岳莉

[摘要] 目的 對(duì)青蒿琥脂片的溶出度檢查進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法 參照《中國藥典》2010年版二部附錄ⅩC第二法對(duì)其溶出度進(jìn)行檢查[1]。采用紫外分光光度法，在289 nm的波長處測定吸光度，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。 結(jié)果 采用該方法測定青蒿琥脂片，分別在pH1.2、4.5、6.8、水四種溶出介質(zhì)中，以濃度對(duì)吸收度進(jìn)行線性回歸，青蒿琥酯在10～60 μg/mL范圍內(nèi)濃度與吸收度呈良好的線性關(guān)系。在以上四種溶出介質(zhì)中的平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合要求。結(jié)論 本法測定青蒿琥酯片溶出量方法尚可，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 青蒿琥脂片；溶出度測定；方法學(xué)驗(yàn)證

[中圖分類號(hào)] R944 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）26-0067-04

青蒿琥酯是具有倍半萜結(jié)構(gòu)的抗瘧青蒿素的衍生物之一[1]，作為新型的抗瘧藥，青蒿琥酯具有高效、速效、低毒等特點(diǎn)，而且不易產(chǎn)生耐受性[2]。對(duì)原蟲無性體有較強(qiáng)的殺滅作用，能迅速控制瘧疾發(fā)作，適用于腦型瘧疾及各種危重瘧疾的治療[3]。除抗瘧外，尚有治療弓形蟲病、抗腫瘤等作用[4]。青蒿琥酯片收載于國際藥典第三版以及中國藥典2010年版二部，溶出度測定作為反映或模擬體內(nèi)藥物吸收情況的實(shí)驗(yàn)方法在評(píng)定口服固體制劑的質(zhì)量時(shí)有重要意義[5]。本文參考有關(guān)相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)青蒿琥酯片的體外溶出實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了方法研究[6，7]，可用于該產(chǎn)品制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考。

1儀器與試藥

ZRS-8G智能溶出儀（天大天發(fā)科技有限公司）；T90+紫外分光光度計(jì)（PG.Instruments Ltd）；青蒿琥酯對(duì)照品（美國USP品牌，批號(hào)：100200-200202）；青蒿琥酯原料藥（來源：武漢三洹醫(yī)藥化工有限公司）；青蒿琥酯片（來源：安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司）。所用試劑均為分析純，水為去離子水。

2溶出度測定的方法學(xué)驗(yàn)證[8]

2.1 衍生化方法的確定

參考中國藥典2010年版二部青蒿琥酯片溶出度測定方法。青蒿琥酯堿水解條件受到水解溫度、堿液濃度、水解時(shí)間影響。因此，需要對(duì)其測定方法進(jìn)行再驗(yàn)證與優(yōu)化。精密稱取青蒿琥酯原料藥50 mg，加水溶解并制成1 000 mL，作為考察溶液。

2.1.1 水解溫度考察 精密量取上述溶液20 mL，置25 mL量瓶中，加1M氫氧化鈉溶液2.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，共6份，分別置40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃水浴溫度下保溫45 min，取出，立即冷卻至室溫，另取相應(yīng)試劑同法制成各自空白溶液。在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，記錄最大吸收波長及吸光度。結(jié)果：水解溫度在50℃時(shí)吸光度變化最小，最大吸收波長為288 nm。參考中國藥典收載的青蒿琥酯片溶出度測定檢測波長，確定檢測波長為289 nm。

2.1.2 堿液濃度考察 精密量取上述溶液20 mL，置25 mL量瓶中，共6份，分別加0.5、1、2、3、4、5M氫氧化鈉溶液2.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，同置50℃水浴保溫45 min，取出，立即冷卻至室溫，另取相應(yīng)試劑同法制成各自空白溶液。在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，記錄最大吸收波長及吸光度。結(jié)果：堿液濃度在1M，水解液堿度在0.1M時(shí)吸光度最大，最大吸收波長在288 nm。

2.1.3 水解時(shí)間考察 精密量取上述溶液20 mL，置25 mL量瓶中，加1M氫氧化鈉溶液2.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，共6份，同置50℃水浴保溫，于15、30、45、60、75、90 min取出1份，立即冷卻至室溫，另取相應(yīng)試劑同法制成各自空白溶液。在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，記錄最大吸收波長及吸光度。結(jié)果：水解時(shí)間在45 min時(shí)吸光度最大，且最大吸收波長在289 nm左右。

