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海洋石油降解菌的篩選鑒定及其功能基因研究*

2014-10-16 07:22吳福順黃澤瑜史曉翀張曉華
關(guān)鍵詞:烷烴芽孢引物

吳福順,王 龍,黃澤瑜,史曉翀,張曉華

(中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院 ,山東 青島266003)

海洋約占地球表面積的3/4,為人類(lèi)提供了豐富的生產(chǎn)、生活和空間資源。然而,隨著人類(lèi)對(duì)海洋資源的不合理開(kāi)發(fā)利用,海洋污染日益嚴(yán)重,對(duì)人類(lèi)的危害也愈發(fā)明顯。作為當(dāng)今及未來(lái)幾十年內(nèi)世界的主要能源,石油及其制品是主要的海洋污染源之一[1]。石油成分復(fù)雜,含量最多的是飽和鏈烷烴,在石油中的含量為50%~60%[2]。由于飽和烷烴極性官能基團(tuán)的缺乏和C-H鍵的高穩(wěn)定性,導(dǎo)致其具有低親水性和低化學(xué)活性,進(jìn)入海洋后,會(huì)在海面形成穩(wěn)定油膜,從而對(duì)海洋環(huán)境和海洋生態(tài)系統(tǒng)造成持久的、嚴(yán)重的危害[3-5]。

生物修復(fù)由于無(wú)污染、花費(fèi)低和操作簡(jiǎn)單,是目前治理海洋石油污染的最有前景的方法之一,其中高效石油降解菌在生物修復(fù)中發(fā)揮著舉足輕重的作用[5]。據(jù)報(bào)道,一共有79個(gè)屬的細(xì)菌可以把石油烴作為唯一的碳源和能源,海洋石油降解菌主要包括食烷菌屬(Alcanivorax)、解環(huán)菌屬(Cycloclasticus)、嗜油菌屬(Oleiphilus)、油螺旋菌屬(Oleispira)、深海彎菌屬(Thalassolituus)、海桿菌屬(Marinobacter)、芽孢桿菌屬(Bacillus)等[6-8]。編碼石油烴降解酶的基因是目前石油降解領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。細(xì)菌中的石油烴降解酶類(lèi)能夠?qū)⑹椭械亩栊詿N類(lèi)催化降解成為小分子物質(zhì),并以此作為生長(zhǎng)所需的碳源和能源。烷烴羥化酶AlkB[9-10]、細(xì)胞色素 P450[11-13],以及最近發(fā)現(xiàn)的黃素結(jié)合蛋白AlmA[14-16],都能夠催化烷烴降解的起始反應(yīng),參與烷烴氧化最關(guān)鍵的一環(huán),對(duì)石油污染的生物修復(fù)至關(guān)重要。

2011年渤海灣蓬萊19-3油田溢油事故,共造成超過(guò)840km2的海域水質(zhì)達(dá)劣四類(lèi)(劣于國(guó)家海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中4類(lèi)海水水質(zhì)),對(duì)渤海生態(tài)系統(tǒng)造成了極大危害。本研究以此為契機(jī),利用石油原油為唯一碳源,從實(shí)驗(yàn)室海洋微生物菌種庫(kù)中篩選鑒定具有石油降解活性的細(xì)菌,對(duì)篩選得到的菌株的石油烴降解酶基因進(jìn)行研究,為海洋石油污染的生物降解、工業(yè)上生物催化劑的開(kāi)發(fā)利用,提供菌株和基因資源。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

石油原油:勝利油田原油,由中國(guó)海洋大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院包木太教授惠贈(zèng)。

