魏 梅 梁志毅 鄧淙友 張德雄

(廣東一方制藥有限公司，佛山，528244)

生脈散一詞最先出自金代醫(yī)家張元素之《醫(yī)學啟源》，首載其方名，至李東垣在其《內(nèi)外傷辨惑論》指出:“圣人立法，夏月宜補者，補天真元氣……故以人參之甘補氣，麥門冬苦寒瀉熱補水之源，五味子之酸清肅燥金，名曰生脈散?！保晟屏嗽摲浇M成和功效[1－5]。生脈散以水為溶媒，采用湯劑形式應用于臨床已有700多年的歷史，療效顯著，為“益心復脈”的優(yōu)秀古方之一，但湯劑煎煮麻煩、保存不便等缺點在很大程度上制約了中醫(yī)藥的應用和推廣。中藥配方顆粒是對傳統(tǒng)湯劑的延伸和發(fā)展，堅持了中醫(yī)傳統(tǒng)的整體觀念和辨證施治原則。既保持了臨床配方中君臣佐使，隨證加減的特色，又兼有配方快速、服用方便、直接沖服、免除煎煮、體積小、便于攜帶運輸和儲藏，質(zhì)量可靠、清潔衛(wèi)生等諸多優(yōu)點。配方顆粒適合現(xiàn)代人的生活方式，符合社會發(fā)展的總體趨勢及市場需求。

但各家針對中藥配方顆粒單煎與傳統(tǒng)合煎的爭論尚未休止，但隨著時間的推移，兩種觀點開始也有所共識。首先，合煎并非中藥制劑的唯一工藝，幾百種中藥也不可能只存在唯一的提取方法;其次，合煎過程較為復雜，某種化學成分在其間可能出現(xiàn)或消失，甚至產(chǎn)生新的化學成分。分煎工藝與合煎工藝的合理性顯然要結合處方具體分析，針對臨床療效的影響進行優(yōu)勝劣汰[6]。因此這種成分上的變化是研究配方顆粒和傳統(tǒng)合煎劑的前提工作。本實驗通過對傳統(tǒng)合煎液和我司配方顆粒的比較，期望總結出該方“分煎”與“合煎”的化學成分的變化，為配方顆粒能否替代傳統(tǒng)水煎液提供一定的理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(Alliance 2695四元梯度輸液泵及自動進樣器，996二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站);百萬分之一電子天平(型號XP 26、梅特勒－托利多儀器有限公司)、萬分之一電子天平(型號BS110S、北京賽多利斯天平有限公司)、千分之一電子天平(型號BS200S－WEI、北京賽多利斯天平有限公司)、超聲波清洗機(型號KQ－500DE、昆山市超聲儀器有限公司)，五味子醇甲(批號:111857－200507)、五味子酯甲(批號:111529－200503)、五味子甲素(批號:0764－200107)、五味子乙素(批號:765－200104)、人參皂苷Re(批號:110754－200822)對照品，配方顆粒及藥材(廣東一方制藥有限公司)。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

表1 藥材與配方顆粒批號

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[7－12]色譜柱:kromasil 100－5C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:以水為流動相A，乙腈為流動相B，按下表中規(guī)定進行梯度洗脫。流速:1.0 mL/min，檢測波長:203 nm，柱溫:30 ℃，進樣量:2.0 μL。

表2 流動相及洗脫程序

2.2 對照品溶液的制備 取五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇溶解制成對照品溶液。

2.3 標準湯劑制備 藥材剪碎或用銅盅敲碎，配伍按人參:麥冬:五味子=1∶3∶1.5稱取藥材，即人參10 g、麥冬30 g、五味子15 g，加10倍水煎煮1.5 h，制得樣品標準湯劑(水煎液)，定容至500 mL備用。

2.4 供試品制備 精密量取標準湯劑50 mL，通過D101大孔樹脂(大孔樹脂15 g，直徑1.5 cm)，先用純化水200 mL洗脫，再用95%乙醇200 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，再用甲醇溶解，定容至5 mL，微孔濾膜過濾，即得。生脈散配方顆粒與單味配方顆粒沸水溶解后，參照標準湯劑供試品制備，即得。

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗 取同一份生脈散配方顆粒供試品溶液，按“2.1”項下條件連續(xù)進樣6次，測得其各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于3.0%，表明精密度良好。

2.5.2 重復性試驗 取同一批配方顆粒，按“2.3;2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下條件分別進樣，測得其各共有峰相對保留時間、相對峰面積的RSD均小于3.0%，表明重復性良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，按“2.1”項下條件分別在 0、2、4、6、8、12、24 h 進樣測定，其共有峰相對保留時間、相對峰面積的RSD均小于3.0%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 結果