2.1.4 測定溶液穩(wěn)定性考察 精密量取上述溶液20 mL，置25 mL量瓶中，加1M氫氧化鈉溶液2.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，置50℃水浴保溫45 min，取出，立即冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，并在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下放置，在不同時(shí)間測定吸光度。結(jié)果：在上述衍生化條件下的水解液在2 h內(nèi)吸收值穩(wěn)定，故應(yīng)在水解后2 h內(nèi)測定完畢。

2.1.5 結(jié)論 根據(jù)上述序貫試驗(yàn)結(jié)果得出溶出量測定衍生化最佳方法為：精密量取上述溶液20 mL，置25 mL量瓶中，加1M氫氧化鈉溶液2.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，置50℃水浴保溫45 min，取出，立即冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度。

2.2 系統(tǒng)適用性

此項(xiàng)內(nèi)容主要對(duì)青蒿琥酯在pH1.2、4.5、6.8緩沖溶出介質(zhì)（PhInt4）及水中的系統(tǒng)適用性進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容：檢測波長、測定精密度、濾膜吸附性試驗(yàn)等。由于pH1.2緩沖液介質(zhì)20 mL需要消耗1M氫氧化鈉溶液1.5 mL，因此，為達(dá)到0.1M的水解液堿度，需加入1M氫氧化鈉溶液4 mL。

2.2.1 檢測波長確定 ①取供試品適量，精密稱定重量，研細(xì)，精密稱取相當(dāng)于1片量的粉末，分別置1 000 mL pH1.2、4.5、6.8、水四種介質(zhì)中，置37℃保溫槳法100 r/min攪拌1 h，取溶液經(jīng)0.8 μm微孔濾膜濾過，精密量取濾液20 mL，置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液2.5 mL（pH1.2緩沖液加入4 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。②取青蒿琥酯對(duì)照品10 mg，置250 mL量瓶中，分別加pH1.2、4.5、6.8、水四種溶出介質(zhì)200 mL，超聲使溶解，加1 mol/L氫氧化鈉溶液25 mL（pH1.2緩沖液加入40 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。③取缺青蒿琥酯陰性粉末230 mg，分別置1 000 mL pH1.2、4.5、6.8、水四種介質(zhì)中，置37℃保溫槳法100 r/min攪拌1 h，取溶液經(jīng)濾膜濾過，精密量取濾液20 mL，置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液2.5 mL（pH1.2緩沖液加入4mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對(duì)照溶液。④取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液同置（50±1）℃水浴中保溫45 min，迅速冷卻至室溫，在200～400 nm的波長范圍進(jìn)行掃描。⑤結(jié)果表明：在pH 1.2、4.5、6.8、水四種溶出介質(zhì)中，供試品溶液與對(duì)照品溶液最大吸收波長均為289 nm，陰性對(duì)照溶液在此波長下均無吸收。因而，確定檢測波長為289 nm。endprint

2.2.3 濾膜吸附性試驗(yàn) 取不經(jīng)濾膜過濾的溶出液，再取適量，經(jīng)濾膜過濾，將此次過濾前后的溶出液照上述溶出量測定方法測定其吸光度，過濾前后吸光度差值應(yīng)小于1%。結(jié)果表明：濾膜對(duì)被測組分有一定程度的吸附。

2.3 專屬性

取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，在289 nm的檢測波長下分別測定吸光度。結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在此波長下無吸收，說明處方輔料不干擾本法的測定；陰性樣品在水、pH1.2、pH4.5三種介質(zhì)中的干擾率大于2%，有一定程度的干擾。此法有待進(jìn)一步的提高。

2.4 線性

2.4.1方法 ①pH1.2緩沖液： 取青蒿琥酯對(duì)照品25 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加pH1.2緩沖液適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5、10、15、20、25、30 mL，分別置50 mL量瓶中，加上述介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為各對(duì)照品溶液。精密量取各對(duì)照品溶液20 mL，分別置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，同置（50±1）℃水浴中保溫45 min，迅速冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.0036X-0.0003（日內(nèi)）、r=0.9988，Y=0.0029X+0.0101（日間）、r=0.9984。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0028X-0.0006（日內(nèi)）、r=0.9960，Y=0.0020X-0.0059（日間）、r=0.9940。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0037X+0.0044（日內(nèi)）、r=0.99998，Y=0.0036X+0.0014（日間）、r=0.9995。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0036X-0.0050（日內(nèi)）、r=0.9990，Y=0.0028X-0.0005（日間）、r=0.9990。

