王文龍，崔 欣，李成成，邢 星，安立龍,，許英梅

1. 廣東海洋大學 動物科學系, 湛江 5240882. 欽州保稅港出入境檢驗檢疫局, 欽州 535008

飼料中銅暴露對吉富羅非魚幼魚血紅細胞微核和組織中銅蓄積的影響

王文龍1，崔 欣1，李成成1，邢 星2，安立龍1,*，許英梅1

1. 廣東海洋大學 動物科學系, 湛江 5240882. 欽州保稅港出入境檢驗檢疫局, 欽州 535008

為了研究飼料中銅暴露對吉富羅非魚幼魚的毒性作用，將1 080條羅非魚幼魚暴露于6個濃度梯度的高銅日糧中，通過60 d的暴露試驗，測定羅非魚血紅細胞微核變化和組織中銅的蓄積。結(jié)果表明，銅在各組織中積累量的順序依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，與對照組相比，其中肝臟、脾臟、腸道中銅的含量隨著時間和日糧中銅濃度的升高而逐漸升高，而鰓和肌肉中銅含量無顯著差異；羅非魚幼魚血紅細胞微核率、核異常率、總核異常率與日糧中銅的濃度存在一定的劑量—效應關系，并且核異常率高于微核率。

銅暴露；蓄積；組織；血紅細胞；微核率；吉富羅非魚

羅非魚是世界性的主要養(yǎng)殖魚類之一，隸屬于鱸形目、麗魚科、羅非魚屬，是一種淡咸水兩棲性的中小型魚類，具有生長繁育快，產(chǎn)量高，食性雜，抗性強，肉質(zhì)好等優(yōu)點，深受養(yǎng)殖戶和消費者的喜愛。廣東省憑借其優(yōu)越的地理和氣候條件，是我國養(yǎng)殖羅非魚最早的省份，也是我國最大和產(chǎn)量最高的羅非魚產(chǎn)地。2009年，廣東羅非魚產(chǎn)量已達全國總產(chǎn)量的47%，約為59萬t，2010年產(chǎn)量達到60萬t，并呈現(xiàn)逐年增長的態(tài)勢[1]，2012年廣東出口的羅非魚高居全國第一，并在北美占有相當高的市場份額[2]。但隨著社會工業(yè)化進程的加快，作為改革開放最前沿的廣東省所承受的重金屬污染也越發(fā)嚴重，直接威脅羅非魚等經(jīng)濟水生生物的安全和產(chǎn)品品質(zhì)，影響其養(yǎng)殖和出口。近年來，重金屬污染對生物體的毒性作用成為新的研究熱點。

銅(copper)是生物體必須的微量元素之一，也是主要的重金屬之一，過量的銅會產(chǎn)生毒性效應[3]，對生物體機體造成嚴重損害，與此同時，銅在水生生物體內(nèi)的蓄積更是帶來了不容忽視的食品安全隱患[4]，引發(fā)人們的廣泛關注。目前關于飼料中高銅脅迫對畜禽的毒性作用的報道比較多，但飼料中銅暴露對魚類的毒性研究很少，未見飼料中銅暴露對羅非魚組織蓄積和遺傳毒性的報道，少數(shù)的相關研究僅限于對銅最適添加量的探索，但實際上魚飼料中銅的添加量往往大于其實際需要量，在不同條件下的需要量也不盡相同[5]，本文以飼喂銅暴露飼料的吉富羅非魚幼魚為模型，研究飼料中過量銅對羅非魚的毒性作用，探究飼料中銅暴露對吉富羅非魚幼魚血紅細胞微核以及組織中銅的蓄積的影響。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試驗動物與材料

試驗魚由廣東省吳川國聯(lián)羅非魚良種場提供，試驗前用藥浴消毒，用對照組飼料馴養(yǎng)15 d，使其適應試驗環(huán)境及試驗飼料，選擇健康無病、活躍靈敏的個體作為試驗用魚；試驗中銅以CuSO4·5H2O(分析純，上海易蒙斯化工科技有限公司)形式添加。

