潘 澄 賈仲偉 張至慶

(江蘇蘇豪國際集團股份有限公司，南京 210012)

2013年春、秋及2014年春季，蘇豪集團與蘇州大學、江蘇省蠶種公司合作，按照醫(yī)用蠶絲的要求，在溧陽蘇豪蠶種基地進行了家蠶全齡人工飼料育的探索，取得了較好的進展。

有關(guān)家蠶人工飼料，早在1930年日本人就有人進行了研究。我國從20 世紀70年代開展人工飼料研究，1974年用人工飼料養(yǎng)蠶獲得成功。近年來，家蠶人工飼料育的研究有了較大進展，并開展農(nóng)村規(guī)模化飼養(yǎng)探索，但對于家蠶人工飼料育蠶絲用于醫(yī)用未見報道。

天然蠶絲絲素兼具良好的生物相容性、生物活性和生物可降解性，作為生物材料醫(yī)療器械具有巨大的開發(fā)潛力，而傳統(tǒng)桑葉育受農(nóng)藥、環(huán)境污染因素影響，造成蠶絲污染物殘留，而造成醫(yī)用蠶絲材料的重金屬、氟化物等化學污染物含量不可控的問題。人工飼料養(yǎng)蠶較傳統(tǒng)的桑葉養(yǎng)蠶具有不受季節(jié)、氣候、地域、土地限制等優(yōu)勢，無毒安全，這為生產(chǎn)家蠶生物制品提供保證。

按照《醫(yī)用蠶絲蛋白材料產(chǎn)業(yè)鏈上游關(guān)鍵技術(shù)的研究和開發(fā)》項目要求，項目組技術(shù)人員嘗試在非實驗室無菌環(huán)境中進行家蠶全齡人工飼料育，旨在開發(fā)低/無污染、可溯源、生物安全、無細胞毒性的生物醫(yī)用蠶絲。蘇豪蠶種公司配備了專人、專用蠶室蠶具，配套相關(guān)項目資金開展家蠶全齡人工飼料的飼育工作。

1 飼育準備

1.1 家蠶人工飼料加工與貯存

飼料均用粉體B 類飼料(不含瓊脂)，采用鋁箔復(fù)合袋包裝，便于貯存和運輸，由山東省蠶業(yè)研究所提供。

粉體飼料的加工方法:根據(jù)不同齡期，飼料與水的比例為1～2 齡1 ∶1.8，3～4 齡1 ∶1.9，5 齡1 ∶2.0，加入的水之前已煮沸消毒冷卻，混合后的濕體人工飼料用市售塑料薄膜保鮮袋作為包裝材料，裝袋后搟平，用封口機封口。稚蠶用飼料180g/袋左右，厚度在0.3cm 左右，壯蠶用飼料400g/袋左右，厚度在0.5cm 左右，采用蒸鍋滅菌50min，冷卻至室溫前，搟壓一遍，防止飼料松散，便于切條喂蠶。飼料冷卻過程中，用于放置飼料的地方最好是聚乙烯塑料板材、石材、鋁板材或不銹鋼板材制作，木制桌(臺)面油漆中有毒成分會污染飼料，造成蠶中毒現(xiàn)象，飼料放入冰箱冷藏結(jié)成較硬的塊裝，根據(jù)蠶不同齡期，將飼料切成粗細不同條狀喂蠶，稚蠶期寬度約1cm 左右，壯蠶期在1.5cm 左右。

飼料的貯存方法:粉體飼料按說明貯藏在黑暗、干燥、無污染的室內(nèi)，保質(zhì)期可達200d 以上，也可貯存在冰箱內(nèi)。用保鮮袋包裝的濕體人工飼料，冰箱4℃左右保存，保質(zhì)期30d 以內(nèi)。

