何自育，楊育紅

(1.遼寧醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院，遼寧錦州 121001;2.錦州市解放軍第二O五醫(yī)院腎病風濕血液科，遼寧 錦州 121000)

黃芪甲苷對兩腎一夾型腎性高血壓大鼠腎臟病變的影響

何自育1，2，楊育紅1

(1.遼寧醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院，遼寧錦州 121001;2.錦州市解放軍第二O五醫(yī)院腎病風濕血液科，遼寧 錦州 121000)

目的 探討黃芪甲苷對腎性高血壓大鼠腎臟的影響。方法 將70只SD雄性大鼠分為2K1C組(n=60)與假手術(shù)組(n=10)，2K1C組按照經(jīng)典兩腎一夾(2K1C)型腎性高血壓大鼠模型方法建模，建模成功后隨機分為模型組、低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組，每組20只。低劑量黃芪甲苷組和高劑量黃芪甲苷組分別給予黃芪甲苷200 mg/(kg·d)、800 mg/(kg·d)，模型組和假手術(shù)組給予生理鹽水200 mg/(kg·d)替代治療，用藥8周。處死大鼠，取右腎組織勻漿檢測NO、NOS、腎素和AngII活性。手術(shù)前，各組大鼠尾動脈收縮壓比較差異無顯著性意義(P＞0.05)。結(jié)果 (1)術(shù)后8周，低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組大鼠尾動脈收縮壓(134.2±8.2和128.3±7.8)mmHg明顯低于模型組的(152.4 ±8.5)mmHg，但仍高于假手術(shù)組的(106.9 ±4.2)mmHg(P＜0.05)。(2)光鏡下可見模型組腎小球毛細血管塌陷，腎小球萎縮、硬化、壞死，部分腎小球代償性肥大，腎間質(zhì)可見大量炎癥細胞和紅細胞浸潤等;高劑量黃芪甲苷組，可見腎小球肥大減輕，平均直徑減小，未見腎小球萎縮、壞死，腎間質(zhì)仍偶見炎癥細胞浸潤。(3)模型組、低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組右腎組織勻漿NO、NOS明顯低于假手術(shù)組(P＜0.05);AngII含量顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)。低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組與模型組間上述指標比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。結(jié)論 黃芪甲苷能夠有效降低腎性高血壓大鼠腎臟損傷。

黃芪甲苷;腎性高血壓;一氧化氮;血管緊張素

腎臟是高血壓病的主要靶器官，也是影響高血壓患者預(yù)后的重要因素。近年來有報道顯示，單純高血壓15年后出現(xiàn)靶器官損害，其中42%為腎臟并發(fā)癥，約10%死于腎衰竭，而高血壓導致終末期腎病是引起終末期腎病的第2位常見原因［1］。高血壓腎臟損害的研究具有重要的現(xiàn)實意義。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分之一，對高血壓腎損害有一定的輔助治療作用［2］。本研究觀察黃芪甲苷對腎性高血壓大鼠腎臟的影響，探討黃芪甲苷對腎性高血壓腎臟影響的調(diào)節(jié)機制。

1 材料和方法

1.1 材 料

雄性SD大鼠70只，體重200～240 g，平均體重(220±5)g，由遼寧醫(yī)學院動物實驗中心提供;常溫低速離心機、BioRad圖像分析系統(tǒng)、倒置相差電子顯微鏡;內(nèi)徑0.2 mm銀制腎動脈夾，購自上海奧爾科特生物科技有限公司;黃芪甲苷，山西森弗生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);一氧化氮、一氧化氮合酶劑盒，血尿素氮試劑盒，腎素、血管緊張素II試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.2 動物模型的復制與實驗分組

