劉洋洋，楊云，2，魏建和，2*，張爭，2，陳波

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所 海南分所 海南省南藥資源保護與開發(fā)重點實驗室，海南 萬寧 571533；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193)

研究開發(fā)

不同產(chǎn)地通體香沉香藥材的質(zhì)量分析△

劉洋洋1，楊云1，2，魏建和1，2*，張爭1，2，陳波1

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所 海南分所 海南省南藥資源保護與開發(fā)重點實驗室，海南 萬寧 571533；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193)

目的分析與評價采用“通體結(jié)香技術(shù)”在不同產(chǎn)地白木香樹上所產(chǎn)沉香藥材的質(zhì)量。方法按照《中國藥典》2010年版一部中沉香藥材的性狀描述、顯微鑒別、薄層鑒別、理化鑒別和浸出物含量等方法，對抽檢沉香樣品質(zhì)量進行全面分析。結(jié)果4批通體香沉香藥材的性狀、顯微特征、薄層色譜、顯色反應(yīng)均與對照藥材相同，其浸出物含量為11.15%～24.02%。結(jié)論4批通體香沉香藥材的質(zhì)量指標均符合《中國藥典》的規(guī)定。

白木香；沉香；通體結(jié)香技術(shù)；質(zhì)量

沉香是來自常綠喬木瑞香科Thymelaeaceae沉香屬AquilariaLam植物含有樹脂的木材，是中國、日本、印度以及其他東南亞國家的傳統(tǒng)藥材和名貴天然香料，在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)、藏醫(yī)學(xué)和印度傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中已有幾千年的應(yīng)用歷史。沉香在藥用、精油、香料等方面市場需求量較大，原料遠銷中東、歐洲、美國、日本、韓國等國家和地區(qū)。隨著生態(tài)環(huán)境的破壞和沉香的過度砍伐，沉香屬植物資源日益枯竭，已經(jīng)列入《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》(CITES)附錄Ⅱ。由于野生沉香資源及產(chǎn)量日益減少，目前國際市場上沉香供不應(yīng)求。

白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg是我國目前生產(chǎn)沉香的唯一植物來源[1]，野生資源主要分布于廣東、海南等地。因伐樹取香，目前野生白木香資源幾乎破壞殆盡。為此，魏建和等[2]提出白木香防御反應(yīng)誘導(dǎo)結(jié)香假說，并發(fā)明了“通體結(jié)香技術(shù)”(Whole-tree agarwood-inducing technique)，極大地提高了沉香產(chǎn)量[3]，所產(chǎn)沉香又稱為通體香沉香藥材。從廣東和海南4個白木香“通體結(jié)香技術(shù)”結(jié)香示范基地取樣，照《中國藥典》沉香項下方法，對4個基地的通體香沉香藥材的質(zhì)量進行分析與評價。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器

ECLIPSE 80i顯微鏡(尼康株式會社)；DS-5MC顯微成像系統(tǒng)(尼康株式會社)；JY02S紫外分析儀(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)；AL104-IC電子天平(Mettler Toledo公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋。

1.2 試劑

沉香對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121222-201102)；G60薄層層析板(德國Merck公司，批號：HX062464，10 cm×20 cm，)；香草醛(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：20091120，)；鹽酸、乙醚、三氯甲烷和95%乙醇均為國產(chǎn)分析純。

1.3 材料

分別在海南和廣東的4個白木香“通體結(jié)香技術(shù)”結(jié)香示范基地各隨機砍伐2棵胸徑為10～15 cm的已結(jié)香的白木香樹，并由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所魏建和研究員鑒定為白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg，按照《中國藥典》2010年版一部[1]和DB 46/T257-2013[4]的要求剖取沉香藥材，同一個基地的沉香藥材記為同一批，沉香樣品信息見表1，憑證標本保存于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所南藥化學(xué)實驗室標本庫。

