北京市藥品認(rèn)證管理中心（100053） 石慧

北京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所（100071）申睿 雷虹 楊瑩 郭琪△

附圖 HLPC色譜圖 A.樟腦薄和荷腦混合對照品；B.筋骨舒噴霧劑供試品；C.缺樟腦和薄荷腦陰性對照溶液；a.樟腦 b.薄荷腦

筋骨舒噴霧劑是陜西仁康藥業(yè)有限公司西寧分公司研制的產(chǎn)品，處方中含有薄荷腦、樟腦、白芷、雞矢藤、雞血藤、金錢草、桂枝、伸筋草等10味藥，為治療風(fēng)寒濕邪侵襲人體的肌肉、經(jīng)絡(luò)、筋骨關(guān)節(jié)所致的經(jīng)絡(luò)阻滯、四肢拘攣、關(guān)節(jié)屈伸不利以及氣血流行不暢引起的筋骨疼痛等癥的中藥制劑。主要用于風(fēng)濕痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肩周炎以及跌打損傷所致的淤血腫痛等癥。本品不曾建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為了有效的進(jìn)行質(zhì)量控制，我們對筋骨舒噴霧劑中的薄荷腦和樟腦含量測定進(jìn)行了研究，建立了氣相色譜儀同時測定薄荷腦和樟腦的方法[1][2]為提高筋骨舒噴霧劑的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent6890氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；電子分析天平(METLILER TOLEDOO-AX205DR)；GN-RO-30型純水機(jī)（北京市雙峰純水設(shè)備廠）；KQ-300VDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ZF型紫外反射透射分析儀（上海康華生化儀器制造廠）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥 樟腦對照品（供含量測定用，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號為110747-200507）、薄荷腦對照品（供含量測定用，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號為110728-200508）；筋骨舒噴霧劑由陜西仁康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)制備；所用乙醇等化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 DB-624毛細(xì)管色譜柱(30m×0.53mm,3μm)，氫離子火焰檢測器。程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至180℃，保持20分鐘。進(jìn)樣口溫度200℃，F(xiàn)ID檢測器溫度250℃，分流比為18:1，進(jìn)樣量1μl，采用外標(biāo)法計(jì)算；分別取樣品溶液與陰性對照溶液，進(jìn)樣1μl，對比樣品溶液與陰性對照溶液的色譜圖，見附圖。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品儲備液的制備 精密稱取薄荷腦、樟腦對照品各25mg置于25ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品儲備液的制備 精密量取本品10ml置于100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方組成，取除薄荷腦、樟腦外的其余藥味，按照筋骨舒噴霧劑制備工藝流程制成不含薄荷腦、樟腦的筋骨舒噴霧劑藥品。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取混合對照品儲備液3ml置10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻得混合對照品溶液。按2.2.1項(xiàng)所述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定薄荷腦、樟腦對照品的峰面積，得樟腦、薄荷腦對照品峰面積的RSD值分別為1.2%、1.5%，表明儀器精密度良好。

附表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

附表2 樣品含量測定結(jié)果

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取薄荷腦、樟腦混合對照品儲備液0.5、1、2、3、4、5ml置于10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。分別精密吸取上述對照品溶液1μl注入氣相色譜儀。記錄對照品峰面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線性回歸，得樟腦對照品線性回歸方程y=983.80x+2.6836，r=0.9995（n=6），薄荷腦對照品線性回歸方程為y=979.66x+2.0510,r=0.9995（n=6）,顯示樟腦濃度在0.0515～0.5154mg/ml，薄荷腦濃度在0.0565～0.5654mg/ml范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取溶液2.2.2項(xiàng)下制備的混合對照品溶液，在2.2.1項(xiàng)下色譜條件，分別在0、1、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果得樟腦、薄荷腦對照品面積的RSD均為0.7%，表明對照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密量取2.2.2項(xiàng)下供試品儲備液10ml，分別置于50ml容量瓶，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液，平行做6份供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)所述色譜條件，測定峰面積，得樟腦平均含量為0.3213mg/ml，RSD=0.6%(n=6)；薄荷腦平均含量為0.2853mg/ml，RSD=0.7%(n=6)，顯示重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品儲備液6份，精密加入1ml對照品溶液于10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，按2.1.1項(xiàng)所述色譜條件，測定樟腦、薄荷腦的峰面積并計(jì)算回收率，得樟腦平均回收率為102.6%，RSD=1.4%（n=6)；薄荷腦平均回收率為101.6%，RSD=1.5%(n=6），結(jié)果見附表1。

2.8 樣品含量測定 精密量取4批樣品各10ml,置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品儲備液，再取10ml供試品儲備液置50ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。吸取上述溶液各1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見附表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)曾選用環(huán)己酮[3]作為內(nèi)標(biāo)物，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果與外標(biāo)法計(jì)算得到的樣品含量無差別，而外標(biāo)法操作簡便，快速，通過減少內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的使用，減小誤差，且結(jié)果準(zhǔn)確。所以本實(shí)驗(yàn)采用外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。

柱溫是色譜峰分離的一個重要參數(shù)，直接影響分離效果和分析速度。測定樟腦和薄荷腦的含量常采用程序升溫的方法。據(jù)原有色譜條件：程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至150℃，保持12分鐘。進(jìn)樣口溫度170℃，F(xiàn)ID檢測器溫度200℃，由此所得樟腦與薄荷腦色譜峰分離度＜1.5，不符合要求。之后修改色譜條件為：程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至180℃，保持20分鐘[4]。進(jìn)樣口溫度200℃，F(xiàn)ID檢測器溫度250℃，由此所得色譜圖可以達(dá)到各色譜峰基線分離，且分離度 ＞1.5，峰形對稱，重復(fù)性好。

薄荷腦和樟腦均易溶解于乙醇、三氯甲烷、乙醚,而本品為含55%乙醇的液體制劑[5][6]，所以采用乙醇做稀釋溶劑。