鐘凌云，潘亮亮，馬冰潔，哈力瑪，龔千鋒

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西南昌 330004)

中藥中重金屬元素的研究在最近幾年發(fā)展迅猛，其研究已引起了國(guó)內(nèi)外廣大學(xué)者的高度重視，并已取得了較豐富的科研成果，部分成果對(duì)于指導(dǎo)中醫(yī)臨床合理用藥和保障中藥的安全有效應(yīng)用等，具有重要的啟示意義。中藥中重金屬含有量的多少可以使得重金屬在臨床上表現(xiàn)出對(duì)人體有害或有益兩種截然不同的作用，因此控制中藥飲片中重金屬的量對(duì)在中藥現(xiàn)代化背景下控制中藥飲片質(zhì)量有著重要意義［1］。

電感耦合等離子體質(zhì)譜法 (ICP-MS)是上世紀(jì)八十年代發(fā)展起來(lái)的分析技術(shù)，目前我國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)領(lǐng)域中，對(duì)于重金屬測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法主要采用國(guó)標(biāo)規(guī)定的原子吸收法和原子熒光法等［2-3］。而電感耦合等離子體質(zhì)譜法作為一種新的重金屬檢測(cè)方法，具有靈敏度高、準(zhǔn)確性好、精密度高、檢出限低、線(xiàn)性范圍寬、易于同時(shí)進(jìn)行多元素分析等優(yōu)點(diǎn)，備受分析工作者的關(guān)注［4］。本課題采用ICPMS法進(jìn)行不同產(chǎn)地葛根飲片中重金屬的測(cè)定，一方面建立葛根飲片中重金屬方便準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，另一方面也為初步確定葛根飲片中重金屬的安全、合理的含有量范圍奠定基礎(chǔ)，為企業(yè)生產(chǎn)和臨床用藥提供指導(dǎo)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Varian 820-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀 (美國(guó)瓦里安公司)，配置碰撞/反應(yīng)接口及ICPMSExpert工作站;ETHOSE微波消解儀 (意大利Milestone公司);AFS-230原子熒光光譜儀;EMilli QE超純水器 (美國(guó)Millipore公司);塑料量瓶，洗凈后裝滿(mǎn)硝酸備用。

1.2 試藥 硝酸 (超級(jí)純，德國(guó)Merck)，氯化鈉 (優(yōu)級(jí)純)，雙氧水 (優(yōu)級(jí)純)，超純水，As、Cr、Ni、Cd、Pb、Hg 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 (1000 mg/L，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)，用HNO3(1+49)逐級(jí)稀釋?zhuān)玫紸s、Cr、Ni、Cd、Pb、Hg標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列為 2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/L。內(nèi)標(biāo)溶液:Ge(1000 mg/L，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用HNO3(1+49)逐級(jí)稀釋配制成5 μg/L工作溶液。調(diào)諧溶液:將調(diào)諧溶液貯備液(含 Be、Mg、Co、Ce、Ba、Pb、I n、T1 等元素，100 mg/L，美國(guó)瓦里安公司)，用HNO3(1+49)配制成5 μg/g工作溶液。

葛根分別購(gòu)置于安徽亳州中藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)，廣西玉林中藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)，河南安徽玉偉藥業(yè)，湖南懷化靖州藥材批發(fā)市場(chǎng)，河北御源堂，浙江浙西土特產(chǎn)有限公司，四川荷花池中藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)，貴州凱里中藥材批發(fā)市場(chǎng)，江西樟樹(shù)中藥材批發(fā)市場(chǎng)，湖北荊州藥材市場(chǎng)。經(jīng)我校范催生教授鑒定為豆科葛屬多年生落葉藤本植物野葛Pueraria lobata(wil-Id.)Ohwi的干燥根。

