吳淑馨 孫宏峰 龍泓竹 張 力 楊曉暉

(1北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院內(nèi)分泌科，北京，100078;2國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)價(jià)中心，北京，100045)

糖尿病患者常有不同程度的脂質(zhì)代謝紊亂，血脂異常可導(dǎo)致糖尿病多種并發(fā)癥的發(fā)生，最終威脅到糖尿病患者的生命。在前期研究中發(fā)現(xiàn)[1]，益氣養(yǎng)陰散結(jié)方對(duì)降低血糖，糾正脂代謝紊亂方面有一定作用，對(duì)糖尿病心臟病有一定的早期保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察益氣養(yǎng)陰散結(jié)方對(duì)自發(fā)糖尿病小鼠糖脂代謝的影響，以期證實(shí)其對(duì)糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防作用，為臨床應(yīng)用該方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性SPF級(jí)C57BL/6J小鼠，40只，10～12周齡，體重20～25 g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。雄性SPF級(jí)KKAy小鼠，80只，11～12周齡，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。KKAy小鼠測(cè)量空腹血糖(FBG)，F(xiàn)BG≥13.9 mmol/L者確定為糖尿病小鼠，納入實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間，自由飲水C57BL/6J小鼠給予小鼠生長(zhǎng)維持顆粒飼料，KKAy小鼠給予高脂飼料(含10%豬油、10%蛋黃粉和10%葡萄糖，為KKAy小鼠專用高能量飼料)，飼料均由醫(yī)科院動(dòng)物所提供，以上動(dòng)物均飼養(yǎng)于東直門醫(yī)院動(dòng)物中心。

1.2 藥品 實(shí)驗(yàn)所用益氣養(yǎng)陰散結(jié)中藥復(fù)方由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院提供。

1.3 分組及給藥 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分組，將KKAy小鼠隨機(jī)分為模型組和中藥組，C57BL/6J小鼠則為正常對(duì)照組，分組后給藥，根據(jù)人和小鼠間的體表面積折算系數(shù)計(jì)算給藥量，經(jīng)計(jì)算，小鼠給藥量為20.2 g/(kg·d)，即中藥組予20.2 g/(kg·d)灌服益氣養(yǎng)陰散結(jié)中藥，模型組及正常組予20.2 g/(kg·d)灌服蒸餾水，給藥共12周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般情況 給藥共12周，平時(shí)記錄各組小鼠的活動(dòng)狀態(tài)、毛色、精神狀態(tài)、飲食、二便情況，定期檢測(cè)各組小鼠的體重、血糖情況。

1.4.2 血糖及血脂的測(cè)定 在實(shí)驗(yàn)的第4、8、12周末，水合氯醛麻醉后，腹主動(dòng)脈采血，分離血清，使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血糖(GLU)及三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)等指標(biāo)。

1.4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(±s)表示，多組樣本間差異的比較用多因素方差分析的方法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 在喂養(yǎng)期間，C57BL/6J小鼠活躍，對(duì)抓取抵抗明顯，正常進(jìn)食飲水，毛色亮澤，KKAy小鼠較C57BL/6J小鼠肥胖，體重增長(zhǎng)迅速，活動(dòng)遲緩、懶動(dòng)、反應(yīng)遲鈍，毛色干枯無(wú)光澤。

2.2 各組大鼠血糖測(cè)定情況 如表1所示，與正常組比較，從第4周開(kāi)始，模型組及中藥組小鼠空腹血糖就已經(jīng)明顯升高，在實(shí)驗(yàn)的第4、8、12周差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，在第12周時(shí)，中藥組與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 各組小鼠FBG的比較(mmol/L)

表2 各組小鼠TC的比較(mmol/L)

2.3 各組大鼠TG、TC測(cè)定情況 如表2和表3所示，與正常組比較，從第4周開(kāi)始，模型組及中藥組小鼠TG及TC水平明顯升高，在第4、8、12周均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，在第8周時(shí)，中藥組與模型組相比，TC有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在第8、12周時(shí)，中藥組與模型組相比，TG均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 各組小鼠TG的比較(mmol/L)

2.4 各組大鼠LDL、HDL測(cè)定情況 如表4和表5所示，與正常組比較，從第4周開(kāi)始，模型組及中藥組小鼠LDL及TC水平明顯升高，在第4、8、12周均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，在第8周時(shí)，中藥組與模型組相比，LDL有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在第8周時(shí)，中藥，HDL(P＜0.05)。

表4 各組小鼠LDL的比較(mmol/L)

表5 各組小鼠HDL的比較(mmol/L)