實(shí)驗(yàn)菌株:中國(guó)海洋大學(xué)海洋微生物菌種保藏中心(Marine Culture Collection,Ocean University of China,MCCO)菌株。其中,DSM14913和DSM6294購(gòu)自德國(guó)生物資源中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen),ZJ028分離自中國(guó)黃海 冷 水 團(tuán) 區(qū) 域,ZXM008、ZXM018、ZXM112 和ZXM183分離自中國(guó)青島匯泉灣滸苔爆發(fā)期近岸表層海水,WH069、WH072和 WH303分離自中國(guó)青島海水,COW02和COW10分離自中國(guó)萊陽(yáng)患病奶牛,F(xiàn)yb20和H61分離自中國(guó)青島文昌魚(yú)繁殖海域海水,SW100分離自南太平洋環(huán)流區(qū)表層海水。

2216E培養(yǎng)基:蛋白胨5g,酵母膏1g,F(xiàn)ePO40.01g,陳海水1L,調(diào)pH=7.6,121℃高壓蒸汽滅菌20min(下同)。

高鹽LB培養(yǎng)基:NaCl 30g,酵母膏5g,蛋白胨10g,去離子水1L,調(diào)pH=7.0,配固體培養(yǎng)基加瓊脂粉15g/L。

MMC 培養(yǎng)基:NaCl 24g,MgSO4·7H2O 7g,NH4NO31g,KCl 0.7g,KH2PO42g,Na2HPO43g,去離子水1L,調(diào)pH=7.4,高壓蒸汽滅菌后補(bǔ)加微量元素混合液5mL/L。

MMC微量元素混合液:CaCl22mg,F(xiàn)eCl3·6H2O 50mg,CuSO40.5mg,MnCl2·4H2O 0.5mg,ZnSO4·7H2O 10mg,去離子水1L。0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。

無(wú)機(jī)鹽原油培養(yǎng)基:50mL MMC培養(yǎng)基中加入250mg的原油。

主要儀 器:2720Termal Cycler PCR 儀 (Applied Biosystems);臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)科峻儀器公司);紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 海洋石油降解菌株的粗篩 菌株石油降解性能的測(cè)定采用紫外分光光度法[17]。將實(shí)驗(yàn)室菌種庫(kù)中菌株活化后分別接種至高鹽LB液體培養(yǎng)基中,28℃、200r/min過(guò)夜培養(yǎng)。將過(guò)夜富集培養(yǎng)的種子液于4℃、5 000r/min條件下離心10min,收集沉淀的菌體。用無(wú)菌MMC培養(yǎng)基按上述操作洗滌菌體2次后制成菌懸液,按2%(V/V)接種量接種于50mL無(wú)機(jī)鹽原油培養(yǎng)基中,于28℃、200r/min培養(yǎng)2周后,參照徐馮楠等萃取步驟[27],將培養(yǎng)液用石油醚(60~90℃沸程)萃取至50mL比色管中,定容,并搖勻。以石油醚為參比測(cè)定OD225。然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出吸光度對(duì)應(yīng)的殘油濃度。

石油降解率η的計(jì)算公式:

式中:C為空白對(duì)照萃取液的殘油濃度;S為樣品萃取液的殘油濃度。

1.2.2 高效石油降解菌的鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建

從篩選出的高效石油降解菌株中提取DNA,用通用引物B8F和B1510R(見(jiàn)表1),按相應(yīng)反應(yīng)體系和程序[22]進(jìn)行16SrRNA基因的PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物送往深圳華大基因科技有限公司測(cè)序,獲得的序列在EzTaxon-e Database核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)鑒定;選擇相似性較高的代表性序列,用 MEGA 5.05軟件構(gòu)建Neighborjoining系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),并用自舉法(Bootstrap method)1 000次重復(fù)測(cè)試進(jìn)化樹(shù)的可靠性。

