在明顯差異，個別公牛精子活力極低，精子畸形率較高，有的生精微弱，往往終生都難于改變，精液品質(zhì)差的公牛應(yīng)及時淘汰。，水牛精液品質(zhì)隨季節(jié)的變化而發(fā)生一定程度的改變，極端天氣對公牛精液品質(zhì)具有明顯影響（在昆明的氣候環(huán)境下），導(dǎo)致大部分公牛精液活力大幅下降。不同年度由于受飼料供給、飼養(yǎng)管理、飼養(yǎng)方式、種公牛年齡結(jié)構(gòu)等因素的影響，精液品質(zhì)發(fā)生變化。水牛性成熟較晚，但也可適當(dāng)提早采精利用，摩拉水牛和尼里水牛一般30月齡可試采精，部分公牛在24月齡即能試采精，精液品質(zhì)良好。檳榔江水牛為地方品種，適應(yīng)性較強(qiáng)，耐粗飼，主要生活在海拔較低的低熱河谷地帶，但在海拔500～2000m的地區(qū)也能正常生長繁殖，性成熟較早，24月齡即能順利采集到精液，可比摩拉水牛和尼里水牛提早6至12月齡采精。本研究未考慮疾病、應(yīng)激、飼養(yǎng)管理、采精和精液處理等因素對公牛精液品質(zhì)的影響，要進(jìn)一步加強(qiáng)水牛冷凍精液技術(shù)和機(jī)理的研究特別是水牛精子畸形率偏高的機(jī)理是目前亟待解決的課題。

［1］ 王根林.養(yǎng)牛學(xué)［J］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000：9.

［2］ 趙家才.三種采精方法在種公牛上的應(yīng)用效果分析 ［J］.黃牛雜志，2001，27（1）：48－50.

［3］ 明道緒.生物統(tǒng)計附試驗(yàn)設(shè)計［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

［4］ 王英群.河流型不同品系種公牛精液品質(zhì)的差異分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2012，28（11）.

［5］ Antonio Borghese著 .世界水牛生產(chǎn)與研究進(jìn)展［M］.趙開典，毛翔光，雷衡等編譯.昆明：云南出版集團(tuán)公司云南科技出版社，2012.12