1.2 春季全齡人工飼料育蠶品種

試驗用蠶品種為“蘇豪×鐘曄”。

1.3 全齡人工飼料養(yǎng)蠶設(shè)施

使用55.5cm×36cm ×10cm 規(guī)格的聚乙烯塑料周轉(zhuǎn)箱，電熱加溫設(shè)備、空調(diào)、補濕器，其他附屬設(shè)備如冰箱、浸泡消毒塑料蠶具用大型塑料箱、飼料蒸煮鍋、飼料制作操作間，蠶室專用拖鞋、工作服、一次性手套、消毒藥物、蠶網(wǎng)蠶筷、刀片菜板等物品。

2 飼育方法

2.1 收蟻

采用平板狀給餌法，即將人工飼料切成所需蠶座面積放入飼育箱，將有蟻蠶的棉紙覆蓋在飼料上，4～5h 后將尚未爬到飼料上的蟻蠶掃落到飼料上即可。

2.2 給料次數(shù)

稚蠶飼育期間采用切條育，每齡給餌一次，即收蟻、2 齡餉食、3 齡餉食各喂一次，期間視食餌情況及飼料干濕程度，齡中可少量補給1 次，4 齡給餌次數(shù)2～3 回，5 齡1 回/日，飼料面積占蠶座面積的50%～75%。

2.3 溫濕度調(diào)節(jié)

飼育溫度1 齡83～85F，2 齡82～84F，3 齡81～82F，濕度1～3 齡－1～－2，密閉飼育，并補濕。由于稚蠶期飼育密度偏大，每天通風透氣1～2 次。4 齡蠶的適宜飼育溫度為79F，5 齡蠶的適宜飼育溫度為75～77F，濕度4～5 齡－3～－4。

2.4 眠起處理

蠶兒將眠期停止補濕，眠蠶達到10%～20%以后將飼育箱錯開通風排濕，眠蠶達50%以上時開門窗加溫排濕，眠蠶達到85%～90%時，撒焦糠，以便使飼料迅速變性和干燥，以免早起蠶食餌造成發(fā)育不齊。待起蠶95%以上，且起蠶向四周爬散時餉食，餉食時先在起蠶上撒一層石灰消毒后，再撒一次焦糠隔離石灰，加兩層塑料蠶網(wǎng)，將條狀飼料擺放在蠶網(wǎng)上，第2 天抬網(wǎng)除沙，并擴座或分箱，網(wǎng)下眠蠶及弱小蠶淘汰，1～2 齡中間不除沙，3 齡視情況擴座除沙。4、5 齡蠶可移至蠶匾中飼育，每次給餌前加網(wǎng)，4～5h 后除沙，以后即可給足飼料正常飼育。

3 全齡人工飼料防霉及防病措施

3.1 防止人工飼料長霉

飼料中豐富的營養(yǎng)及飼養(yǎng)中適宜的溫濕度為霉菌的增殖提供了良好的條件，使飼料腐壞，因此人工飼料中已添加了適量防腐劑和抗生素，并調(diào)節(jié)ph 值為偏酸性，在適溫適濕情況下不會長霉，但蠶座密閉，濕度長時間處于飽和狀態(tài)，水分局部稀釋了防腐劑濃度并改變了飼料ph 值，無法抑制飼料上的霉菌生長造成的，另外飼育操作中滴在飼料上的水也是造成長霉的原因。操作和補濕時應(yīng)避免汗水和冷凝水滴在飼料上，壯蠶飼育不可過密，要經(jīng)常通風，如發(fā)現(xiàn)長霉點要用消毒蠶筷及時去除或更換飼料，污染嚴重的或整箱放棄飼養(yǎng)。

3.2 防病工作

人工飼料育蠶病毒病主要是血液型膿病發(fā)生較多，不易發(fā)現(xiàn)、傳染快、防治難度大，2013年春秋季全齡人工飼育蠶均發(fā)生了細菌性疾病和血液型膿病，均在5 齡餉食后2～3d 發(fā)生大面積膿病，并伴隨細菌病發(fā)生。桑葉育常用新鮮石灰粉消毒預(yù)防血液型膿病的發(fā)生，由于人工飼料呈偏酸性，在人工飼料上用石灰，會中和酸性，使飼料腐壞，并且在餉食后發(fā)現(xiàn)病蠶再用石灰進行消毒，只會短暫抑制發(fā)病，經(jīng)過2～3d 后蠶會繼續(xù)大面積發(fā)病，導致減產(chǎn)甚至養(yǎng)蠶失敗。

