秦亞東，周娟娟，李 飛，周 宙

（1.安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校，安徽蕪湖241002;2.蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院，安徽蕪湖 241000，3.亳州市食品藥品檢驗所，安徽亳州 236800）

白芍生品及其炮制品中多糖及總糖的含量測定

秦亞東1，周娟娟2，李 飛3，周 宙1

（1.安徽中醫(yī)藥高等專科學校，安徽蕪湖241002;2.蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院，安徽蕪湖 241000，3.亳州市食品藥品檢驗所，安徽亳州 236800）

目的 比較不同炮制方法對白芍生品及其炮制品中多糖及總糖的含量變化。方法 采用硫酸-苯酚顯色，使用紫外分光光度法在490 nm波長下測定吸光度。結果 白芍生品及其各種不同炮制品中多糖含量從高到低依次為:酒白芍＞白芍生品＞炒白芍;總糖含量從高到低依次為:酒白芍＞炒白芍＞白芍生品。結論 白芍生品及其炮制品中多糖及總糖含量存在顯著性差異，不同的炮制工藝對白芍糖類成分的含量有一定的影響。

白芍;生品;炮制品;多糖;總糖

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，藥用白芍味苦、酸，微寒，歸肝脾經(jīng)。具有養(yǎng)血調經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽之功［1］。亳州所產(chǎn)白芍，又稱為“亳白芍”，為安徽四大明藥之一，是一種臨床常用的重要中藥材?，F(xiàn)代研究往往集中于白芍藥材小分子物質，如芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、氧化芍藥苷等，在心血管、神經(jīng)、消化、內分泌代謝等系統(tǒng)疾病中具有一定的治療作用［2］。芍藥中大分子物質多糖活性在免疫系統(tǒng)及抗腫瘤方面有大量報道［3-6］?！吨袊幍洹?010版（一部）收載白芍、炒白芍及酒白芍3種炮制品，白芍經(jīng)炮制后小分子芍藥苷含量明顯下降［1，7］，而白芍中多糖及總糖的含量在炮制前后有何變化，報道甚少。本文通過對白芍生品及臨床常用各種炮制品中多糖及總糖的含量測定，為臨床合理用藥及規(guī)范白芍GAP實施提供一些參考。

1 材料

1.1 儀器 安捷倫Cary 60型紫外可見分光光度儀（美國Agilent公司）;CAP124S型電子分析天平（德國賽多利斯公司）;Sigma3-18K型臺式離心機（德國SIGMA公司）;FW100萬能粉碎機（天津泰斯特公司）。

1.2 試藥及試劑 白芍采集于安徽亳州市十九里鎮(zhèn)，經(jīng)安徽中藥資源研究所劉曉龍研究員鑒定為Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.屬，D-無水葡萄糖標準品購于中國食品藥品檢定研究院（批號:110833-201205），苯酚、硫酸、無水乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 白芍不同炮制品的制備

2.1.1 白芍生品 取3～5年生原藥材根，去除泥沙，淋洗干凈，趁鮮切片，60℃干燥至衡重，打粉，過40目篩，備用。

2.1.2 炒白芍 取上述凈白芍片適量于熱鍋中，快速翻炒，待藥材表面呈微黃時即可，溫度190℃，翻炒約10 min，取出，室溫放涼，打粉，過40目篩，備用。

2.1.3 酒白芍 取上述凈白芍，加黃酒適量，拌勻、悶勻（約1.5 h），置鍋中炒至白芍表面顏色呈微黃色時即可，室溫放涼，打粉，過40目篩，備用。

2.2 葡萄糖標準溶液的配制 精密稱量無水葡萄糖對照品100.3 μg，置于100 mL的容量瓶中，加蒸餾水溶解，稀釋至刻度，搖勻，備用。再精密量取10 mL，置于100 mL容量瓶中，定容，搖勻，制成濃度為100.3 μg/mL的標準葡萄糖溶液，備用。

2.3 5%苯酚溶液的配制 取苯酚約30.0 g，加鋁片0.1 g，碳酸氫鈉0.05 g，干餾，于182℃收集餾分。精密稱量此餾分5.0 g，轉移至100 mL棕色容量瓶中，趁熱加入蒸餾水溶解并定容，搖勻備用。