1.2.3 石油烴降解酶基因的檢測(cè)和分析 克隆石油烴降解酶基因(alkB、P450和almA)所用的簡(jiǎn)并引物見(jiàn)表1。其中烷烴羥化酶基因alkB用2對(duì)引物alkBwf/r(目的片段長(zhǎng)約550bp)和monf/r(目的片段長(zhǎng)約420 bp),細(xì)胞色素P450單氧酶P450基因用2對(duì)引物P450F/R(目的片段長(zhǎng)約800bp)和 CYP153-F1/R2(目的片段長(zhǎng)約820bp),黃素結(jié)合單氧酶almA基因用一對(duì)引物 AlmAdf/r(目的片段長(zhǎng)約1 100bp),然后按照相應(yīng)反應(yīng)體系和程 序進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增[16,19-21]??寺y(cè)序具體步驟參照嚴(yán)書(shū)林[22],測(cè)序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行序列比對(duì),并用MEGA5.05做系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.2.4 耐鹽芽孢桿菌 WH072石油烴降解酶基因全長(zhǎng)的克隆與分析 根據(jù)石油降解菌石油降解率初篩結(jié)果,選取未被報(bào)道的高效石油降解菌株耐鹽芽孢桿菌(Bacillus halodurans)WH072利用高效熱不對(duì)稱(chēng)性交錯(cuò)PCR(hiTAIL-PCR)[23]進(jìn)行功能基因全長(zhǎng)的克隆,引物見(jiàn)表1。將各功能基因翻譯的氨基酸序列在NCBI上進(jìn)行BLAST比對(duì),然后用ClustalW比對(duì)其氨基酸序列和與之相似度高的蛋白序列。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物Table 1 The primers used in experiments

續(xù)表1

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 海洋石油降解菌株的粗篩

以原油為碳源,采用紫外分光光度法測(cè)定實(shí)驗(yàn)室菌種庫(kù)菌株的石油降解率,以篩選出高效石油降解菌。各菌株的石油降解率結(jié)果見(jiàn)圖1。從圖1可以看出,WH072、WH069、WH303、ZXM008、ZXM183這5個(gè)菌株的石油降解效果較好,尤其是WH072和WH069,其降解率分別為(36.4±1.0)%和(20.0±0.2)%。

圖1 各菌株的石油降解率Fig.1 Oil degradation rate of bacteria

2.2 高效石油降解菌的鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建

將測(cè)序獲得的16SrRNA基因序列在EzTaxon public數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì),相似度比較結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示,這5株菌與數(shù)據(jù)庫(kù)中標(biāo)準(zhǔn)菌株的相似度都高于97%。WH072基本可確定為耐鹽芽孢桿菌,且目前該種未有石油降解功能的報(bào)道。

表2 石油降解菌的種屬鑒定Table 2 Identification of oil degradation bacteria

石油降解菌株的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)見(jiàn)圖2。這5株菌大體上可以分為2簇,第一簇包括 WH069、ZXM183和ZXM008,屬于γ-變形菌綱(γ-Proteobacteria);WH303和 WH072組成第二簇,屬于厚壁菌門(mén)(Firmicutes)。已有較多的報(bào)道發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌屬、海桿菌屬及假單胞菌屬的菌株參與石油烴的降解過(guò)程[8]。此外,曾在多個(gè)石油污染環(huán)境中發(fā)現(xiàn)Bacillus屬的菌株[29-31],說(shuō)明將該屬細(xì)菌是一類(lèi)分布較為廣泛的石油降解菌。

圖2 石油降解菌株的16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree based on 16SrRNA gene sequence of the oil degradation bacteria

2.3 石油烴降解酶基因的檢測(cè)和分析

2.3.1 石油降解菌烴降解酶基因的PCR檢測(cè) 采用簡(jiǎn)并引物alkBf/r和 monf/r、P450F/R 和 CYP-F1/R2、AlmAdf/r(見(jiàn)表1)分別對(duì)石油降解菌的alkB、P450和almA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行凝膠電泳。結(jié)果顯示,對(duì)于前2種基因,WH072用引物monf/r獲得了長(zhǎng)約420bp的預(yù)期目的產(chǎn)物,用引物CYP-F1/R2獲得了長(zhǎng)約820bp的目的產(chǎn)物;WH069用引物alkBf/r獲得了長(zhǎng)約550bp的目的產(chǎn)物,用引物P450F/R獲得了長(zhǎng)約800bp的目的產(chǎn)物。利用引物AlmAdf/r從WH072和WH069中都擴(kuò)增到了長(zhǎng)約1 100bp的目的產(chǎn)物。另外3株菌WH303、ZXM183和ZXM008PCR擴(kuò)增后都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這3種基因的目的條帶。將所獲得的目的條帶切膠回收,克隆測(cè)序。