2 試驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 樣品制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取各樣品0.5 g(精確到0.0001g)于聚四氟乙烯 (PTFE)微波消解內(nèi)罐中，加7 mL HNO3和1 mL H2O2，搖勻，安裝好消解罐，放入微波消解儀中，設(shè)置消解程序?yàn)?0 min內(nèi)由室溫上升到180℃，再恒溫消解10 min，待消解完全后自然冷卻至40℃以下;取出消解內(nèi)罐，在電熱板上蒸干，用硝酸 (1+49)將溶液轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中定容，待測(cè)。試劑空白按照同樣的方法處理［5］。

2.2 重金屬測(cè)定

2.2.1 微波消解條件的選擇［6］微波消解法與傳統(tǒng)的干法灰化和濕法消化法相比，具有溶樣時(shí)間短、試劑用量少，空白值低、元素?fù)p失少等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)選擇硝酸-雙氧水作為消解體系，并對(duì)微波消解條件進(jìn)行了優(yōu)化。在該消解條件下，可以很好地破壞樣品中的有機(jī)物，使樣品徹底消解。

2.2.2 分析元素的工作曲線(xiàn)及檢出限 在選定的測(cè)定參數(shù)下，將所配制的 As、Cr、Ni、Cd、Pb、Hg元素混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液用ICP-MS法測(cè)定各元素強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出其線(xiàn)性回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，各測(cè)定元素的相關(guān)系數(shù)均大于0.9996。

表1 各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Tab 1 Standard curve of elements

2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取湖南20120826葛根樣品0.2 g，按“2.1”項(xiàng)方法操作，平行5份，測(cè)定，計(jì)算，RSD為7.1%～9.6%。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 稱(chēng)取 As、Cr、Ni、Cd、Pb、Hg標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按實(shí)驗(yàn)方法配制后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算As、Cr、Ni、Cd、Pb、Hg各元素測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 選取湖南20120826葛根樣品進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)［7］，根據(jù)上述樣品測(cè)定所測(cè)得的各元素的含有量數(shù)值，用這些數(shù)值的80%、100%、120%作為對(duì)照品添加量，精密加入相應(yīng)的對(duì)照品，照“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行樣品消解處理，依據(jù)測(cè)定值與加入對(duì)照品的量計(jì)算加樣回收率并計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各元素精密度及加樣回收率Tab.2 Results of precision and recovery rate

2.2.6 樣品測(cè)定 按上述方法測(cè)定，不同產(chǎn)地、批次的樣品中所含重金屬的量見(jiàn)表3。

表3 不同產(chǎn)地葛根中重金屬的測(cè)定結(jié)果Tab.3 Contents of heavy metals in Pueraria from different habitats

結(jié)果表明，不同產(chǎn)地、不同批次的葛根中Cr、Pb、Ni含有量差別較大，As、Hg、Cd含有量差別不大;Cr平均含有量最高，Hg平均含有量最低;Pb、As和重金屬總量各樣品均符合藥典要求，Cd含有量除江西、湖南和浙江3個(gè)樣品，Hg含有量除湖北1個(gè)樣品外均符合藥典要求。

Cr含有量最高為江西產(chǎn)葛根 (1號(hào))，最低為貴州 (9號(hào))和河南 (18號(hào))，均小于0.1 mg/kg;Ni含有量浙江產(chǎn)葛根 (11號(hào))最高，貴州產(chǎn)葛根(9、10號(hào))最低;As含有量湖北產(chǎn)葛根 (19號(hào))最高，廣西 (6號(hào))、安徽 (8號(hào))和貴州 (9號(hào))產(chǎn)葛根最低;Cd含有量江西產(chǎn)葛根 (2號(hào))最高，廣西 (6號(hào))、安徽 (8號(hào))和貴州 (9號(hào))產(chǎn)葛根最低;Pb含有量江西產(chǎn)葛根 (1號(hào))最高，貴州產(chǎn)葛根 (9號(hào))最低;Hg含有量湖北產(chǎn)葛根(20號(hào))最高，廣西產(chǎn)葛根 (5號(hào))最低。

不同產(chǎn)地、不同批次葛根中，江西產(chǎn)葛根 (1號(hào))重金屬總量最高，貴州產(chǎn)葛根 (9號(hào))重金屬總量最低。

3 討論與小結(jié)

