徐金鳳 張洪娟

（黑龍江澳利達(dá)奈德制藥有限公司·152400）

芪蜂降糖膠囊是在多年臨床基礎(chǔ)上開發(fā)而成的現(xiàn)代中藥制劑，處方由黃芪、蜂膠、山茱萸、山藥等十余味中藥組成，其中蜂膠為主要藥味，白楊素和高良姜素等黃酮類成分是蜂膠的主要活性成分[1]，也是蜂膠質(zhì)量控制的主要指標(biāo)之一[2][3]。收載于《中華人民共和國藥典》蜂膠含量測(cè)定項(xiàng)下均以白楊素和高良姜素含量為指標(biāo)，因此以該成分作為含量測(cè)定指標(biāo)比較合理[4]，其研究?jī)?nèi)容報(bào)告如下：

1 白楊素、高良姜素含量測(cè)定方法

1.1 儀器與藥品

島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；KQ-300DB型超聲儀；十萬分之一電子天平；恒溫水浴。甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為超純水；白楊素、高良姜素對(duì)照品（含量測(cè)定用）購自中國藥品生物制品檢定所；藥品：由黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。

1.2 色譜條件

DiamonsilC18（4.6mm×250mm5μm）色譜柱及同性能色譜柱；以甲醇—0.15%磷酸溶液（64：36）為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)268nm；柱溫：25OC；理論板數(shù)按白楊素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。

1.3 測(cè)定方法

對(duì)照品溶液的制備 取白楊素對(duì)照品、高良姜素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含白楊素30μg、高良姜素20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量并用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取上述兩種對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2 白楊素、高良姜素含量測(cè)定方法學(xué)研究

方法學(xué)研究參照2010年版《中華人民共和國藥典》一部附錄ⅩⅧA中藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則要求和文獻(xiàn)資料設(shè)計(jì)，主要進(jìn)行了方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、范圍等研究?jī)?nèi)容。

2.1 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

取內(nèi)容物混勻，約0.3g，精密稱定，按指標(biāo)性成分含量測(cè)定方下制備供試品溶液，每2h進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，經(jīng)計(jì)算白楊素RSD=1.06%、高良姜素RSD=1.45%，表明被測(cè)溶液中白楊素、高良姜素兩種成分在室溫下12小時(shí)內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取已知含量的同批樣品6份，精密稱定，分別精密加入白楊素、高良姜素對(duì)照品適量，按供試品制備方法處理，測(cè)定白楊素、高良姜素含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、2。

表1 白楊素加樣回收率結(jié)果

表2 高良姜素加樣回收率結(jié)果

由表可見，白楊素加樣回收率為102.91%，RSD=1.83%，高良姜素加樣回收率為103.39%，RSD=1.38%，表明該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.3 精密度試驗(yàn)

2.3.1 重復(fù)性 精密吸取同批次供試品溶液10μl，按上述色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，經(jīng)計(jì)算白楊素RSD=0.96%，高良姜RSD=1.95%，表明精密度良好。

2.3.2 中間精密度 精密吸取同批次供試品溶液10μl，按上述色譜條件測(cè)定，用同一實(shí)驗(yàn)室Agelient1100型高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器）連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，經(jīng)計(jì)算白楊素RSD=1.45%，高良姜素RSD=1.78%，表明精密度良好。

2.4 專屬性試驗(yàn)

產(chǎn)品配方中去掉蜂膠按照產(chǎn)品的制備工藝制成不含蜂膠模擬樣品，以下操作同供試品溶液制備方法得蜂膠空白對(duì)照液。按照指示性成分含量測(cè)定方法，分別吸取蜂膠空白對(duì)照液、供試品溶液及白楊素、高良姜素對(duì)照品溶液各進(jìn)樣10μl，測(cè)定結(jié)果表明，空白對(duì)照液色譜圖在白楊素、高良姜素出峰位置上未見有吸收峰，說明空白無干擾。

2.5 線性

精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時(shí)以上的白楊素對(duì)照品8.35mg，高良姜素對(duì)照品5.90mg，置100ml容量瓶中，加入適量的甲醇使其溶解，加甲醇稀釋至刻度，作為白楊素對(duì)照品高良姜素對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1、2、4、6、8ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，再吸取上述各對(duì)照品溶液10μl分別注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。白楊素 線性回歸方程： Y=107325X+20629，r=0.9999高良姜素 線性回歸方程：Y=57364X-870，r=0.9996

2.6 范圍

通過精密度、準(zhǔn)確度以及線性關(guān)系測(cè)定，結(jié)果表明：線性回歸白楊素r=0.9999，高良姜素r=0.9996，白楊素在0.0835－0.6680μg之間，高良姜素在0.1180－0.5900μg之間均呈良好的線性關(guān)系，故確定兩種成分含量按此測(cè)定方法白楊素在0.0835－0.6680μg之間，高良姜素在0.1180－0.5900μg之間范圍內(nèi)測(cè)定數(shù)據(jù)可靠。

2.7 成分指標(biāo)值的確定：

三批中試產(chǎn)品指標(biāo)性成分白楊素、高良姜素含量測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 三批中試樣品含量測(cè)定結(jié)果

指標(biāo)性成分限量值的確定：白楊素和高良姜素指標(biāo)值的確定是在三批中試樣品實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上適當(dāng)下浮而得出的。根據(jù)測(cè)定數(shù)據(jù)規(guī)定本品每100g含白楊素不得少于0.53g,高良姜素不得少于0.50g。

3 討論

人類對(duì)蜂膠的認(rèn)識(shí)和應(yīng)用有著十分悠久的歷史，蜂膠的應(yīng)用研究在我國開始于20世紀(jì)七十年代。蜂膠作為既食又藥物品，至今已經(jīng)有百余種各種劑型的產(chǎn)品上市，功效涵蓋增強(qiáng)免疫力、輔助降血糖、輔助降血脂、抗疲勞、對(duì)胃粘膜輔助保護(hù)作用、抗突變、抗氧化等多種功能。收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部，并明確指出蜂膠不能直接服用，需要經(jīng)過炮制制成酒制蜂膠才可以服用，本產(chǎn)品以酒炙蜂膠入藥。

本產(chǎn)品在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中考慮，考慮由于目前國內(nèi)外蜂膠市場(chǎng)混亂，重點(diǎn)進(jìn)行了處方中蜂膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高試驗(yàn)研究，采用高效液相色譜法建立了產(chǎn)品中指標(biāo)性成分白楊素、高良姜素含量測(cè)定方法，方法簡(jiǎn)便可行，即可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，又可以避免原料蜂膠的摻假和劣質(zhì)蜂膠使用，因此對(duì)提高和控制產(chǎn)品質(zhì)量具有一定的意義。

[1] 曹煒，符軍放，索志榮,等.蜂膠中白楊素和高良姜素的HPLC分析[J].藥物分析雜志，2007，27（4）：522-524.

[2] 王歡，胡紅剛，黃小鍵.HPLC法測(cè)定蜂膠片中兩種有效成分的含量[J].江西中醫(yī)藥，2008，139（12）：79.

[3] 宋愛清，劉杰.HPLC法測(cè)定蜂膠中黃酮類化合物的含量[J].中國養(yǎng)蜂，2001，52（3）：10-11.

[4] 國家藥典委員會(huì)編，中國醫(yī)藥科技出版社出版，《中華人民共和國藥典》2010年版一部