2.4.2 范圍 結(jié)果顯示：青蒿琥酯在（10～60）μg/mL（相當(dāng)于標(biāo)示濃度的20%～120%）的濃度范圍內(nèi)，方法的線性良好。因而，確定本法的線性范圍為20%～120%。

2.5 準(zhǔn)確度（回收率）

2.5.1方法 ① pH1.2緩沖液：取缺青蒿琥酯陰性230 mg，置1 000 mL量瓶中，共9份，分別精密稱取青蒿琥酯工作對(duì)照品30 mg、40 mg、50 mg，各3份，分別置上述量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，經(jīng)0.8 μm微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取青蒿琥酯對(duì)照品10 mg，置250 mL量瓶中，加上述介質(zhì)200 mL，加1 mol/L氫氧化鈉溶液40 mL（以下的溶出介質(zhì)加入25 mL）振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，同置50℃水浴保溫45 min，立即冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，計(jì)算測得量。根據(jù)測得量與加入量比值計(jì)算本法回收率。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。

3討論

由于青蒿琥酯化學(xué)結(jié)構(gòu)中僅琥珀酸基團(tuán)含有生色團(tuán)，其最大吸收波長在216 nm左右，但吸收系數(shù)很小，需要較高的測定濃度，超過了溶出度測定的濃度要求（50 mg→1000 mL，50 μg/mL），但遇稀堿后結(jié)構(gòu)發(fā)生定量轉(zhuǎn)化，其產(chǎn)物在289 nm 處有一強(qiáng)吸收峰，紫外分光光度法就是利用青蒿琥酯這一性質(zhì)建立的定量分析方法。采用高效液相色譜法測定溶液的濃度要在4 mg/mL左右，若進(jìn)行溶出量測定，需將系統(tǒng)靈敏度增強(qiáng)80倍，勢必造成基線噪音增強(qiáng)，測定的準(zhǔn)確度下降。因而，采用衍生化的方法，通過堿水解生成助色基團(tuán)，使吸收峰紅移，吸收系數(shù)增加，達(dá)到紫外分光光度法測定要求。

青蒿素類化合物難溶于水、稀酸、稀堿、表面活性劑，易溶于非極性有機(jī)溶劑，但固體制劑在上述溶劑中難以崩解，更談不上溶出。對(duì)于難溶于水的藥物，一般不采用有機(jī)溶劑用于溶出度測定[10，11]。由于青蒿琥酯較差的溶解性，目前市場上相應(yīng)的劑型較少，另外青蒿琥酯具有誘導(dǎo)肝藥酶的作用，首過效應(yīng)明顯，且在體內(nèi)代謝快，導(dǎo)致用藥次數(shù)頻繁；若能通過改變劑型，使其在體內(nèi)緩釋，提高藥物的生物有效利用度，則能克服上述缺點(diǎn)，達(dá)到更有效治療的目的。筆者參照中國藥典2010年版二部青蒿琥酯片溶出度測定方法，采用紫外分光光度法進(jìn)行溶出量定量，結(jié)果可行并符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。此方法研究豐富和完善了中國藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)中國藥典所載方法的修訂有借鑒意義。

本法測定青蒿琥酯片溶出量方法尚可，但由于不同實(shí)驗(yàn)人員操作，其結(jié)果的準(zhǔn)確度與精密度均不夠良好。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，在衍生反應(yīng)中要嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度在50℃，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液的量也要根據(jù)樣品中的具體含量摸索出最佳的加入量，否則會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外青蒿琥酯穩(wěn)定性較差，在受熱時(shí)可水解為雙氫青蒿素。同時(shí)，其在體內(nèi)的代謝活性產(chǎn)物為雙氫青蒿素，因此，青蒿琥酯需在避光陰涼處保存。這種將青蒿琥酯衍生化后間接測定其含量的方法，操作煩瑣， 靈敏度較低，準(zhǔn)確度和精密度不高，故目前青蒿產(chǎn)業(yè)面臨的問題之一是盡快建立簡便、準(zhǔn)確的青蒿素含量測定方法。因而，我們針對(duì)此法還需進(jìn)一步的提高。參考文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，青蒿素的測定方法較多，由于此法為中國藥典所收載，因而我們現(xiàn)在仍選擇該法進(jìn)行溶出量的測定。