3 討論

3.1 動(dòng)物模型特點(diǎn) KKAy小鼠系能自發(fā)出現(xiàn)肥胖、高血糖及高胰島素血癥的一種動(dòng)物模型，表現(xiàn)為天生的葡萄糖耐受不良和胰島素抵抗，隨年齡增長(zhǎng)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楦哐呛吞悄虿?。其編碼皮毛顏色信息的Agout(ia)基因位于小鼠2號(hào)染色體上，該基因?yàn)閍/a純合子時(shí)，小鼠皮毛表達(dá)為正常的黑色，將黃色肥胖基因(A7)轉(zhuǎn)至KKAy小鼠而得到的KKAy小鼠變異為Ay/a雜合子時(shí)，不僅從外表上有了改變，小鼠皮毛呈現(xiàn)了黃色，同時(shí)具有了肥胖、高血糖、脂質(zhì)代謝紊亂等代謝異常綜合征的特征[2]。KKAy糖尿病小鼠與人類2型糖尿病的發(fā)病過(guò)程極其相似，其發(fā)病的基礎(chǔ)都為遺傳因素和環(huán)境因素的共同參與，這種轉(zhuǎn)基因技術(shù)與自發(fā)性動(dòng)物模型結(jié)合制備的動(dòng)物模型，不僅可應(yīng)用于脂代謝紊亂、胰島素抵抗的研究，是目前研究2型糖尿病及其并發(fā)癥較為理想的自發(fā)動(dòng)物模型。Bray[3]早在1971年就曾報(bào)道KKAy小鼠在8周時(shí)發(fā)生肥胖，16～20周時(shí)體重、血糖等指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定，大約1年左右血糖開(kāi)始降低，亦有實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道KKAy小鼠在5周齡時(shí)血糖、胰島素水平以及HbA1c水平就逐步升高，并且肝脂肪化和脂肪組織增多[4]，在10周齡時(shí)有明顯的糖脂代謝紊亂[5]，我們選擇11～12周齡的 KKAy小鼠，并且在實(shí)驗(yàn)的第4、8、12周分別觀察其血脂變化，以期動(dòng)態(tài)觀察KKAy小鼠的血糖血脂變化，及中藥干預(yù)后的影響。

3.2 糖脂代謝紊亂與糖尿病血管并發(fā)癥密切相關(guān)

糖尿病的發(fā)病率日益升高，且多伴有多種慢性并發(fā)癥，因此對(duì)糖尿病并發(fā)癥的防治尤為重要。糖脂代謝紊亂是各種并發(fā)癥的發(fā)病基礎(chǔ)，高血糖、高血脂、高血壓、肥胖等構(gòu)成了糖尿病慢性并發(fā)癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[6]。2型糖尿病患者易并發(fā)血脂紊亂，其在糖尿病血管并發(fā)癥尤其是心血管事件的發(fā)生上起重要作用，三酰甘油和游離脂肪酸等在心肌細(xì)胞內(nèi)聚集增多，對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)酶系統(tǒng)的活性具有抑制作用[7]，而小而密的LDL與引起心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[8]，同時(shí)血脂紊亂亦可使血液黏度增高，可誘發(fā)微血管病變;所以脂代謝異常是血管并發(fā)癥的重要因素[9]。美國(guó)國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃成人治療方案第三次指南(NECP－ATPIII)將糖尿病視為冠心病的高危癥，還指出升高的LDL－C水平是冠心病的主要危險(xiǎn)因子，應(yīng)將糖尿病患者的血漿LDL－C水平嚴(yán)格控制在100 mg/dl(2.6 mmol/L)以下[10]。

3.3 益氣養(yǎng)陰通絡(luò)散結(jié)方對(duì)KKAy小鼠糖脂代謝的影響 許多流行病學(xué)調(diào)查顯示糖尿病患者的脂質(zhì)代謝異常通常表現(xiàn)為TG水平升高、LDL－C水平和HDLC水平的降低[11]。本實(shí)驗(yàn)中的模型組及中藥組與正常組相比，在第4、8、12周時(shí)都表現(xiàn)出了明顯的FBG、TG、TC、LDL－C升高、HDL－C降低，與以往的實(shí)驗(yàn)報(bào)道一致[12－14]。中藥組的脂代謝紊亂明顯減輕，與模型組相比，降低了血TG、TC和LDL－C，升高了血HDLC，且在實(shí)驗(yàn)的第8周更加明顯。

益氣養(yǎng)陰散結(jié)方由黃芪等藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰散結(jié)之功效，全方補(bǔ)而不滯，祛瘀不傷正。臨床運(yùn)用該方治療糖尿病微血管、神經(jīng)并發(fā)癥取得了較為滿意的效果，其中治療早期糖尿病心臟病變34例，總有效率88.2%，優(yōu)于對(duì)照組的73.3%(P ＜0.05)[15]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，益氣養(yǎng)陰散結(jié)方可顯著改善自發(fā)糖尿病小鼠的糖脂代謝紊亂，具有明顯的降糖和調(diào)脂功效，這可能對(duì)控制糖尿病的進(jìn)程，防治早期血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。該方具體作用的環(huán)節(jié)和靶點(diǎn)，有待于進(jìn)一步研究，下一步可進(jìn)一步研究益氣養(yǎng)陰散結(jié)方在調(diào)節(jié)糖脂代謝的作用靶點(diǎn)和糖尿病血管并發(fā)癥防治中的作用。

[1]楊曉暉，吳淑馨，張力，等.糖尿病大鼠心肌組織AngⅡ變化及益氣養(yǎng)陰散結(jié)中藥復(fù)方對(duì)其影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥物警戒，2013，10(4):196－199.

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