王益華+俞俊萍+來(lái)麗麗

[摘要] 目的 探討孟魯司特鈉片降解產(chǎn)物的測(cè)定方法，以有效控制藥品的質(zhì)量。方法 采用用高效液相色譜法測(cè)定孟魯司特鈉片降解產(chǎn)物，Agilent ZORBAX XDB C8色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B梯度洗脫，流速1.2 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，采用雜質(zhì)對(duì)照品法測(cè)定降解產(chǎn)物。結(jié)果 孟魯司特鈉濃度在1.035 648～6.213 888 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，主藥與降解產(chǎn)物能達(dá)到較好的基線分離。結(jié)論 該方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，可用于藥品控制。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；孟魯司特鈉；降解產(chǎn)物

[中圖分類號(hào)] R9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）03（b）-0023-02

[Abstract] Objective To investigate a method for the determination of montelukast sodium tablets degradation products， in order to effectively control the quality of drugs. Methods HPLC for determination of montelukast sodium tablets degradation product， Agilent ZORBAX XDB C8 column （4.6 × 250mm， 5 μ m）， phosphate buffer as mobile phase A， acetonitrile as mobile phase B gradient elution， flow rate 1.2ml/min， the detection wavelength was 254nm， the impurity determination of degradation products in the control sample method. Results Montelukast sodium concentration in the range of 1.035648-6.213888 μg/ml had a good linear relationship with peak area， the main drug and degradation products can achieve good baseline separation. Conclusion This method is of high sensitivity， strong specificity， accurate and reliable， and can be used for drug control.

[Key words] HPLC； Montelukast sodium； Degradation products

孟魯司特鈉化學(xué)名為[R-（E）]-1-[[[1-[3-[2-（7-氯-2-喹啉基）乙烯基]苯基]-3-[2-（1-羥基-1-甲基乙基）苯基]丙基]硫代]甲基]環(huán)丙基乙酸鈉，為選擇性白三烯D4受體拮抗劑[1]，可與氣道中的白三烯選擇性地結(jié)合，阻斷過(guò)敏介質(zhì)的作用，改善呼吸道炎癥[2]，使氣道暢通，是一種高效、低毒、安全性好的平喘抗炎和抗過(guò)敏藥[3]。該實(shí)驗(yàn)于2012年9月—2013年3月完成，采用高效液相色譜法測(cè)定孟魯司特鈉片的降解產(chǎn)物，以期為質(zhì)量控制提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（型號(hào)：Waters2695-2489，廠家：美國(guó)Waters公司）、紫外檢測(cè)器（型號(hào)：TU-1900，廠家：北京普析通用公司）、孟魯司特鈉對(duì)照品（批號(hào)F089F11015）、孟魯司特鈉峰鑒別用對(duì)照品（批號(hào)20120216）、雜質(zhì)A對(duì)照品（批號(hào)F0891MPE333R009）、雜質(zhì)C對(duì)照品（批號(hào)F0891MPB259R055）、雜質(zhì)D對(duì)照品（批號(hào)F0891MPD277R099）均由企業(yè)提供，孟魯司特鈉片（批號(hào)：120312），乙腈和甲醇均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱Agilent ZORBAX XDB C8色譜柱（4.6 mm×250 mm，

5 μm），流動(dòng)相磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫見(jiàn)表1，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；流速1.2 mL/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 系統(tǒng)適用性

分離度溶液：稱取孟魯司特鈉峰鑒別用對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置10 mL白色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，混勻。

雜質(zhì)A儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取約10 mg的雜質(zhì)A對(duì)照品，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻。

雜質(zhì)D儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取約10 mg 的雜質(zhì)D對(duì)照品，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。

孟魯司特鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取約10 mg孟魯司特鈉對(duì)照品，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度。混勻。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取2.0 mL孟魯司特鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、10.0mL的雜質(zhì)A儲(chǔ)備液、 5.0 mL的雜質(zhì)D儲(chǔ)備液，置100 mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度。