2.3.2 石油烴降解酶基因alkB、P450和almA的系統(tǒng)發(fā)育分析 將石油烴降解酶基因alkB、P450和almA的保守序列翻譯成氨基酸序列,然后將其在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì),選取GenBank中有代表性的AlkB、P450和AlmA蛋白全長(zhǎng)序列進(jìn)行比對(duì),用MEGA 5.05軟件中NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)研究所獲得的功能基因之間的進(jìn)化關(guān)系,設(shè)置自展值(Bootstrap)為1 000次來(lái)評(píng)估進(jìn)化樹(shù)的可信度[19]。結(jié)果見(jiàn)圖3~5。

圖3 石油降解菌株烷烴羥化酶AlkB部分氨基酸序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of the partial amino acid sequences of the(putative)alkane hydroxylases(AlkBs)

由圖3可知,AlkB序列大致可以分為2支。其中WH069和 M.aquaeolei VT8AlkB(YP_960105)(相似度為94%)、M.hydrocarbonoclasticus AlkB (YP_005430622)(相似度為95%)聚為一簇,它們之間的alkB基因同源性很高,因此基因功能應(yīng)該比較一致,底物范圍接近。對(duì)于WH072來(lái)說(shuō),其AlkB與A.hongdengensis A-11-3AlkB (ZP_11171736)最為接近,兩者的相似度僅為89%,與其他菌的AlkB親緣關(guān)系較遠(yuǎn),所以推測(cè)其alkB基因是一個(gè)相對(duì)較新的烷烴羥化酶基因,其表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)、功能和降解底物范圍有待深入研究。

圖4 石油降解菌株細(xì)胞色素P450的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of the partial amino acid sequences of the(putative)cytochrome P450

從圖4可以看出,這2株菌的P450序列可以聚為2簇。M.hydrocarbonoclasticus的細(xì)胞色素P450是單氧酶的典型成員,WH069的P450蛋白與其有很高的同源性(高達(dá)100%)。WH072與B.licheniformis P450 (ACP39677)、Alcanivorax sp.S14-2P450(ACP39680)的相似度分別為100%和99%,說(shuō)明不同種屬石油降解菌的P450有很高的相似性。

圖5 石油降解菌株黃素結(jié)合蛋白AlmA的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.5 Phylogenetic tree of the partial amino acid sequences of the(putative)flavin-binding protein AlmAs

圖5 顯示,WH069的黃素結(jié)合蛋白AlmA蛋白與M. hydrocarbonoclasticus ATCC 49840AlmA(CCG97212、YP_005431635)、M.aquaeolei VT8AlmA(YP_961086)可聚為一簇,序列相似度分別高達(dá)100%、99%。WH072的AlmA蛋白和A.borkumensis SK2 AlmA (YP_692002)(92%)、A.jadensis AlmA(ACO56905)(100%)也聚成了一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的分支,其與食烷菌屬的AlmA序列相似度很高,功能可據(jù)此推測(cè)。

2.4 耐鹽芽孢桿菌WH072石油烴降解酶基因全長(zhǎng)的克隆與分析

為獲得未被報(bào)道的高效石油降解菌株耐鹽芽孢桿菌WH072的石油烴降解酶基因的全長(zhǎng)序列,用hi-TAIL方法進(jìn)行基因片段兩端序列的擴(kuò)增,然后進(jìn)行比對(duì)拼接,從而得到了其基因的全長(zhǎng)序列。WH072石油烴降解酶基因全長(zhǎng)序列比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 WH072石油烴降解酶基因全長(zhǎng)序列分析Table 3 Analysis of full-length genes encoding hydrocarbon-degrading enzymes of WH072