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（收稿日期：2014-04-09）endprint

2.2.3 濾膜吸附性試驗(yàn) 取不經(jīng)濾膜過濾的溶出液，再取適量，經(jīng)濾膜過濾，將此次過濾前后的溶出液照上述溶出量測定方法測定其吸光度，過濾前后吸光度差值應(yīng)小于1%。結(jié)果表明：濾膜對(duì)被測組分有一定程度的吸附。

2.3 專屬性

取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，在289 nm的檢測波長下分別測定吸光度。結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在此波長下無吸收，說明處方輔料不干擾本法的測定；陰性樣品在水、pH1.2、pH4.5三種介質(zhì)中的干擾率大于2%，有一定程度的干擾。此法有待進(jìn)一步的提高。

2.4 線性

2.4.1方法 ①pH1.2緩沖液： 取青蒿琥酯對(duì)照品25 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加pH1.2緩沖液適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5、10、15、20、25、30 mL，分別置50 mL量瓶中，加上述介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為各對(duì)照品溶液。精密量取各對(duì)照品溶液20 mL，分別置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，同置（50±1）℃水浴中保溫45 min，迅速冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.0036X-0.0003（日內(nèi)）、r=0.9988，Y=0.0029X+0.0101（日間）、r=0.9984。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0028X-0.0006（日內(nèi)）、r=0.9960，Y=0.0020X-0.0059（日間）、r=0.9940。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0037X+0.0044（日內(nèi)）、r=0.99998，Y=0.0036X+0.0014（日間）、r=0.9995。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0036X-0.0050（日內(nèi)）、r=0.9990，Y=0.0028X-0.0005（日間）、r=0.9990。

2.4.2 范圍 結(jié)果顯示：青蒿琥酯在（10～60）μg/mL（相當(dāng)于標(biāo)示濃度的20%～120%）的濃度范圍內(nèi)，方法的線性良好。因而，確定本法的線性范圍為20%～120%。

2.5 準(zhǔn)確度（回收率）

2.5.1方法 ① pH1.2緩沖液：取缺青蒿琥酯陰性230 mg，置1 000 mL量瓶中，共9份，分別精密稱取青蒿琥酯工作對(duì)照品30 mg、40 mg、50 mg，各3份，分別置上述量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，經(jīng)0.8 μm微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取青蒿琥酯對(duì)照品10 mg，置250 mL量瓶中，加上述介質(zhì)200 mL，加1 mol/L氫氧化鈉溶液40 mL（以下的溶出介質(zhì)加入25 mL）振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，同置50℃水浴保溫45 min，立即冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，計(jì)算測得量。根據(jù)測得量與加入量比值計(jì)算本法回收率。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。

3討論

由于青蒿琥酯化學(xué)結(jié)構(gòu)中僅琥珀酸基團(tuán)含有生色團(tuán)，其最大吸收波長在216 nm左右，但吸收系數(shù)很小，需要較高的測定濃度，超過了溶出度測定的濃度要求（50 mg→1000 mL，50 μg/mL），但遇稀堿后結(jié)構(gòu)發(fā)生定量轉(zhuǎn)化，其產(chǎn)物在289 nm 處有一強(qiáng)吸收峰，紫外分光光度法就是利用青蒿琥酯這一性質(zhì)建立的定量分析方法。采用高效液相色譜法測定溶液的濃度要在4 mg/mL左右，若進(jìn)行溶出量測定，需將系統(tǒng)靈敏度增強(qiáng)80倍，勢必造成基線噪音增強(qiáng)，測定的準(zhǔn)確度下降。因而，采用衍生化的方法，通過堿水解生成助色基團(tuán)，使吸收峰紅移，吸收系數(shù)增加，達(dá)到紫外分光光度法測定要求。