1.2 試驗飼料

以魚粉、豆粕、玉米粉、面粉、磷酸二氫鈣、豆油、膽堿、食鹽、預混料為基礎飼料，所有原料經(jīng)粉碎后過60目篩后混勻，采用逐級擴大法混合，日糧中設計銅的添加梯度為：0 mg·kg-1、3 mg·kg-1、30 mg·kg-1、300 mg·kg-1、1 000 mg·kg-1、3 000 mg·kg-16個水平，試驗基礎日糧及營養(yǎng)組成見表1。

表1 試驗基礎日糧及營養(yǎng)成分(飼喂基礎)Table 1 Ingredients and nutrient composition of basal diet(fed-basis)

注：*每千克預混料含VA 350 000 IU、VD3100 000 IU、VE 4 000 mg、VK3250 mg、VB1400 mg、VB21 500 mg、VB6600 mg、VB122.5 mg、D-泛酸鈣2 000 mg、煙酰胺2 500 mg、葉酸250 mg、D-生物素5 mg、肌醇7 000 mg、VC 6300 mg、鋅2 250 mg、錳1 200 mg、鐵6 500 mg、鈷120 mg、碘120 mg、硒25 mg。

Note： *Each kilogram of premix provided：VA 350 000 IU、VD3100 000 IU、VE 4 000 mg、VK3250 mg、VB1400 mg、VB21 500 mg、VB6600 mg、VB122.5 mg、calcium d-pantothenate 2 000 mg、nicotinamide 2 500 mg、folic acid 250 mg、biotin 5 mg、Inositol 7 000 mg、VC 6300 mg、Zn 2 250 mg、Mn 1 200 mg、Fe 6 500 mg、Co 120 mg、I 120 mg、Se 25 mg.

1.3 試驗分組與飼養(yǎng)管理

選取健康無病的羅非魚1 080尾，將其分為6組(見表2)，每組3個重復，每個重復60尾，飼養(yǎng)在規(guī)格為500 L的玻璃鋼魚缸中?？諝鈮嚎s機24 h增氧，每3 d換水1/2缸，每天上午9點和下午6點投放兩次相應組別的飼料，日投料量為魚體重的3%(每10 d測一次魚的平均體重，及時調(diào)整日投料量)，30 min后將剩余餌料吸出，烘干稱重，每天觀察記錄水溫、羅非魚攝食和死亡情況。

1.4 樣品采集與指標測定

試驗第20天、40天、60天各分別取樣一次，取樣前饑餓24 h，每次每個重復分別取12條羅非魚，其中取4尾進行尾靜脈采血，微核試驗的測定參見何理平等[8]的方法；剩余8尾采用搗毀腦髓法將魚處死，取出肌肉、鰓、脾臟、肝臟、空全腸，用0.65%的

表2 試驗分組Table 2 Design of groups

生理鹽水漂洗并濾干，取樣品加硝酸和高氯酸濕消解，用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS，美國安捷倫科技有限公司)測定樣品中銅的含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 20.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，采用Duncan’s法多重比較差異的顯著性，差異顯著定義為P<0.05，數(shù)據(jù)采用“平均數(shù)±標準差”來表示。

2 結(jié) 果(Results)

2.1 飼料銅暴露對吉富羅非魚血紅細胞微核的影響

20 d時，對照組和第Ⅰ組沒有微核，而其余各組間無顯著差異(p>0.05)，微核率最高是第Ⅴ組，為(0.32±0.02)‰。核異常率隨著日糧中銅含量的升高逐漸升高，其中最高為第Ⅴ組(1.09±0.05)‰?？偤水惓Ｂ室搽S銅含量的升高逐漸升高，第Ⅳ組和第Ⅴ組的總核異常率分別為(1.13±0.04)‰和(1.41±0.03)‰，顯著高于其它組(p<0.05)，而其它組間無顯著差異(p>0.05)。

40 d時，第Ⅳ組和第Ⅴ組的微核率顯著高于對照組(p<0.05)，前三組與對照組無顯著差異(p>0.05)。核異常率隨著銅含量的升高而有不同程度的上升，第Ⅳ組和第Ⅴ組的核異常率顯著高于對照組(p<0.05)，分別為(1.20±0.02)‰和(1.27±0.05)‰。高劑量組的總核異常率上升的幅度大于低劑量組，第Ⅴ組總核異常率最高(1.66±0.04)‰，與對照組相比升高1.43‰。