2.4 線性關系考察 精密量取葡萄糖標準溶液0.10，0.20，0.40，0.80，1.20 mL，置于 5 只 20 mL 棕色比色管中，使用蒸餾水補充體積至2.00 mL，精密加入5%苯酚溶液1.00 mL，濃硫酸5.00 mL，震搖，熱水浴中加熱20 min，冰水浴中放冷至室溫。于490 nm 處測定吸光度［8］，以葡萄糖濃度（C，μg/mL）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，得回歸方程:Y=7.313 3+0.058 6，線性系數(shù)r=0.999 3。結果表明，葡萄糖在1.253 75～15.045 μg/mL濃度范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2.5 多糖的含量測定

2.5.1 白芍多糖供試品溶液的制備 分別精密稱量“2.1”項下制備的白芍生品、炒白芍、酒白芍粉末約20 g，使用索式提取器，以石油醚（60～90℃）回流提取2次，料液比分別為10∶1，8∶1，回流時間分別為1，0.5 h，棄去提取液，除去脂溶性成分。藥渣揮盡溶劑后，加入90%的乙醇，進行回流提取3次，料夜比分別為10∶1，8∶1，6∶1，提取時間分別為 1，0.5，0.5 h，棄去乙醇液，除去醇溶性雜質及低聚糖等。藥渣揮盡乙醇后，加蒸餾水溶解，置于圓底燒瓶中進行水提，料夜比分別為10∶1，8∶1，提取時間分別為1，0.5 h，合并濾液，濃縮后加95%乙醇使含醇量達到90%，置冰箱中（4℃）過夜，離心處理得多糖，少量蒸餾水溶解，使用0.3%H2O230 mL褪色20 min、Sevage（正丁醇∶氯仿=5∶1）試劑脫蛋白處理，離心，棄去下層及變性蛋白，上層濾液濃縮至100 mL，搖勻備用。

2.5.2 精密度考察 分別精密吸取葡萄糖標準品溶液及白芍生品多糖供試液0.20 mL各6分，按“2.4”項下的測定方法進行測定。結果葡萄糖標準品溶液平均吸光度為0.300 2、白芍生品多糖供試液平均吸光度為0.752 1，RSD分別為0.42%和0.87%（n=6），表明該方法精密度符合要求。

2.5.3 穩(wěn)定性考察 分別精密吸取葡萄糖標準品溶液及白芍生品多糖供試液0.20 mL各6分，按“2.4”項下的顯色方法進行顯色，每間隔30 min測定1次，連續(xù)測定5次。結果葡萄糖標準品溶液平均吸光度為0.310 8、白芍生品多糖供試液平均吸光度為0.761 5，RSD分別為1.89%和2.65%（n=6），表明穩(wěn)定性良好，在2.5 h內測定結果可靠。

2.5.4 重復性試驗 精密稱取干燥至衡重的白芍生品粉末6分，按“2.5.1”項下先以石油醚除去脂溶性成分，以90%乙醇除去醇溶性雜質及低聚糖，再進行水提，利用活性炭進行退色、Sevage試劑脫蛋白處理，最后將濾液定容至100 mL。分別精密吸取0.10 mL，按“2.4”項下顯色方法進行測定。結果，多糖平均含量為27.50%，RSD=1.78%（n=5），表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.5.5 加樣回收試驗 精密稱取干燥至恒重的白芍生品粉末約1.0 g，共6分，按照“2.5.1”項下進行石油醚脫脂、除去醇溶性及低聚糖雜質。精密稱取葡萄糖標準品0.065 0 g置于10 mL容量瓶中，配制成0.006 5 g/mL的溶液。分別取該標準溶液1 mL，置于圓底燒瓶中，加入已脫脂、除去醇溶性及低聚糖雜質的白芍生品藥渣適量，進行水提，定容至10 mL。精密吸取0.20 mL該供試液，置于具塞比色管中，按照“2.4”項下進行顯色并測定。加樣回收結果見表1。

2.5.6 白芍生品及其炮制品中多糖的含量測定 精密稱取干燥至恒重的白芍生品及炮制品約10 g，按“2.5.1”項下制備各供試液，精密吸取白芍生品（0.30 mL）、炒白芍（0.20 mL）、酒白芍（0.20 mL）供試液各5分，置于棕色具塞比色皿中，按“2.4”項下進行顯色并測定。白芍生品及炮制品中多糖含量結果見表2。