在飼育操作過程中均使用一次性塑料薄膜手套或乳膠手套，不直接接觸蠶和飼料，飼喂之前將手套、砧板、刀片均用漂白粉液浸泡消毒，制作好的人工飼料從冰箱拿出后，保鮮膜表面用漂粉液擦拭消毒，飼料切條飼喂前保鮮膜全部去掉，以免蠶兒啃食，所用用具皆為專室專用，并經(jīng)常更換。每次給餌結(jié)束后，將蠶室地面清理干凈，房間和地面均用1%有效氯漂白粉液消毒一遍。發(fā)現(xiàn)病蠶后，立即加網(wǎng)除沙更換蠶匾，死蠶、蠶沙單獨處理，石灰漿覆蓋掩埋，防止交叉感染。

4 飼育結(jié)果

4.1 發(fā)育經(jīng)過

1～2 齡發(fā)育經(jīng)過約312h，3～4 齡288h，5 齡經(jīng)過240h，全齡經(jīng)過840h(表1)。

4.2 產(chǎn)質(zhì)量情況

4.2.1 產(chǎn)量

人工飼料育張種產(chǎn)量平均在27kg 左右，產(chǎn)量偏低，一方面是稚蠶淘汰率偏高，淘汰遲小蠶，保證群體發(fā)育整齊度;另一方面是全齡人工飼料育繭型小，繭層薄。

4.2.2 繭絲質(zhì)量

4.2.3 細胞毒性檢測結(jié)果

受試材料組細胞形態(tài)良好，細胞折光性強，與空白對照組相似，為長梭形和多角形，并可見圓形分裂細胞，表明細胞生長旺盛。陽性對照組細胞數(shù)量明顯少，細胞縮小。受試材料和空白對照組MTT 結(jié)晶物密度均比陽性對照組高。實驗結(jié)果表明蠶絲樣品體外細胞毒性分級為0 級，屬無細胞毒性。

表1 家蠶全齡人工飼料育發(fā)育進度調(diào)查

表2 生絲檢驗結(jié)果

5 小 結(jié)

家蠶全齡人工飼料育的試養(yǎng)結(jié)果表明，飼料育比普通桑葉育齡期經(jīng)過延長近5 天左右，并且可能受品種、飼料配方、飼養(yǎng)環(huán)境技術(shù)等多種因素影響，蠶體之間生長發(fā)育整齊度方面開差較大，淘汰遲小蠶較多。

其次，家蠶全齡人工飼料育過程中，在無法保證環(huán)境絕對無菌的情況下，需要對接觸蠶體及飼料的飼養(yǎng)人員進行嚴格的消毒防病措施。起蠶餉食時可以先撒石灰，再撒焦糠隔離石灰，既可以消毒又可以防止新鮮飼料因接觸石灰而發(fā)生腐敗霉變;在高溫高濕的情況下勤除沙、更換飼料可以防止蠶座霉變對蠶兒生長產(chǎn)生不良影響。

第三，家蠶全齡人工飼料育蠶繭繭形小、纖度細，經(jīng)檢測無細胞毒性和致敏性，符合醫(yī)用級蠶絲蛋白原材料無毒標準。

［1］張亞平，家蠶全齡人工飼料育技術(shù)［J］.江蘇蠶業(yè)，2006(2)

［2］韓益飛，家蠶全齡人工飼料飼育試驗簡報［J］.蠶學通訊，2012，32(2):6－9.

［3］李云芝等，桑葉育改人工飼料育對家蠶生長發(fā)育的影響，2014，46(3):115－116.

［4］錢忠兵，我國家蠶人工飼料育研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景，2010，31(9):117－118.

［5］韓益飛等，家蠶人工飼料研究進展及發(fā)展方向，2000，20(3):14－15，21.