表3 銅對羅非魚血紅細胞微核的影響Table 3 Effects of dietary copper on micronucleus in erythrocytes of tilapia

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(p<0.05)，同行肩標中大寫字母完全不同表示差異顯著(p<0.05)，有相同字母或無字母表示差異不顯著(p>0.05)，大小寫字母間不比較。下表同。

Note: In the same column, values with different lowercase superscripts mean significant difference(p<0.05). In the same row, values with different uppercase superscripts mean significant difference(p<0.05). While with the same letter or no letter mean no significant difference(p>0.05), and there is no contrast between lowercase and uppercase. The same below.

60 d時，第Ⅳ組的微核率最高，為(0.57±0.03)‰，第Ⅴ組略低于第Ⅳ組，為(0.48±0.01)‰，兩者間無顯著差異(p>0.05)，但都顯著高于對照組。核異常率隨著銅含量的升高有逐漸升高的趨勢，第Ⅴ組最高(1.34±0.04)‰?？偤水惓Ｂ适堑冖踅M最高，相比對照組升高1.61‰，比第Ⅳ組高0.07‰，各組間差異顯著(p<0.05)。

隨著日糧中銅暴露時間的延長，同一組微核率、核異常率和總核異常率均有不同程度的升高。前40 d，第Ⅳ組和第Ⅴ組核異常率升高幅度較大，而前三組的微核率變化不明顯。說明隨著日糧銅暴露時間的延長和銅含量的升高，羅非魚血細胞損傷加重。2.2 飼料銅暴露對吉富羅非魚組織中銅蓄積的影響

2.2.1 飼料銅暴露對吉富羅非魚腮中銅蓄積的影響

由表4可以看出，在第40天和60天時，各組間鰓中銅的含量隨著日糧中銅濃度的升高有增加的趨勢，第60天時，第Ⅴ組鰓中銅的含量達到最高，為3.16±0.51 mg·kg-1。隨著銅暴露時間的延長，銅在鰓中的積累無顯著變化。其中第Ⅲ組和第Ⅳ組鰓中銅的含量在第40天時達到最高，分別為3.10±0.29 mg·kg-1和2.87±0.47 mg·kg-1，對照組、Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅴ組均在第60天時達到最高。說明日糧中銅暴露對羅非魚鰓中的銅的積累無顯著影響，但隨著添加銅暴露時間的延長有升高的趨勢。 2.2.2 飼料銅暴露對吉富羅非魚脾臟中銅蓄積的影響

由表5可以看出，在第20天時，各組脾臟中銅含量無顯著差異，但第Ⅴ組含量最高12.20±0.24 mg·kg-1。第40天時，對照組與第Ⅰ組無顯著差異，第Ⅱ組脾臟中銅含量為20.16±0.23 mg·kg-1，較對照組顯著升高(P<0.05)，第Ⅴ組最高，為29.54±0.52 mg·kg-1，Ⅳ組和Ⅴ組間無顯著差異(P>0.05)。第60天時，隨著日糧中銅濃度的升高各組脾臟中銅的積累量也隨之升高，且差異顯著(P<0.05)，第Ⅴ組達到最高，為45.76±3.13 mg·kg-1。

表4 銅在羅非魚鰓中的積累Table 4 Copper accumulation in gill of tilapia

表5 銅在羅非魚脾臟中的積累Table 5 Copper accumulation in spleen of tilapia

對照組脾臟中銅的積累隨日糧中銅暴露時間的延長而有所增加，但不顯著。第Ⅰ組腸道中銅的含量在第20天和第40天時與開始時比較仍無顯著變化，但到第60天時上升到18.74±0.23 mg·kg-1。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅴ組脾臟中銅的積累量在第40天和60天時都顯著升高，第Ⅴ組升高的幅度最大，在第60天時為45.76±3.13 mg·kg-1。說明隨著日糧中銅暴露時間的延長和日糧中銅濃度的升高，銅在羅非魚脾臟中顯著積累。

2.2.3 飼料銅暴露對吉富羅非魚肝臟中銅蓄積的影響

如表6所示，隨著飼料中銅的含量的升高各組肝臟中銅的積累量也隨之增加，第Ⅴ組肝臟中銅含量最高，為63.23±3.14 mg·kg-1，與對照組相比顯著升高(P<0.05)。第40天和60天時，各組肝臟中銅的含量均隨著飼料中銅的升高而增加，且各組間差異顯著(P<0.05)。