青蒿素類化合物難溶于水、稀酸、稀堿、表面活性劑，易溶于非極性有機(jī)溶劑，但固體制劑在上述溶劑中難以崩解，更談不上溶出。對(duì)于難溶于水的藥物，一般不采用有機(jī)溶劑用于溶出度測定[10，11]。由于青蒿琥酯較差的溶解性，目前市場上相應(yīng)的劑型較少，另外青蒿琥酯具有誘導(dǎo)肝藥酶的作用，首過效應(yīng)明顯，且在體內(nèi)代謝快，導(dǎo)致用藥次數(shù)頻繁；若能通過改變劑型，使其在體內(nèi)緩釋，提高藥物的生物有效利用度，則能克服上述缺點(diǎn)，達(dá)到更有效治療的目的。筆者參照中國藥典2010年版二部青蒿琥酯片溶出度測定方法，采用紫外分光光度法進(jìn)行溶出量定量，結(jié)果可行并符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。此方法研究豐富和完善了中國藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)中國藥典所載方法的修訂有借鑒意義。

本法測定青蒿琥酯片溶出量方法尚可，但由于不同實(shí)驗(yàn)人員操作，其結(jié)果的準(zhǔn)確度與精密度均不夠良好。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，在衍生反應(yīng)中要嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度在50℃，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液的量也要根據(jù)樣品中的具體含量摸索出最佳的加入量，否則會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外青蒿琥酯穩(wěn)定性較差，在受熱時(shí)可水解為雙氫青蒿素。同時(shí)，其在體內(nèi)的代謝活性產(chǎn)物為雙氫青蒿素，因此，青蒿琥酯需在避光陰涼處保存。這種將青蒿琥酯衍生化后間接測定其含量的方法，操作煩瑣， 靈敏度較低，準(zhǔn)確度和精密度不高，故目前青蒿產(chǎn)業(yè)面臨的問題之一是盡快建立簡便、準(zhǔn)確的青蒿素含量測定方法。因而，我們針對(duì)此法還需進(jìn)一步的提高。參考文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，青蒿素的測定方法較多，由于此法為中國藥典所收載，因而我們現(xiàn)在仍選擇該法進(jìn)行溶出量的測定。

[參考文獻(xiàn)]

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2.2.3 濾膜吸附性試驗(yàn) 取不經(jīng)濾膜過濾的溶出液，再取適量，經(jīng)濾膜過濾，將此次過濾前后的溶出液照上述溶出量測定方法測定其吸光度，過濾前后吸光度差值應(yīng)小于1%。結(jié)果表明：濾膜對(duì)被測組分有一定程度的吸附。

2.3 專屬性

取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，在289 nm的檢測波長下分別測定吸光度。結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在此波長下無吸收，說明處方輔料不干擾本法的測定；陰性樣品在水、pH1.2、pH4.5三種介質(zhì)中的干擾率大于2%，有一定程度的干擾。此法有待進(jìn)一步的提高。

2.4 線性

2.4.1方法 ①pH1.2緩沖液： 取青蒿琥酯對(duì)照品25 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加pH1.2緩沖液適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5、10、15、20、25、30 mL，分別置50 mL量瓶中，加上述介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為各對(duì)照品溶液。精密量取各對(duì)照品溶液20 mL，分別置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，同置（50±1）℃水浴中保溫45 min，迅速冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.0036X-0.0003（日內(nèi)）、r=0.9988，Y=0.0029X+0.0101（日間）、r=0.9984。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0028X-0.0006（日內(nèi)）、r=0.9960，Y=0.0020X-0.0059（日間）、r=0.9940。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0037X+0.0044（日內(nèi)）、r=0.99998，Y=0.0036X+0.0014（日間）、r=0.9995。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定，得回歸方程Y=0.0036X-0.0050（日內(nèi)）、r=0.9990，Y=0.0028X-0.0005（日間）、r=0.9990。

2.4.2 范圍 結(jié)果顯示：青蒿琥酯在（10～60）μg/mL（相當(dāng)于標(biāo)示濃度的20%～120%）的濃度范圍內(nèi)，方法的線性良好。因而，確定本法的線性范圍為20%～120%。