表1 白芍多糖加樣回收率試驗結果

表2 白芍生品及各炮制品中多糖的含量測定結果（n=5）

2.6 多糖的含量測定

2.6.1 白芍總糖供試品溶液的制備 分別精密稱量“2.1”項下制備的白芍生品、炒白芍、酒白芍粉末約10 g，使用索式提取器，以石油醚（60～90℃）回流提取2次，料液比分別為10∶1，8∶1，回流時間分別為1，0.5 h，棄去提取液，除去脂溶性成分。藥渣揮盡溶劑后轉移至圓底燒瓶中，100℃水浴提取3次，料夜比分別為10∶1，8∶1，6∶1，提取時間分別為 1，0.5，0.5 h，合并提取液，濃縮至 200 mL，使用 0.3%H2O230 mL褪色20 min、Sevage（正丁醇∶氯仿=5∶1）試劑脫蛋白處理，濾液濃縮至100 mL。精密吸取此溶液10 mL，稀釋至100 mL容量瓶中，搖勻備用。

2.6.2 精密度試驗 精密吸取白芍生品多糖供試液6分，每分0.2 mL，按照“2.4”項下進行顯色并測定含量。結果，平均吸光度值為0.668 3，RSD=1.07%（n=6），表明此方法精密度符合要求。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取白芍生品多糖供試液6分，每分0.2 mL，按照“2.4”項下進行顯色，每間隔30 min測定1次，連續(xù)測定5次。結果白芍生品多糖供試液平均吸光度為0.661 5，RSD分別為2.19%（n=6），表明穩(wěn)定性良好，在2.5 h內測定結果可靠。

2.6.4 重復性試驗 精密稱取干燥至衡重的白芍生品粉末6分，每分約5 g，以石油醚（60～90℃）回流提取，除去脂溶性成分，再以蒸餾水于100℃進行提取，提取液濃縮后，利用活性炭進行退色、Sevage試劑脫蛋白處理，最后將濾液定容至100 mL。分別精密吸取0.10 mL，按“2.4”項下顯色方法進行測定。結果，總糖平均含量為32.41%，RSD=3.20%（n=5），表明該方法重復性良好。

2.6.5 加樣回收試驗 精密稱取干燥至恒重的白芍生品粉末約1.0 g，共6分，按照“2.5.1”項下進行石油醚脫脂處理。精密稱取葡萄糖標準品0.080 g置于10 mL容量瓶中，配成0.008 0 g/mL的溶液。分別取該標準溶液1 mL，置于圓底燒瓶中，加入已脫脂處理的白芍生品藥渣適量，進行水提，定容至10 mL。精密吸取0.20 mL該供試液，置于具塞比色管中，按照“2.4”項下進行顯色并測定。加樣回收結果見表3。

表3 白芍總糖加樣回收率試驗結果

2.6.6 白芍生品及其炮制品中總糖的含量測定 精密稱取干燥至橫重的白芍生品及炮制品約0.5 g，按“2.5.1”項下制備各供試液，精密吸取白芍生品（0.20 mL）、炒白芍（0.10 mL）、酒白芍（0.10 mL）總糖供試液各5分，置于棕色具塞比色皿中，按“2.4”項下進行顯色并測定。白芍生品及炮制品中總糖含量結果見表4。

表4 白芍生品及各炮制品中總糖的含量測定結果（n=5）

3 討論

本研究采用UV-VIS分光光度法，以硫酸-苯酚顯色，測定亳白芍及其炮制品中多糖、總糖的含量，結果與其他文獻報道［8］結果相近。表明采用UV-VIS分光光度法，以硫酸-苯酚顯色適用于測定亳白芍多糖及總糖的含量測定。該方法具有顯色穩(wěn)定、靈敏度高、結果準確等特點。

在多糖含量測定樣品處理中考察了以80%、90%、95%乙醇以及70%、90%甲醇進行回流提取以除去低聚糖、色素等雜質的單因素試驗，發(fā)現(xiàn)以90%乙醇回流后，藥渣經(jīng)水提醇沉后多糖的含量最高。故本研究在除去藥材中低聚糖等雜質時選用的溶媒為90%乙醇，所測多糖為粗多糖，包括可溶性淀粉等物質。