經(jīng)過(guò)BLASTP比對(duì),WH072的AlkB蛋白與紅燈食烷菌(A.hongdengensis)A-11-3的AlkB1和AlkB2的相似度分別為77%和76%,與泊庫(kù)島食烷菌(A.borkumensis)SK2AlkB的相似度為74%;P450蛋白與紅燈食烷菌(A.hongdengensis)A-11-3P450和Alcanivoraxsp.DG881P450的相似度均為95%,與柴油食烷菌(A.dieselolei)P450有92%的相似度;AlmA蛋白與亞德食烷菌(A.jadensis)的AlmA有99%的相似度,但該菌的AlmA只是部分蛋白片段,不是完整蛋白,與泊庫(kù)島食烷菌(A.borkumensis)SK2 AlmA和紅燈食烷菌(A.hongdengensis)A-11-3AlmA分別具有90%和86%的相似度。

3 討論

目前已報(bào)道能夠降解海洋石油污染物的微生物包括細(xì)菌、真菌和藻類(lèi),分屬于200多個(gè)屬,其中79個(gè)屬的細(xì)菌可以把石油烴作為唯一的碳源和能源[6-8]。

為海洋石油污染的生物修復(fù)提供菌株和基因材料,本研究從實(shí)驗(yàn)室菌種庫(kù)中的15株細(xì)菌中篩選出5株對(duì)石油原油降解效果較好的菌株,其中石油降解率最高的菌株為耐鹽芽孢桿菌WH072,且該菌的石油降解特性為首次報(bào)道。芽孢桿菌屬是石油污染區(qū)域的優(yōu)勢(shì)菌群之一,本研究中具有一定石油降解特性的WH303也屬于芽孢桿菌屬。Said等和Chikere等均從海洋沉積物中分離到了可以降解石油烴的芽孢桿菌[29-30]。王海峰等分離到的一株枯草芽孢桿菌(B.subtilis)對(duì)石油的降解率達(dá)到34.3%[31],而本研究中WH072對(duì)于原油的降解率達(dá)到36.4%,該菌株在石油污染生物修復(fù)領(lǐng)域具有較好的開(kāi)發(fā)前景。

海桿菌屬也是分離最多的石油降解菌屬之一,具有較高的出現(xiàn)頻率和多樣性。除烴海桿菌在1992年首次從地中海煉油廠附近的海水中被分離描述,其后又有14種海桿菌被從不同的環(huán)境中分離鑒定[32-33]。WH069與除烴海桿菌(M.hydrocarbonoclasticus MBIC1303T)的相似度是98.0%。該菌株對(duì)于石油的降解率為20.0%,因此該菌株對(duì)于石油污染防治也具有重要應(yīng)用價(jià)值。

烷烴羥化酶AlkB家族和細(xì)胞色素P450家族在石油烴降解酶基因中是被研究的最為廣泛和深入的,兩者主要負(fù)責(zé)短中鏈烷烴的降解,AlmA為最近才報(bào)道的專(zhuān)門(mén)降解長(zhǎng)鏈烷烴的黃素結(jié)合蛋白,其研究剛剛起步。很多參與石油降解過(guò)程的高效石油降解菌都具有多種石油烴降解酶基因,如高效烷烴降解菌泊庫(kù)島食烷菌(A.borkumensis)SK2含有2個(gè)alkB基因和1個(gè)P450基因[34]。這種多個(gè)烷烴羥化酶基因存在于同一菌株中的現(xiàn)象可能有助于提高菌株的降解效率[35]。鑒于這5株菌具有較高的石油降解率,對(duì)這5株菌進(jìn)行石油烴降解酶基因alkB、P450和almA的檢測(cè)。本研究在WH069和WH072中都獲得了alkB、P450和almA基因片段,說(shuō)明這2種菌對(duì)長(zhǎng)、中、短鏈的烷烴均有降解能力,底物范圍較廣。這與紫外分光光度法所測(cè)得的這兩株菌的石油降解率都很高(>20%)相吻合,可能是這兩株菌具有較強(qiáng)石油降解能力的原因。綜合3種石油烴降解酶基因的系統(tǒng)發(fā)育分析及其氨基酸序列分析結(jié)果,WH072所含有的alkB基因與其他菌株的相似性相對(duì)較低,其結(jié)構(gòu)和功能可能與現(xiàn)有菌株有差異。