表6 銅在羅非魚肝臟中的積累Table 6 Copper accumulation in liver of tilapia

隨著銅暴露時間的延長，對照組肝臟中銅的含量無顯著變化，但是其它組肝臟中銅的含量隨之增加，而且差異顯著(p<0.05)，以第Ⅴ組在60天時含量最高，為102.3±16.54 mg·kg-1。說明隨著銅暴露時間的延長和日糧中銅濃度的升高，銅在羅非魚肝臟中顯著積累。2.2.4 飼料銅暴露對吉富羅非魚腸道中銅蓄積的影響

由表7可知，第20天時，對照組與第Ⅰ組無顯著差異，分別為3.17±0.15 mg·kg-1和3.16±0.41 mg·kg-1。之后隨著日糧中銅的升高其它各組腸道中銅的含量逐漸增加。第40天時，第Ⅴ組腸道中銅的含量最高，為26.42±4.10 mg·kg-1，顯著高于對照組(p<0.05)。第60天時，隨著日糧中銅的升高，各組腸道中銅的積累也逐漸上升，第Ⅴ組腸道中銅含量最高，為48.61±6.13 mg·kg-1，較對照組顯著升高(P<0.05)。

隨著日糧中銅暴露時間的延長，對照組腸道中銅的積累量無顯著影響(p>0.05)，其它各組腸道中銅的含量均隨著暴露時間的延長而增加，第Ⅴ組腸道中銅含量在第20天時為11.24±1.82 mg·kg-1，而到第60天時升高到48.61±6.13 mg·kg-1。說明隨著日糧中銅暴露時間的延長，高劑量的銅可在羅非魚腸道中積累。2.2.5 飼料銅暴露對吉富羅非魚肌肉中銅蓄積的影響由表8可知，第20天時，各組間肌肉中銅的積累并無顯著差異(p>0.05)，第40天時，第Ⅳ組和第Ⅴ組肌肉中銅的積累分別為2.29±0.02 mg·kg-1和2.42±0.10 mg·kg-1，顯著高于對照組(p<0.05)。第60天時，第Ⅴ組達到最高為3.10±0.13 mg·kg-1。

對照組、第Ⅰ組、第Ⅱ組肌肉中銅的含量隨著日糧中銅暴露時間的延長無顯著變化，基本上呈現(xiàn)出先升高再降低再升高的趨勢，而Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組肌肉中銅的積累都隨著暴露時間的延長而有不同程度的增加，說明高劑量的銅隨著添加銅暴露時間的延長可在羅非魚肌肉中慢慢積累。

表7 銅在羅非魚腸道中的積累 Table 7 Copper accumulation in intestine of tilapia

表8 銅在羅非魚肌肉中的積累Table 8 Copper accumulation in muscle of tilapia

3 討 論(Discussion)

3.1 飼料銅暴露對吉富羅非魚血紅細胞微核的影響

微核實驗是用來檢測動物細胞受外界有害物質(zhì)損害程度的一種方法，該方法快速、簡單、有效，由Matter和Schmide在20世紀70年代初建立的[9]。微核是指在胞漿中獨立于主核的核小體，它的染色比主核淡，直徑一般在主核的1/4以下。它的形成主要是因為受到外界有害因素的影響，在細胞分裂后期時，無著絲點的染色體斷裂產(chǎn)生的斷片或者染色體落后而沒有進入子代細胞的細胞核里，滯留在間期的子代細胞漿內(nèi)形成微核[10]。

在本實驗中，各組間隨著日糧中銅含量的增加，微核率、核異常率、總核異常率均有不同程度的升高，對照組與第Ⅰ組、第Ⅱ組間無顯著差異，而第Ⅳ組和第Ⅴ組顯著高于對照組。這說明高劑量的銅會對羅非魚造成一定的損害。這與王利等的研究結(jié)果一致。而薛良義等[11]報道，隨著水中銅濃度的升高，黃鱔細胞微核率開始上升，到12 h以后又下降，說明黃鱔在12 h以后對有害物質(zhì)產(chǎn)生抵抗力，抑制了微核的產(chǎn)生?？赡懿煌N類的魚對有害物質(zhì)的反應存在差異，且與染毒時間的長短有關。

