韓忠麗，郝貴周，陳小偉

(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂276006)

阿法替尼(afatinib)為酪氨酸激酶抑制劑類抗癌藥［1］，由勃林格殷格翰公司開發(fā)。2013年7月美國FDA批準(zhǔn)Gilotrif(阿法替尼片)用于表皮生長因子受體(EGFR)基因突變的晚期(轉(zhuǎn)移性)非小細(xì)胞肺癌(NSCL)患者的治療，EGFR基因突變可通過FDA批準(zhǔn)的診斷試劑進(jìn)行檢測。大約85%的肺癌為非小細(xì)胞肺癌，使其成為肺癌中最常見的形式。EGFR基因突變在非小細(xì)胞肺癌中大約能占到10%，而EGFR基因突變的大多數(shù)形式是EGFR外顯子19缺失或外顯子21 L858R置換［2，3］。本文通過反復(fù)研究建立了反相HPLC法測定阿法替尼片含量的方法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于阿法替尼片質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀;Sartorius LA120S分析天平，乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、氫氧化鈉為分析純，水為純化水。阿法替尼對照品(山東新時代藥業(yè)有限公司標(biāo)定，批號:131001S)，阿法替尼原料(山東新時代藥業(yè)有限公司，批號:130902)。

2 方法與結(jié)果

2.1 阿法替尼片的制備［4］稱取阿法替尼細(xì)粉30 g、微晶纖維素155 g、乳糖100 g、羧甲基淀粉鈉12 g，加入濕法混合制粒機(jī)混合10 min，加入3%聚維酮k30乙醇溶液制粒，過20目篩;流化床50℃干燥20 min，過20目篩整粒;加入硬脂酸鎂3 g，混合5 min;Φ9 mm淺弧沖壓片。

2.2 色譜條件 色譜柱:Phenomenex Luna C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀(2 mol·L－1氫氧化鈉溶液調(diào)pH 6.0)－乙腈(50∶50);柱溫:30℃;檢測波長:252 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)按阿法替尼峰計算不低于3 000。

2.3 溶液制備

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，濾過，即得。

2.3.2 對照品溶液的制備 取阿法替尼對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，即得。

2.3.3 空白輔料溶液的制備 取阿法替尼片空白輔料適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約相當(dāng)于含阿法替尼0.1 mg的溶液，搖勻，濾過，即得。

2.4 專屬性試驗 按“2.2”項下的色譜條件，分別量取對照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明，空白輔料對本品的含量測定無干擾，見圖1。

圖1 液相色譜圖

2.5 線性與范圍試驗 取阿法替尼對照品適量(約相當(dāng)于阿法替尼50 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分別精密量取儲備液 1、2.5、4、5 和6 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.2”項下的色譜條件測定，以峰面積A對濃度C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:A=63.293C+21.339，r=0.999 9。結(jié)果表明:阿法替尼濃度在20～120 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密稱取阿法替尼對照品，加流動相溶解并稀釋制成濃度分別約為80、100和120 μg·mL－1的溶液，取上述3 種溶液，按“2.2”項下的色譜條件測定，每份測定3次。記錄峰面積，考察精密度，計算 RSD 分別為 0.52%、0.37%、0.39%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液與對照品溶液，分別在配制后0、1、2、4、6、8 h 取樣，依法測定，記錄峰面積，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。經(jīng)試驗，供試品溶液與對照品溶液峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.64%與0.51%，說明溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗 精密稱取阿法替尼對照品適量(約相當(dāng)于阿法替尼16、20、24 mg)，各3份，分別置200 mL量瓶中，分別加入處方量的空白輔料適量，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另精密稱取阿法替尼對照品約20 mg，置200 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按“2.2”項下的色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，測定平均回收率為100.3%，RSD 為 0.93%(n=9)。

2.9 樣品測定 按“2.1”項下方法分別制備3批樣品(批號:131201、131202、131203)，取本品及對照品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液及對照品溶液，精密量取上述供試品溶液及對照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果見表1。

表1 阿法替尼片含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 測定波長的選擇 以流動相作為溶劑，配制阿法替尼溶液，在190～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果阿法替尼在252 nm波長處有最大吸收，故檢測波長選擇為252 nm。

3.2 流動相的選擇 調(diào)整磷酸二氫鉀溶液的濃度、pH值及與乙腈的比例，經(jīng)反復(fù)摸索，最終選用0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀(2 mol·L－1氫氧化鈉溶液調(diào)pH 6.0)－乙腈(50∶50)為流動相。經(jīng)試驗，該方法主峰保留時間適中，專屬性強(qiáng)，精密度良好，準(zhǔn)確度高，溶液穩(wěn)定，可用于阿法替尼片的質(zhì)量控制。

［1］史寧，韋林毅，吳久鴻.小分子抗腫瘤蛋白激酶抑制劑的研究進(jìn)展［J］.中國藥學(xué)雜志，2011，46(23):1784－1789.

［2］焦瑾.非小細(xì)胞肺癌治療藥—Gillotrif［J］.藥學(xué)研究，2013，32(9):557 －558.

［3］Bruns A，Eichner S，Lehmann F，et al.Crystalline forms of afatinib di－maleate:WO，2013052157 A1［P］.2013 －4－11.

［4］Barta A.Process for drying of bibw2992，of its salts and solid pharmaceutical formulations comprising this active ingredient:US，20120107399 A1［P］.2012 －5 －3.