表1 4批沉香藥材信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀檢查

按照《中國藥典》2010年版一部中沉香藥材的要求，檢查4批通體香沉香藥材的性狀特點，結(jié)果見圖1。4批沉香樣品都呈片狀，大小規(guī)則不一。表面凹凸不平，有刀痕，偶有孔洞，可見黑褐色樹脂與黃白色木部相間的斑紋，凹窩表面多呈朽木狀。質(zhì)較堅實，折斷面有刺狀。

圖1 4批沉香藥材的外觀性狀

2.2 顯微鑒別

按照《中國藥典》2010年版一部中沉香藥材的顯微鑒別要求，對4批沉香藥材的顯微特征進行鑒別，結(jié)果如圖2。4批沉香樣品都可以觀察到射線、導(dǎo)管和木間韌皮部等顯微結(jié)構(gòu)。射線寬1～2列細胞，充滿棕色樹脂。導(dǎo)管圓多角形，有的含棕色樹脂。木纖維多角形。木間韌皮都扁長橢圓狀或條帶狀，常與射線相交，細胞壁薄，內(nèi)含棕色樹脂。

圖2 4批沉香藥材顯微特征

2.3 薄層鑒別

沉香樣品粉碎過26目篩，取沉香樣品粉末0.5 g置于具塞三角瓶中，加乙醚30 mL，超聲處理60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取沉香對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外分析儀(365 nm)下檢視，結(jié)果見圖3。4批沉香樣品色譜中，在與對照藥材(CK)色譜相應(yīng)的位置上，都顯相同顏色的熒光斑點。

圖3 4批沉香藥材與對照藥材的TLC圖

2.4 浸出物含量測定

取沉香粉末樣品約2 g，精密稱定，置100 mL的錐形瓶中，精密加入95%乙醇50 mL，稱定重量，靜置1 h，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用95%乙醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算醇溶性浸出物含量。各樣品醇溶性浸出物含量結(jié)果見表2。

2.5 顯色鑒別

取2.4項下各樣品的醇溶性浸出物，在蒸發(fā)皿上蓋一塊玻璃片，用酒精燈在蒸發(fā)皿底部加熱至蓋玻片上有油狀物出現(xiàn)，于油狀物上加鹽酸1滴與香草醛少量，再滴加乙醇1～2滴，觀察并記錄其顏色變化情況，結(jié)果見表2。

表2 沉香藥材醇溶性浸出物的含量及其顯色反應(yīng)

3 結(jié)論與討論

采用“通體結(jié)香技術(shù)”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材呈片狀，凹窩表面為朽木狀，與《中國藥典》中沉香性狀的描述相符。該性狀特點與沉香形成機理有關(guān)?！巴w結(jié)香技術(shù)”采用輸液法將結(jié)香液輸入白木香樹體，由于植物蒸騰拉力能夠?qū)⒔Y(jié)香液從輸液孔處運輸至整棵植株，造成樹體內(nèi)部區(qū)域性傷害，從而誘導(dǎo)白木香在傷害區(qū)域與健康白木之間緩慢形成沉香，以保護沉香層外側(cè)的健康白木免受進一步傷害，而傷害面繼續(xù)腐爛成朽木狀。

沉香藥材顯微鑒別結(jié)果表明射線、導(dǎo)管和木間韌皮部(內(nèi)涵韌皮部)中均充滿棕色樹脂，分布不規(guī)則。該棕色樹脂是白木香樹受到傷害、誘導(dǎo)樹體產(chǎn)生防御反應(yīng)而形成的物質(zhì)，并填充到木質(zhì)部的射線、導(dǎo)管和木間韌皮部中形成沉香層。采用“通體結(jié)香技術(shù)”生產(chǎn)的沉香與對照藥材都具有相似的顯微特征，而市面上的一些偽品沉香多可見到染色物顆?；蚩斩礃拥哪鹃g韌皮部[5]。由于從中國食品藥品檢定研究院購買的沉香對照藥材僅有規(guī)格為1 g、用于薄層鑒別的粉末樣品，故未能提供對照藥材的性狀鑒別和顯微鑒別數(shù)據(jù)。