3.1 共有峰的確定 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版》比較配方顆粒的相關參數(shù)，通過多批樣品的測定，選擇穩(wěn)定性好，吸收強，特征明顯的色譜峰為共有峰，共標定9個峰，選其中保留時間約為37 min的2號峰為參照峰S。見圖1。從各自的圖譜中可以直觀地看出，生脈散配方顆粒的圖譜共有峰數(shù)目沒有明顯差異，峰面積差異也較小。

圖1 生脈散配方顆粒特征圖譜

3.2 主要色譜峰的鑒定與歸屬 分別精密稱取人參皂苷Re、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素對照品適量，加甲醇溶解，在上述色譜條件下測定，并與生脈散特征圖譜中相應的色譜峰進行比較，發(fā)現(xiàn)生脈散湯劑及其配方顆粒圖譜中1，2，7，8，9號峰的保留時間與人參皂苷Re，五味子醇甲，五味子酯甲，五味子甲素，五味子乙素吻合。故樣品特征圖譜中1，2，7，8，9號特征峰分別鑒定為人參皂苷Re、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素。

分別精密稱取不同批次的人參、麥冬、五味子配方顆粒，共制成11批生脈散湯劑，按2.1項下的色譜條件進行測定，見圖2。以五味子醇甲為內(nèi)參峰，計算各特征峰的相對保留時間和RSD，得到各共有峰的相對保留時間RSD均小于2.3%，見表2。特征圖譜中以2號峰為參照峰，計算各峰的相對峰面積，結果見表3。通過相似度評價軟件分析，各批生脈散的相似度均大于0.95，說明該制劑工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品均一性好，見表4[13－14]。

圖2 十一批生脈散配方顆粒樣品圖譜疊加圖

表3 各批生脈散共有峰的相對保留時間表

表4 各批生脈散共有峰的相對峰面積

3.3 傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒成分比較 分別精密稱取由同批藥材制成的生脈散湯劑、復方合煎顆粒、單方分煎顆粒及我司留樣配方顆粒各2批，按2.1項下的色譜條件進行測定，見圖3。以五味子醇甲為內(nèi)參峰，計算各特征峰的相對保留時間和RSD，得到各共有峰的相對保留時間RSD均小于2.5%，見表5，通過相似度評價軟件分析，各批生脈散的相似度均大于0.95，說明傳統(tǒng)湯劑、復方顆粒及配方顆粒的質(zhì)量相似，見表6。

表5 各批生脈散的相似度分析表

圖3 生脈散傳統(tǒng)湯劑、復方顆粒及配方顆粒圖譜

表6 生脈散傳統(tǒng)湯劑、分煎、合煎及顆粒劑的相對保留時間RSD

4 討論

由于分析對象是復方湯劑，化學成分眾多，各成分間極性差異很大，采用等度洗脫難以達到有效分離，所以采用梯度洗脫。經(jīng)過多次摸索，以乙腈－水體系進行洗脫在90 min內(nèi)可使全部色譜峰流出，且分離較好。

采用二極管陣列檢測器進行全波長掃描，比較不同波長條件下生脈散配方顆粒劑和標準湯劑的指紋圖譜，結果在203 nm波長下圖譜峰形較好。

表7 生脈散傳統(tǒng)湯劑、分煎、合煎及顆粒劑的相似度

中藥配方顆粒是近10多年來對傳統(tǒng)中藥湯劑應用形式的突破。它是以傳統(tǒng)中藥飲片為原料，采用傳統(tǒng)湯劑的提取溶媒(水)，經(jīng)現(xiàn)代技術提取、真空低溫濃縮、瞬間干燥、干法制粒等多道工序精制而成的產(chǎn)品[15]。在中醫(yī)藥理論的指導下，其性味、歸經(jīng)、功效與原湯劑保持基本一致。實驗中傳統(tǒng)湯劑及配方顆粒比較所用藥材均為同一批次藥材，以排除由于藥材不均一而引起色譜圖的差異。

根據(jù)我司生產(chǎn)的11批生脈散配方顆粒的HPLC指紋圖譜比較結果，發(fā)現(xiàn)各批樣品的相似度較高，均大于0.9，且具有相同組分說明我公司生產(chǎn)的配方顆粒質(zhì)量穩(wěn)定，可較好的保證產(chǎn)品的均一性。以生脈散配方顆粒湯劑為基準，與傳統(tǒng)湯劑、分煎、合煎湯劑的比較，可知配方顆粒制劑與傳統(tǒng)湯劑、分煎、合煎制劑中大部分成分的含量沒有明顯的變化，其共有峰基本一致，具有較高的相似性，表明配方顆粒劑從化學成分角度來說代替標準湯劑是可行的。本實驗對分析中藥方劑的應用具有積極意義，但想要確定生脈散配方顆粒是否能完全替代傳統(tǒng)湯劑，還需結合藥理藥效和臨床效果來判斷。

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