中藥材中重金屬的來(lái)源主要包括:中藥生長(zhǎng)的環(huán)境條件，如土壤、空氣、水和農(nóng)藥化肥的使用的影響;工業(yè)“三廢”對(duì)中藥材造成的直接和間接污染等;植物本身具有的遺傳特性，如主動(dòng)吸收功能，以及對(duì)重金屬元素的富集能力等，都與重金屬產(chǎn)生和含有量有關(guān);中藥材在采收運(yùn)輸，以及飲片加工和制劑過(guò)程中所受到的污染，也易造成重金屬污染。中藥材和中藥飲片在多個(gè)環(huán)節(jié)可能受到的污染，使對(duì)藥材和飲片的重金屬控制顯得尤為重要［8］。重金屬元素中，鉛、砷、汞、銅、鎘等元素被公認(rèn)對(duì)人體有嚴(yán)重的毒害作用［9］， 《中國(guó)藥典》2005年版曾采用重金屬檢查法來(lái)控制藥材重金屬的最高限量，但對(duì)于各重金屬的量沒(méi)有明確規(guī)定;《中國(guó)藥典》2010年版采用ICP-MS技術(shù)，測(cè)定了枸杞子、山楂、人參、黨參等用藥時(shí)間長(zhǎng)及兒童常用品種中砷、汞、鉛、鎘、銅5種重金屬的量，并規(guī)定了重金屬的最高限量，其中要求Pb≤5.0 mg/kg，Cd≤0.3 mg/kg，Hg≤0.2 mg/kg，Cu≤20.0 mg/kg，As≤2.0 mg/kg，重金屬總量要求≤20 mg/kg［10］。

本實(shí)驗(yàn)采用《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定的ICP-MS法測(cè)定了不同產(chǎn)地和批次葛根樣品中的Cr、Pb、Ni、As、Hg、Cd等重金屬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地和批次葛根中，Pb全部符合藥典要求;Cd除江西 (2號(hào))、湖南 (3號(hào))和浙江 (12號(hào))產(chǎn)葛根超標(biāo)外其余均符合藥典要求;Hg除湖北產(chǎn)葛根(20號(hào))超標(biāo)外其余符合藥典要求;As全部符合藥典要求;而各樣品葛根中重金屬總量均符合《中國(guó)藥典》要求，建議以上重金屬超標(biāo)的葛根藥材產(chǎn)地在葛根種植時(shí)對(duì)種植土壤進(jìn)行重金屬含有量監(jiān)控，以保證葛根藥材的重金屬含有量均在藥典要求范圍以?xún)?nèi)。此外，實(shí)驗(yàn)測(cè)定的Ni和Cr量在藥典中未見(jiàn)明確規(guī)定。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，建議對(duì)于葛根藥材，規(guī)定其重金屬含有量限量為:Cr≤10 mg/kg，Pb≤5 mg/kg，Ni≤5 mg/kg，As≤2 mg/kg，Hg≤0.2 mg/kg，Cd≤0.3 mg/kg。

本實(shí)驗(yàn)建立了采用硝酸-過(guò)氧化氫體系微波消解樣品，ICP-MS法測(cè)定葛根中的鉻、鎳、砷、鎘、鉛、汞6種重金屬元素的定量測(cè)定方法［11-12］。方法的精密度滿(mǎn)足痕量分析的要求，并用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確度。該法測(cè)定中藥材重金屬既具有操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果可靠的特點(diǎn)，又克服了常規(guī)溶樣方法帶來(lái)的污染影響，符合環(huán)保要求［13］。

課題對(duì)不同產(chǎn)地、不同批次的20個(gè)樣品中6種重金屬含有量進(jìn)行了比較，既可為初步確定葛根重金屬限量提供參考，為飲片生產(chǎn)和臨床安全用藥提供依據(jù)，又對(duì)葛根種植、產(chǎn)地加工及藥材收購(gòu)具有指導(dǎo)意義，從源頭上確?？刂聘鸶幉暮惋嬈|(zhì)量。

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