2.3 線性關(guān)系考察

線性儲(chǔ)備溶液-1[4-6]：分別吸取10.0 mL孟魯司特鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、50.0 mL的雜質(zhì)A 儲(chǔ)備溶液和25.0 mL的雜質(zhì)D儲(chǔ)備溶液，至100 mL的容量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度，混勻。

線性儲(chǔ)備溶液-2：分別吸取5.0 mL的雜質(zhì)A儲(chǔ)備溶液、5.0 mL的雜質(zhì)D儲(chǔ)備溶液 和5.0 mL的孟魯司特鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，至20 mL的量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。

按照下表用稀釋劑進(jìn)一步稀釋線性儲(chǔ)備溶液（1和2），得到線性測(cè)試溶液，濃度為QL至相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液的300%，每份線性測(cè)試溶液各進(jìn)樣1次。見(jiàn)表2。

2.4 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積。

2.5 方法精密度

取不少于20片樣品，稱重，磨粉，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于25 mg的孟魯司特的粉末，置25 mL的量瓶中，加入20 mL的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。按照測(cè)試方法制備6份孟魯司特鈉片樣品溶液。

2.6 準(zhǔn)確度

使用線性下的線性貯備液（1和2）作為準(zhǔn)確度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確稱取約500 mg的孟魯司特鈉片（10 mg）的粉末（相當(dāng)于25 mg孟魯司特），至25 mL的容量瓶中，按照表3精密移取線性儲(chǔ)備溶液，加入適量的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。分別對(duì)9份準(zhǔn)確度測(cè)試樣品溶液各進(jìn)樣1次。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在室溫下保存分離度溶液（SS溶液）、標(biāo)準(zhǔn)溶液（Std）、樣品溶液，在所有溶液制備后的0、8、24、48 h分別對(duì)SS溶液、對(duì)照品溶液、樣品溶液進(jìn)行進(jìn)樣。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性

按上述色譜條件進(jìn)樣，得到，分離度溶液中，雜質(zhì)B與孟魯司特的分離度≥2.5，雜質(zhì)C與孟魯司特的分離度≥1.2，符合要求。標(biāo)準(zhǔn)溶液中，理論板數(shù)按孟魯司特鈉峰計(jì)≥4 000，拖尾因子（T）≤2.0，符合要求。

3.2 線性關(guān)系考察

以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）作線性回歸。線性方程分別為：Y孟魯司特鈉=22720X-771.11（r=0.9999），Y雜質(zhì)A=23468X-1993.2（r=0.9999），Y雜質(zhì)D=27121X-1074.8（r=0.9999）。線性范圍分別為孟魯司特鈉 1.014935-6.089610 μg/ mL，雜質(zhì)A 1.028-30.84 μg/ mL，雜質(zhì)D 1.027-15.405 μg/ mL。

3.3 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，孟魯司特鈉、雜質(zhì)A、雜質(zhì)D的RSD分別為0.8%、0.8%、1.3%。

按照下表用稀釋劑進(jìn)一步稀釋線性儲(chǔ)備溶液（1和2），得到線性測(cè)試溶液，濃度為QL至相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液的300%，每份線性測(cè)試溶液各進(jìn)樣1次。見(jiàn)表2。

2.4 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積。

2.5 方法精密度

取不少于20片樣品，稱重，磨粉，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于25 mg的孟魯司特的粉末，置25 mL的量瓶中，加入20 mL的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。按照測(cè)試方法制備6份孟魯司特鈉片樣品溶液。