在本研究中，核異常率比微核率高，可能是因為微核率的高低不僅與有害物質(zhì)或紡錘體抑制劑的強弱有關，而且還與細胞有絲分裂的速度有關。而且微核率與核異常率出現(xiàn)的最高值也不一致，第Ⅳ組的微核率在第60天時達到最高，而核異常率在第40天最高。在第40天和60天時，微核率都是第Ⅳ組最高，而核異常率是第Ⅴ組最高，這可能是高銅誘發(fā)羅非魚紅細胞微核和核異常的作用機理不同，銅抑制羅非魚的紡錘體行成而產(chǎn)生核異常，使微小核物質(zhì)滯留在質(zhì)核外的時間、程度不一致，同時也表明細胞內(nèi)產(chǎn)生微核與核異常的時間并不完全同步。

3.2 飼料銅暴露對吉富羅非魚不同組織中銅蓄積的影響

我國《農(nóng)產(chǎn)品安全質(zhì)量—無公害水產(chǎn)品安全要求》[12]和《無公害食品—水產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)限量》[13]中規(guī)定，水產(chǎn)品中銅的含量不能超過50 mg·kg-1。本試驗中，在養(yǎng)殖第20天時，第Ⅴ組中肝臟的銅含量已經(jīng)達到63.23 mg·kg-1。到第40天時，第Ⅳ組中肝臟銅含量為56.52 mg·kg-1，第Ⅴ組肝臟銅含量達到98.64 mg·kg-1。養(yǎng)殖到60天時，第Ⅲ、第Ⅳ和第Ⅴ組肝臟中銅的含量分別達到60.19 mg·kg-1、89.80 mg·kg-1、102.30 mg·kg-1。因此，肝臟中銅的含量都已經(jīng)超過我國對水產(chǎn)品中銅含量的限定。說明飼料中銅含量為3 086.76 mg·kg-1時，對羅非魚肝臟已經(jīng)造成威脅，應禁止添加如此高的銅。日糧中銅含量分別為334.47 mg·kg-1和1 057.29 mg·kg-1時，分別在第60天和40天時，肝臟中銅含量也超過國家限定，因此也應該減少銅的添加量。在其它組織內(nèi)銅的含量均低于國家限定標準，但在試驗結(jié)束時，第Ⅴ組脾臟和腸道中銅的含量已經(jīng)達到45.26 mg·kg-1和48.61 mg·kg-1，接近國家的限定標準。而肌肉中銅的含量最少，且遠遠低于國家的限定標準，這對食品安全來說還是很有利的。

李湘萍等[14]研究了銅在養(yǎng)殖對蝦組織中的積累，發(fā)現(xiàn)銅在肝胰腺中的積累最高，在肌肉中的積累最低。馬桂云等[15]報道了銅在鯽魚體內(nèi)的積累特征，同樣發(fā)現(xiàn)，銅在各組織內(nèi)的積累量具有很大差異，且內(nèi)臟>鰓>肌肉。Paez等[16]、Pourang等[17]、Morales等[18]和賀亮等[19]也得出了相似的結(jié)論。這與本研究的結(jié)果一致，肝臟中銅的含量最高，且隨著時間的延長和日糧中銅含量的升高顯著增加，而肌肉中銅的含量最少，且各組間無顯著差異。這可能是因為肌肉中的銅有自我平衡的調(diào)節(jié)能力，銅的沉積可以受到機體控制。而肝臟是主要的解毒器官，它可以過濾除去外來的有毒物質(zhì)。因此，肝臟對銅具有很強的累積作用，肝臟中銅的含量可以作為評價銅狀態(tài)的一個靈敏指標。

