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木脂素促進(jìn)人胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡

2014-11-27 09:42李紅國劉雙萍崔銀姬李柱虎
關(guān)鍵詞:木脂素細(xì)胞周期生存率

李紅國,劉雙萍,崔銀姬,李柱虎

(延邊大學(xué) 醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)教研部, 吉林 延吉 133002)

A.control group;B.experiment group in 48 hours(25 μmol/L);C.experiment group in 72 hours(25 μmol/L)

木脂素促進(jìn)人胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡

李紅國,劉雙萍,崔銀姬,李柱虎*

(延邊大學(xué) 醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)教研部, 吉林 延吉 133002)

木脂素(lignans)是一類由苯丙素氧化聚合而成的天然產(chǎn)物,多以二聚體的形式存在,少數(shù)為三聚體和四聚體。木脂素類化合物具有廣泛的生物活性[1],如抗腫瘤、抗氧化、降壓、鎮(zhèn)靜和保肝等。

目前,木脂素對胃癌細(xì)胞抗增殖及機(jī)制方面的研究尚未見報道。因此,本實驗通過木脂素對胃癌細(xì)胞增殖的影響與Bax和Bcl-2等蛋白之間的相關(guān)性的研究,初步探討木脂素對胃癌細(xì)胞的抗增殖作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系:人胃癌MGC-803細(xì)胞系。

1.1.2 主要試劑:木脂素由延邊大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研部提供(純度為99.9%,化學(xué)名稱為內(nèi)消旋二氫愈創(chuàng)木脂酸,meso-dihydroguaiaretic acid);Bax和Bcl-6單克隆抗體(Santa Cruz公司);Bcl-2單克隆抗體(碧云天生物技術(shù)研究所);ABC免疫組化檢測試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞生存率的檢測:取對數(shù)生長期細(xì)胞用于下列實驗,細(xì)胞數(shù)為3×104個/孔,采用MTT方法。細(xì)胞生存率(%) = 實驗組吸光值/對照組吸光值 ×100%。實驗重復(fù)進(jìn)行3次。

1.2.2 檢測Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白的表達(dá):用ABC免疫組化檢測試劑盒。實驗重復(fù)進(jìn)行3次。Bax、Bcl-2和Bcl-6抗體的稀釋比例均為1∶50。免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果判定根據(jù)Bax以胞質(zhì)呈棕褐色為陽性;Bcl-2和Bcl-6以胞核呈棕黃色為陽性。陽性表達(dá)率(%)=陽性細(xì)胞總數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.3 細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的檢測:采用流式細(xì)胞技術(shù),實驗重復(fù)3次。

1.2.4 透射電鏡觀察:胃癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞生存率的檢測結(jié)果:不同濃度的木脂素處理的MGC-803胃癌細(xì)胞的生存率呈濃度和時間依賴性降低(Plt;0.05)。其IC50值為24.8 μmol/L(表1)。

表1 不同濃度木脂素在不同時間段對MGC-803胃癌細(xì)胞存活率的影響

*Plt;0.05,**Plt;0.01 compared with control group.

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)的檢測結(jié)果

2.2.1 Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白的檢測結(jié)果(表2,圖1)。

2.2.2 細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期檢測結(jié)果:48和72 h對照組凋亡率分別為2.3%±0.4%和2.3%±0.4%,25 μmol/L濃度木脂素處理的實驗組凋亡率分別為15.5%±1.6%和19.8%±2.5%(Plt;0.01)。對照組G1期、G2期和S期細(xì)胞百分

A1.expression of Bax protein was weakly positive in control group;A2.expression of Bax protein was strong positive in experiment group;B1.expression of bcl-2 protein was strong positive in control group;B2.expression of Bcl-2 protein was weakly positive in experiment group;C1.expression of Bcl-6 protein was Strong positive in control group;C2.Expression of Bcl-6 protein was negative in experiment group

圖1 免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測MGC-803細(xì)胞Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白表達(dá)的影響

*Plt;0.01 compared with control group.

A.control group;B.experiment group in 48 hours(25 μmol/L);C.experiment group in 72 hours(25 μmol/L)

圖2流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響
Fig2Detectedtheeffectofapoptosisandcellcyclebyflowcytometry(FCM)

比為54.4%、13.6% 和32.0%;實驗組48 h時為62.1%、8.0%和30.0%;72 h時為60.7%、12.5%和26.3%(圖2)。

2.2.3 透射電鏡觀察結(jié)果:實驗組MGC-803胃癌細(xì)胞形成凋亡小體,呈現(xiàn)出凋亡細(xì)胞典型的形態(tài)學(xué)改變(圖3)。

A.control group gastric carcinoma cell(×6 000);B.experiment group gastric carcinoma cell (×8 000)圖3 透射電鏡觀察胃癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化Fig 3 Observation on morphological changes of gastric cacinoma cells using a transmission electron microscope

3 討論

木脂素在自然界分布廣泛,研究表明木脂素具有明顯的抗腫瘤作用[2]。木脂素對多種人腫瘤細(xì)胞具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。

本研究結(jié)果表明,木脂素對MGC-803胃癌細(xì)胞具有明顯的抗增殖作用,并具有濃度和時間依賴性。細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期檢測結(jié)果,實驗組凋亡率與對照組相比有顯著性差異,說明,木脂素可促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。同時,木脂素可下調(diào)Bcl-2和Bcl-6蛋白的表達(dá),上調(diào)Bax蛋白的表達(dá),表明木脂素通過Bcl-2/Bax蛋白及Bcl-6蛋白的調(diào)控來促進(jìn)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞周期檢測結(jié)果,實驗組G1期細(xì)胞百分比增多,而S期及G2期細(xì)胞百分比減少,說明,木脂素可阻止細(xì)胞從細(xì)胞周期G1期進(jìn)入S期,從而抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。

[1] Chiu HF, Chen TY, Tzeng YT,etal. Improvement of liver function in humans using a mixture of schisandra fruit extract and sesamin[J]. Phytother Res, 2013,27:368-373.

[2] Jeong JB, Hong SC, Jeong HJ,etal. Arctigenin induces cell cycle arrest by blocking the phosphorylation of Rb via the modulation of cell cycle regulatory proteins in human gastric cancer cells[J]. Int Immunopharmacol, 2011,11:1573-1577.

2013-07-21

2013-10-25

吉林省教育廳項目[吉教科合字(2009)第4號]

*通信作者(correspondingauthor): lizh@ybu.edu.cn

1001-6325(2014)05-0704-03

R 361+.1

A

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