2.6 準(zhǔn)確度

使用線性下的線性貯備液（1和2）作為準(zhǔn)確度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確稱取約500 mg的孟魯司特鈉片（10 mg）的粉末（相當(dāng)于25 mg孟魯司特），至25 mL的容量瓶中，按照表3精密移取線性儲(chǔ)備溶液，加入適量的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。分別對(duì)9份準(zhǔn)確度測(cè)試樣品溶液各進(jìn)樣1次。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在室溫下保存分離度溶液（SS溶液）、標(biāo)準(zhǔn)溶液（Std）、樣品溶液，在所有溶液制備后的0、8、24、48 h分別對(duì)SS溶液、對(duì)照品溶液、樣品溶液進(jìn)行進(jìn)樣。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性

按上述色譜條件進(jìn)樣，得到，分離度溶液中，雜質(zhì)B與孟魯司特的分離度≥2.5，雜質(zhì)C與孟魯司特的分離度≥1.2，符合要求。標(biāo)準(zhǔn)溶液中，理論板數(shù)按孟魯司特鈉峰計(jì)≥4 000，拖尾因子（T）≤2.0，符合要求。

3.2 線性關(guān)系考察

以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）作線性回歸。線性方程分別為：Y孟魯司特鈉=22720X-771.11（r=0.9999），Y雜質(zhì)A=23468X-1993.2（r=0.9999），Y雜質(zhì)D=27121X-1074.8（r=0.9999）。線性范圍分別為孟魯司特鈉 1.014935-6.089610 μg/ mL，雜質(zhì)A 1.028-30.84 μg/ mL，雜質(zhì)D 1.027-15.405 μg/ mL。

3.3 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，孟魯司特鈉、雜質(zhì)A、雜質(zhì)D的RSD分別為0.8%、0.8%、1.3%。

按照下表用稀釋劑進(jìn)一步稀釋線性儲(chǔ)備溶液（1和2），得到線性測(cè)試溶液，濃度為QL至相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)溶液的300%，每份線性測(cè)試溶液各進(jìn)樣1次。見(jiàn)表2。

2.4 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積。

2.5 方法精密度

取不少于20片樣品，稱重，磨粉，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于25 mg的孟魯司特的粉末，置25 mL的量瓶中，加入20 mL的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。按照測(cè)試方法制備6份孟魯司特鈉片樣品溶液。

2.6 準(zhǔn)確度

使用線性下的線性貯備液（1和2）作為準(zhǔn)確度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確稱取約500 mg的孟魯司特鈉片（10 mg）的粉末（相當(dāng)于25 mg孟魯司特），至25 mL的容量瓶中，按照表3精密移取線性儲(chǔ)備溶液，加入適量的稀釋劑，機(jī)械振搖20 min，稀釋劑稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去2 mL初濾液。分別對(duì)9份準(zhǔn)確度測(cè)試樣品溶液各進(jìn)樣1次。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在室溫下保存分離度溶液（SS溶液）、標(biāo)準(zhǔn)溶液（Std）、樣品溶液，在所有溶液制備后的0、8、24、48 h分別對(duì)SS溶液、對(duì)照品溶液、樣品溶液進(jìn)行進(jìn)樣。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性

按上述色譜條件進(jìn)樣，得到，分離度溶液中，雜質(zhì)B與孟魯司特的分離度≥2.5，雜質(zhì)C與孟魯司特的分離度≥1.2，符合要求。標(biāo)準(zhǔn)溶液中，理論板數(shù)按孟魯司特鈉峰計(jì)≥4 000，拖尾因子（T）≤2.0，符合要求。

3.2 線性關(guān)系考察

以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）作線性回歸。線性方程分別為：Y孟魯司特鈉=22720X-771.11（r=0.9999），Y雜質(zhì)A=23468X-1993.2（r=0.9999），Y雜質(zhì)D=27121X-1074.8（r=0.9999）。線性范圍分別為孟魯司特鈉 1.014935-6.089610 μg/ mL，雜質(zhì)A 1.028-30.84 μg/ mL，雜質(zhì)D 1.027-15.405 μg/ mL。

3.3 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，孟魯司特鈉、雜質(zhì)A、雜質(zhì)D的RSD分別為0.8%、0.8%、1.3%。