2.5 準(zhǔn)確度（回收率）

2.5.1方法 ① pH1.2緩沖液：取缺青蒿琥酯陰性230 mg，置1 000 mL量瓶中，共9份，分別精密稱取青蒿琥酯工作對(duì)照品30 mg、40 mg、50 mg，各3份，分別置上述量瓶中，加相應(yīng)溶出介質(zhì)適量超聲處理10 min，并稀釋至刻度，經(jīng)0.8 μm微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置25 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL（以下的溶出介質(zhì)加入2.5 mL），加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取青蒿琥酯對(duì)照品10 mg，置250 mL量瓶中，加上述介質(zhì)200 mL，加1 mol/L氫氧化鈉溶液40 mL（以下的溶出介質(zhì)加入25 mL）振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液，同置50℃水浴保溫45 min，立即冷卻至室溫，在289 nm的波長處測定吸光度，計(jì)算測得量。根據(jù)測得量與加入量比值計(jì)算本法回收率。②pH4.5緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。③pH6.8緩沖液：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。④水：同pH1.2緩沖液項(xiàng)下配制測定。

3討論

由于青蒿琥酯化學(xué)結(jié)構(gòu)中僅琥珀酸基團(tuán)含有生色團(tuán)，其最大吸收波長在216 nm左右，但吸收系數(shù)很小，需要較高的測定濃度，超過了溶出度測定的濃度要求（50 mg→1000 mL，50 μg/mL），但遇稀堿后結(jié)構(gòu)發(fā)生定量轉(zhuǎn)化，其產(chǎn)物在289 nm 處有一強(qiáng)吸收峰，紫外分光光度法就是利用青蒿琥酯這一性質(zhì)建立的定量分析方法。采用高效液相色譜法測定溶液的濃度要在4 mg/mL左右，若進(jìn)行溶出量測定，需將系統(tǒng)靈敏度增強(qiáng)80倍，勢必造成基線噪音增強(qiáng)，測定的準(zhǔn)確度下降。因而，采用衍生化的方法，通過堿水解生成助色基團(tuán)，使吸收峰紅移，吸收系數(shù)增加，達(dá)到紫外分光光度法測定要求。

青蒿素類化合物難溶于水、稀酸、稀堿、表面活性劑，易溶于非極性有機(jī)溶劑，但固體制劑在上述溶劑中難以崩解，更談不上溶出。對(duì)于難溶于水的藥物，一般不采用有機(jī)溶劑用于溶出度測定[10，11]。由于青蒿琥酯較差的溶解性，目前市場上相應(yīng)的劑型較少，另外青蒿琥酯具有誘導(dǎo)肝藥酶的作用，首過效應(yīng)明顯，且在體內(nèi)代謝快，導(dǎo)致用藥次數(shù)頻繁；若能通過改變劑型，使其在體內(nèi)緩釋，提高藥物的生物有效利用度，則能克服上述缺點(diǎn)，達(dá)到更有效治療的目的。筆者參照中國藥典2010年版二部青蒿琥酯片溶出度測定方法，采用紫外分光光度法進(jìn)行溶出量定量，結(jié)果可行并符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。此方法研究豐富和完善了中國藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)中國藥典所載方法的修訂有借鑒意義。

本法測定青蒿琥酯片溶出量方法尚可，但由于不同實(shí)驗(yàn)人員操作，其結(jié)果的準(zhǔn)確度與精密度均不夠良好。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，在衍生反應(yīng)中要嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度在50℃，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液的量也要根據(jù)樣品中的具體含量摸索出最佳的加入量，否則會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外青蒿琥酯穩(wěn)定性較差，在受熱時(shí)可水解為雙氫青蒿素。同時(shí)，其在體內(nèi)的代謝活性產(chǎn)物為雙氫青蒿素，因此，青蒿琥酯需在避光陰涼處保存。這種將青蒿琥酯衍生化后間接測定其含量的方法，操作煩瑣， 靈敏度較低，準(zhǔn)確度和精密度不高，故目前青蒿產(chǎn)業(yè)面臨的問題之一是盡快建立簡便、準(zhǔn)確的青蒿素含量測定方法。因而，我們針對(duì)此法還需進(jìn)一步的提高。參考文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，青蒿素的測定方法較多，由于此法為中國藥典所收載，因而我們現(xiàn)在仍選擇該法進(jìn)行溶出量的測定。

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[8] 殷果，李惠義，閆研，等. HPLC法測定青蒿素哌喹片中青蒿素的溶出度[J]. 藥物分析雜志，2014，34（2）：368-371.

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[11] 梁曉媛，李隆云，白志川. 青蒿中青蒿素提取工藝研究進(jìn)展[J]. 重慶理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2013， 27（2）：32-38.

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