4批采用“通體結(jié)香技術(shù)”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材醇溶性浸出物含量為11.15%～24.02%，均高于《中國藥典》規(guī)定的不低于10%的要求。樣品A和樣品D分別采自于海南瓊中和廣東化州，結(jié)香時間均為12個月，其醇溶性浸出物含量分別為17.87%和16.50%，其品質(zhì)相當；采自海南海口結(jié)香時間為15個月的樣品B的醇溶性浸出物含量只有11.15%；而采自廣東廉江結(jié)香11個月的樣品C的醇溶性浸出物含量卻高達24.02%，二者品質(zhì)相差較大。4批抽檢沉香樣品來自4個不同產(chǎn)地，結(jié)香時間為11～15個月，但是其醇溶性浸出物含量與結(jié)香時間長短并無正向相關(guān)性，其原因可能與其產(chǎn)地、氣候以及樹木種質(zhì)等因素有關(guān)，筆者所在研究團隊將在后續(xù)研究中報道相關(guān)研究結(jié)果[3，6]。

研究表明，4批通體香沉香藥材的性狀、顯微鑒別、理化鑒別、薄層鑒別和浸出物等考察指標均符合《中國藥典》2010年版一部的規(guī)定，此結(jié)論與委托海南省藥品檢驗所和廣東省食品藥品檢驗所的檢驗結(jié)果一致。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：172.

[2] 張爭，楊云，魏建和，等.白木香結(jié)香機理研究進展及防御反應(yīng)誘導(dǎo)結(jié)香假說[J].中草藥，2010，41(1)：19-21.

[3] Liu YY，Chen HQ Yang Y，et al.Whole-tree agarwood-inducing technique：An efficient novel technique for producing high-quality agarwood in cultivated Aquilaria sinensis trees[J].Molecules，2013，18：3086-3106.

[4] 海南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.白木香通體結(jié)香 樹木剖香技術(shù)規(guī)程[S].DB 46/T257-2013.

[5] 李志俊，任婧昱，匡洪堯.沉香及其偽品的鑒別[J].中藥材，2011，34(1)：59-61.

[6] Zhang XL，Liu YY，Wei JH，et al.Production of high-quality agarwood in Aquilaria sinensis trees via whole-tree agarwood-induction technology[J].Chin Chem Lett，2012，23：727-730.

AnalysisontheQualityofAgarwoodProducedviatheWhole-treeAgarwood-inducingTechniqueinDifferentArea

LIUYangyang1，YANGYun1，2，WEIJianhe1，2*，ZHANGZheng1，2，CHENBo1

(1.HainanProvincialKeyLaboratoryofResourcesConservationandDevelopmentofSouthernMedicine，HainanBranchInstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Wanning571533，China； 2.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicinalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China))

Objective：To analyze and evaluate the quality of agarwood produced by the whole-tree agarwood-inducing technique inAquilariasinensis(Lour.)Gilg trees from different area.MethodsWe have analyzed all the quality standard index of the agarwood defined in ‘Chinese Pharmacopoeia’(Volume I)，including characteristic description，microscopic characteristic，TLC，color reaction and extractives content.ResultsThe description，microscopic feature，TLC chromatogram and color reaction of the four test agarwood sample from Qiongzhong County and Haikou City of Hainan Province and Lianjiang County and Huazhou County of Guangdong Province are same as the standard agarwood sample.The alcohol soluble extractive contents of the four test agarwood are 17.87%，11.15%，24.02% and 16.5% respectively.ConclusionThese four test agarwood produced by whole-tree agarwood-inducing technique inAquilariasinensis(Lour.)Gilg in different area，are measure up to the standard of ‘Chinese Pharmacopoeia’.

Aquilariasinensis(Lour.)Gilg；Agarwood；Whole-tree agarwood-inducing technique；Quality

國家科技支撐計劃(2011BAI01B07)；海南省重大科技項目(ZDZX2013013)；海南省重點科技計劃項目(ZDXM20120033)；海南省自然科學(xué)基金(313118);中央本級重大增減支項目(2060302)

*

魏建和，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物基因資源與分子育種，藥用植物次生代謝調(diào)控；E-mail：wjianh@263.net

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.002

2013-11-01)