牛艷東， 李錫泉， 吳小麗

(湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長沙 410004)

洞庭湖區(qū)鎮(zhèn)海林蛙核型特征研究

牛艷東， 李錫泉， 吳小麗

(湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長沙 410004)

對(duì)湖南東洞庭湖國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)的鎮(zhèn)海林蛙進(jìn)行核型分析，結(jié)果表明：洞庭湖區(qū)鎮(zhèn)海林蛙的染色體數(shù)為2n=26，配型為2n=18m+6sm+2st，與其他研究結(jié)果相比其在染色體著絲點(diǎn)上面有差異。

鎮(zhèn)海林蛙； 染色體； 洞庭湖

鎮(zhèn)海林蛙(Ranazhenhaiensis)原定名為日本林蛙(Ranajaponica)，葉昌媛等[1]通過進(jìn)一步研究，將日本林蛙另立新種為鎮(zhèn)海林蛙和峨眉林蛙。鎮(zhèn)海林蛙在我國的東南部廣泛分布，其中在河南、安徽、江蘇、浙江、江西、湖南、福建、廣東、廣西、貴州等省均有分布[ 2-8]。鎮(zhèn)海林蛙多分布于海拔5～200 m左右的丘陵山區(qū)，在湖區(qū)分布的報(bào)道較少。我們于2011年在湖南岳陽東洞庭湖國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)進(jìn)行動(dòng)物資源野外考察時(shí)，發(fā)現(xiàn)有鎮(zhèn)海林蛙，采集成年活體標(biāo)本帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核型分析，以期為其細(xì)胞學(xué)研究提供新資料。

1 材料與方法

鎮(zhèn)海林蛙來自岳陽市東洞庭湖國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，其中雌體5只、雄體7只。將采集的標(biāo)本按照吳政安[9]的蒸汽固定法處理，首先將0.3～1.0 mL的0.005%的秋水仙素注射于蛙體皮下組織，15～20 h后，用乙醚麻醉，分別取出大腿骨、脛腓骨和上膊骨，利用0.046 mol/L KCl低滲處理(18～20 ℃)20～30 min，然后將滴有細(xì)胞的載玻片水平放置于培養(yǎng)皿中，進(jìn)行100～120 min的蒸汽固定，然后去掉混合固定液，換上無水乙醇，蒸汽固定10～20 min，用Giemsa染色，在相差顯微鏡下觀察細(xì)胞中期分裂相的染色體，選擇染色體分散好，著絲點(diǎn)、次縊痕等清楚的中期分裂相進(jìn)行拍照和分析。染色體型分析按照Levan等[10]提出的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行形態(tài)分類：臂比指數(shù)1.0～1.7為中部著絲粒染色體(m)，1.7～3.0為亞中著絲粒染色體(sm)，3.0～7.0為亞端著絲粒染色體(st)，指數(shù)>7.0為端著絲粒染色體(t)；相對(duì)長度大于9%的為大型染色體組，相對(duì)長度小于7%的為小型染色體組[11]。

2 結(jié)果與分析

洞庭湖區(qū)鎮(zhèn)海林蛙的體細(xì)胞染色體見圖1，數(shù)目為2n=26，NF=52，其中1～5號(hào)為大型染色體，6～13號(hào)為小型染色體；9對(duì)m染色體(No.1、3、4、5、6、7、8、11、13)、3對(duì)sm染色體(No.2、10、12)和1對(duì)st染色體(No.9)，可表示為2n=18 m+6 sm+2 st，未見異型染色體，核型參數(shù)詳見表1。

圖1 鎮(zhèn)海林蛙核型圖Fig.1 Karotype of R.zhenhaiensis

表1 鎮(zhèn)海林蛙核型參數(shù)Tab1 KarotypeparametersofRzhenhaiensis編號(hào)相對(duì)長度臂比指數(shù)染色體類型11287±035107±014m21187±024137±007sm31067±023198±012m41034±031141±004m5947±021130±010m6674±031145±012m7597±024184±021m8589±042120±003m9574±028354±031st10545±036201±004sm11498±022123±007m12476±024204±015sm13441±025106±007m

3 結(jié)論與討論

林蛙是一類非繁殖期主要生活于山林的棕色蛙類，依據(jù)背側(cè)褶的形態(tài)分為南方種組和北方種組，鎮(zhèn)海林蛙是南方林蛙，是我國原定名為日本林蛙指名亞種的物種，應(yīng)是一個(gè)新種[1]。根據(jù)核型的情況，我國林蛙分為兩大類：一類為2n=24，另一類是2n=26。鎮(zhèn)海林蛙2n=26，表示為2n=18m+6sm+2st，與錢曉薇[12]，趙爾宓[6]報(bào)道的日本林蛙指名亞種核型2n=20m+6sm，2n=16m+8sm+2st有些差異。物種在不同地域經(jīng)過漫長的選擇與競(jìng)爭(zhēng)，為適應(yīng)本地的生態(tài)環(huán)境，可能在長期的進(jìn)化中發(fā)生變異，這不僅表現(xiàn)于外在形體上的變化，也表現(xiàn)在基因的變化上。鎮(zhèn)海林蛙主要生活在繁茂的林木下、草叢中、山溪邊陰涼潮濕處[13-15]，對(duì)溪流水源的干凈度要求很高，我們?cè)诙赐ズ竦匕l(fā)現(xiàn)有鎮(zhèn)海林蛙，對(duì)研究洞庭湖濕地生態(tài)環(huán)境變化及物種生境選擇提供了新的資料。

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(文字編校：張 珉)

KaryotypefeaturesofRanazhenhaiensisintheDongtingLake

NIU Yandong， LI Xiquan， WU Xiaoli

(Hunan Academy of Forestry， Changsha 410004， China)

Karyotype features ofRanazhenhaiensisin the Dongting Lake of Hunan Province are studied.The results show that，theR.zhenhaiensishas 26 chromosomes(2n=26，2n=18 m+6 sm+2 st).It is different from other researches in chromosomes centromere.

Ranazhenhaiensis； chromosome； Dongting Lake

2014-09-16

湖南省科技廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013FJ6048，2013WK3040，2012WK4013)。

牛艷東(1983-)，男，河南省衛(wèi)輝市人，助理研究員，主要從事野生動(dòng)植物保護(hù)、自然保護(hù)區(qū)管理等方面的研究。

Q 953

A

1003 — 5710(2014)06 — 0048 — 02

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2014. 06. 012