通過試驗可知，亳白芍及其炮制品中多糖、總糖的含量存在明顯差異。多糖的含量從高到低依次為酒白芍、白芍生品、炒白芍;總糖的含量從高到低依次為酒白芍、炒白芍、白芍生品。其含量變化可能是與藥材受熱或受到乙醇的作用發(fā)生分解，導致含量有所差異。植物多糖越來越受到重視，大量報道一些植物多糖具有抗菌［9］、抗氧化［10］及對細胞［11］等方面的作用，其藥理作用也在不斷的被證實。白芍多糖已被證實具有免疫調節(jié)作用及抗腫瘤作用，若僅僅以芍藥苷的含量來評價白芍的內在質量，顯然是不盡合理的。本研究以亳白芍為研究對象，以多糖及總糖含量為指標，發(fā)現(xiàn)其含量具有顯著差異，不同炮制方法對多糖及總糖含量造成影響。通過本研究為白芍多糖及總糖的深入研究提供參考，為白芍多糖的開發(fā)及臨床應用提供一些理論依據(jù)。

:

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2010.

［2］王小蓉.略論白芍的炮制及功用［J］.中國藥業(yè)，2007，16（16）:56.

［3］張鈺.中藥多糖臨床應用研究進展［J］.甘肅醫(yī)藥，2008，27（4）:31-33.

［4］高小榮，田庚元.白芍多糖BSP-1-2的化學和抗腫瘤活性研究［C］//第八屆全國中藥和天然藥物學術研討會與第五屆全國藥用植物和植物藥學學術研討會論文集，武漢:中醫(yī)藥學會，2005.

［5］汪蕓，陶移文，田庚元.白芍多糖的制備、理化性質及抗腫瘤活性研究［J］.中國現(xiàn)代中藥，2013，15（8）:645-649.

［6］Tomoda M，Matsumoto K，Shimizu N，et al.An acidic polysaccharide with immunological activities from the root of Paeonia lactiflora［J］.Biol Pharm Bull，1994，17（9）:1161-1164.

［7］秦亞東，李飛，周宙，等.LC-UV法測定亳白芍及其炮制品中芍藥苷的含量［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2013，27（4）:53.

［8］楊哲萱，周立紅，章順楠，等.苯酚硫酸一步法測定白芍提取物中總糖含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（18）:139-142.

［9］劉春蘭，楊逸，何林，等.植物多糖抑菌作用研究方法進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2013，24（7）:1725-1727.

［10］王瑤，張彥飛，貢濟宇.五味子多糖質量濃度測定及生物活性研究［J］.長春中醫(yī)藥大學學報，2013，29（4）:733-734.

［11］李麗娟，張德生，莊朋偉，等.茯苓多糖對中性粒細胞向腫瘤細胞趨化黏附作用的體外活性研究［J］.長春中醫(yī)藥大學學報，2013，29（4）:571-573.

Content determination of total sugar and polysaccharide in raw radix paeoniae alba and its different processed products

QIN Yadong1，ZHOU Juanjuan2，LI Fei3，ZHOU Zhou1
（1.Anhui Junior College of Traditional Chinese Medicine，Wuhu 241002，Anhui Province，China;2.Wuhu Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhu 241000，Anhui Province，China;3.Bozhou Institute for Food and Drug Control，Bozhou 236800，Anhui Province，China）

ObjectiveTo compare the changes of the content of polysaccharide and total sugar in raw radix paeoniae alba and its processed product by different methods.MethodsThe sulfuric acid-phenol was applied for coloration and a UV-VIS method was used under 490 nm wavelength to determine the absorbency.ResultsThe content of polysaccharide in raw radix paeoniae alba and its processed product from high to low were as follows:prepared radix paeoniae alba with wine，raw radix paeoniae alba and prepared stir-baked radix paeoniae alba;the content of total sugar from high to low were as follows:prepared radix paeoniae alba with wine，prepared stir-baked radix paeoniae alba and raw radix paeoniae alba.ConclusionThe content of polysaccharide and total sugar in raw radix paeoniae alba and its processed product were significantly different and different preparation had certain impact on the content of carbohydrates in raw radix paeoniae alba.

raw radix paeoniae alba;raw product;processed product;polysaccharide;total sugar

R284.1

A

2095－6258（2014）05－0804－04

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.016

安徽省高校省級科研項目（KJ2013B114）。

秦亞東（1979－），男，碩士，講師。研究方向:中藥及復方藥效物質基礎研究。

2014－05－17）