值得注意的是,與革蘭氏陽(yáng)性菌之間alkB基因差異較小的情況不同,革蘭氏陰性菌的alkB序列變化多樣。16SrRNA基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分析能夠比較準(zhǔn)確的反映分離的不同石油降解菌在分類(lèi)學(xué)上的地位,但是基于alkB基因的氨基酸序列所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),不同菌株所處的系統(tǒng)發(fā)育位置發(fā)生了明顯改變。這是因?yàn)槲⑸锏?6SrRNA基因在不同菌種之間相對(duì)保守,而alkB基因往往定位于染色體可轉(zhuǎn)移元件和/或質(zhì)粒上,能夠在不同菌株間發(fā)生轉(zhuǎn)移。即使基因整合在菌株的染色體上,由于其受到環(huán)境因素的影響而不斷發(fā)生變異,從而產(chǎn)生該基因的多樣性[24]。即使在同一水域,表層海水和深層海水中同一菌種不同菌株之間的alkB基因也存在很大差異[19]。對(duì)于石油烴降解微生物群落,現(xiàn)在研究比較廣泛的是烷烴羥化酶家族基因,而alkB基因是該家族中編碼關(guān)鍵酶的基因之一,對(duì)菌種所在環(huán)境的生態(tài)學(xué)功能分析具有極其重要的意義。

對(duì)比16SrRNA基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)可以發(fā)現(xiàn),P450基因與細(xì)菌菌種有一定的相關(guān)性,WH069和WH072均與自身所在屬的菌種有高度同源性的P450基因。相比較而言,alkB和almA在種間的分布規(guī)律性較低,文獻(xiàn)表明alkB和P450基因在食烷菌屬(Alcanivorax)的細(xì)菌中廣泛存在[19]。almA基因的研究剛起步,有關(guān)報(bào)道較少,是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)[16]。耐鹽芽孢桿菌WH072的3種石油烴降解酶基因全長(zhǎng)氨基酸序列比對(duì)結(jié)果表明其與食烷菌屬的石油降解相關(guān)功能蛋白具有最高的相似度,推測(cè)其功能基因可能來(lái)自于食烷菌屬。但是耐鹽芽孢桿菌WH072 alkB基因編碼的蛋白與最相近的食烷菌屬相關(guān)蛋白相似度不高(77%),這可能是由基因可轉(zhuǎn)移元件在菌株間水平轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)生了結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致的[24]。在獲得的菌株中,耐鹽芽孢桿菌WH072是本研究新發(fā)現(xiàn)的具有石油降解特性的菌種,其石油降解率很高,且功能基因也很新穎,具有極大的研究?jī)r(jià)值。

石油降解菌廣泛存在于海洋中,它們中很多生存在營(yíng)養(yǎng)極為缺乏的“海洋沙漠”中,各種與石油降解相關(guān)的功能基因保證其能夠適應(yīng)極端環(huán)境,使它們能夠利用石油烴類(lèi)物質(zhì)作為營(yíng)養(yǎng)成分。然而,本文中克隆的基因只是其功能基因的很小一部分,蘊(yùn)含著巨大遺傳密碼的寶庫(kù)正等待著開(kāi)發(fā)。

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