脾臟是魚類的造血器官同時也是重要的免疫器官。在本實驗中，銅在各組織中的蓄積由多到少依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，可見肝臟是動物存儲銅的主要器官，積累最多，而銅在脾臟中積累的也比較高。在前期，各組的脾臟中銅的含量無顯著差異，但在中后期脾臟中銅的含量隨著日糧中銅的含量開始逐漸升高，且第Ⅴ組在試驗結(jié)束時，銅含量達到45.26 mg·kg-1，已經(jīng)接近我國水產(chǎn)品中對銅的限定標準。銅在脾臟中的大量積累可能會對羅非魚的免疫功能造成一定影響。蔣蓉[20]在用不同水平銅的飼料投喂黃顙魚后，也發(fā)現(xiàn)銅在肝臟、脾臟、腦和卵巢中的積累較多。Gretehen等[21]用銅含量為5、571、785、1 013 μg·g-1的飼料喂養(yǎng)雜交斑紋鱸14 d，發(fā)現(xiàn)腸和肝臟中銅含量最高達45 mg·kg-1和120 mg·kg-1左右。

本實驗以吉富羅非魚為研究對象，分別在飼料中添加0、3、30、300、1 000、3 000 mg·kg-1銅，研究了對其紅細胞微核和與組織中銅的蓄積的影響，得出以下主要結(jié)論：1、銅在各組織中積累的順序依次為：肝臟>脾臟>腸道>鰓>肌肉，其中肝臟、脾臟、腸道中銅的含量隨著時間和日糧中銅的濃度的升高而逐漸升高，而鰓和肌肉中銅含量無顯著差異；2、羅非魚幼魚血紅細胞微核率、核異常率、總核異常率與日糧中銅的濃度具有一定的劑量—效應關系，且核異常率高于微核率。

致謝：感謝廣東海洋大學動物科學系412實驗室全體同仁，以及廣東恒興集團湛江恒興水產(chǎn)科技有限公司、廣東吳川國聯(lián)羅非魚良種場對本試驗的支持和幫助。

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EffectsofDietaryCopperExposureonMicronucleusofErythrocyteandAccumulationinDifferentTissuesofJuvenileGIFTTilapia(Oreochromisniloticus)

Wang Wenlong1, Cui Xin1, Li Chengcheng1, Xing Xing2, An Lilong1,*, Xu Yingmei1

1. Department of Animal Science, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China2. Free Trade Port Aera Entry-Exit Inspection and Quarantine, Qinzhou 535008, China

15 May 2014accepted22 August 2014

In this study, the effects of dietary copper exposure on juvenile GIFT tilapia were investigated. 1 080 juvenile GIFT tilapia were exposed under 6 different concentrations of high-dose copper diets for 60 days. Micronucleus changes of erythrocyte and accumulations of copper in different tissues were observed. The results showed that accumulations of copper in different tissues were liver> spleen> intestine> gill> muscle. Among them, accumulations of copper in liver, spleen and intestine gradually increased with exposure time and copper accumulation in diets. And compared with control group, the difference was significant. However, the accumulations of copper in gill and muscle were not significant. There was a positive dose-effect relationship between micronucleus rate, frequency of nuclear anomalies, total frequency of nuclear anomalies of erythrocyte in juvenile GIFT tilapia and copper dose in diets. Moreover, the frequency of nuclear anomalies was higher than micronucleus rate.

copper exposure; accumulation; tissue; erythrocyte; micronucleus rate; GIFT tilapia

2014-05-15錄用日期：2014-08-22

1673-5897(2014)4-757-08

： X171.5

： A

安立龍(1967-)，男，動物遺傳育種學博士，教授，主要研究方向為動物營養(yǎng)與環(huán)境，發(fā)表相關學術論文80余篇。

廣東省科技計劃項目(2010B090400376)

王文龍(1989-)，男，碩士，研究方向為動物營養(yǎng)與環(huán)境，E-mail: wangwenlong2012@yeah.net；

*通訊作者(Corresponding author)，E-mail: anlilong@126.com

10. 7524/AJE. 1673-5897. 20140515017

王文龍，崔 欣，李成成, 等. 飼料中銅暴露對吉富羅非魚幼魚血紅細胞微核和組織中銅蓄積的影響[J]. 生態(tài)毒理學報, 2014, 9(4): 757-764

Wang W L, Cui X, Li C C, et al. Effects of dietary copper exposure on micronucleus of erythrocyte and accumulation in different tissues of juvenile GIFT tilapia (Oreochromisniloticus) [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2014, 9(4): 757-764 (in Chinese)