70只SD雄性大鼠隨機分為2K1C組(n=60)與假手術(shù)組(n=10)，在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，應(yīng)用鼠尾儀測量大鼠尾動脈基礎(chǔ)血壓，2K1C組按照經(jīng)典兩腎一夾(2K1C)型腎性高血壓大鼠模型方法建模［3］:2%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，腹部左側(cè)切口打開腹腔，應(yīng)用止血鉗鈍性分離左腎動脈，應(yīng)用銀制腎動脈夾將左腎動脈夾閉，右腎不做處理，分層關(guān)閉腹腔，假手術(shù)組僅鈍性分離腹左腎動脈，未用銀夾夾閉，每周末應(yīng)用鼠尾儀測量大鼠尾動脈收縮壓。將2K1C組隨機分為模型組、低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組，每組20只。低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組分別給予黃芪甲苷200 mg/(kg·d)、800 mg/(kg·d)，模型組和假手術(shù)組給予生理鹽水200 mg/(kg·d)替代治療，連續(xù)用藥8周。每周應(yīng)用鼠尾儀測量大鼠血壓，4～8周血壓平穩(wěn)，收縮壓在140 mmHg以上建模成功［4］。手術(shù)前，各組大鼠尾動脈收縮壓比較差異無顯著性意義(P ＞0.05)。

1.3 觀察指標

觀察各組大鼠術(shù)后血壓變化;用藥8周取大鼠右側(cè)腎臟，取部分腎臟去除包膜，用生理鹽水沖洗，去除血液，并用濾紙拭干，部分放入4%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色;部分腎臟組織用眼科小剪將組織剪碎，并制成勻漿，3000 r/min離心10 min，分離上清液，應(yīng)用硝酸還原法檢測勻漿一氧化氮(NO)，應(yīng)用化學比色法檢測一氧化氮合酶(NOS)，應(yīng)用放射免疫法檢測血管緊張素II(AngII)活性，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)以 (均值 ±標準差)形式表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，多組間顯著性檢驗采用單因素方差分析，兩組計量資料比較用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血壓變化

2K1C組大鼠在手術(shù)操作過程中死亡4只。術(shù)后1周模型組、低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組大鼠尾動脈收縮壓術(shù)開始穩(wěn)定升高，至術(shù)后4～8周，模型組大鼠收縮壓在140 mmHg以上，建模成功。術(shù)后8周，低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組大鼠尾動脈收縮壓明顯低于模型組，但仍高于假手術(shù)組(P＜0.05)。見表1。

2.2 大鼠腎臟形態(tài)學變化

光鏡下可見假手術(shù)組腎小球腎小管形態(tài)正常;與假手術(shù)組相比，模型組腎小球毛細血管塌陷，腎小球萎縮、硬化、壞死，部分腎小球代償性肥大，腎間質(zhì)可見大量炎癥細胞和紅細胞浸潤等;低劑量黃芪甲苷組，仍可見腎小球炎癥細胞浸潤，腎小球萎縮、硬化、壞死，但較模型組明顯減輕;高劑量黃芪甲苷組，可見腎小球肥大減輕，平均直徑減小，未見腎小球萎縮、壞死，腎間質(zhì)仍偶見炎癥細胞浸潤。見圖1。

表1 各組大鼠用藥后尾動脈收縮壓變化Tab 1 Changes in rat tail artery systolic blood pressure after treatment (mmHg，±s)

表1 各組大鼠用藥后尾動脈收縮壓變化Tab 1 Changes in rat tail artery systolic blood pressure after treatment (mmHg，±s)

與假手術(shù)組比較，1)P ＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較，3)P ＜0.05;與低劑量組比較，4)P ＜0.01，5)P ＜0.05

組別 n 術(shù)前 術(shù)后1周 術(shù)后4周 術(shù)后8周假手術(shù)組10 106.3 ±2.9 106.7 ±3.8 107.1 ±3.5 106.9 ±4.2模型組 18 105.2 ±3.3 117.4 ±5.81) 147.4 ±8.82) 152.4 ±8.52)低劑量黃芪甲苷組 19 106.9 ±3.6 115.8 ±5.21) 145.8 ±8.22) 134.2 ±8.22)3)高劑量黃芪甲苷組 19 106.2 ±3.1 112.9 ±5.71) 124.1 ±5.41)4) 128.3 ±7.81)4)5)

圖1 各組大鼠腎組織變化(HE×100)Fig 1 HE staining images of rats renal tissue(HE×100)

2.3 各組大鼠腎臟勻漿NO、NOS和AngII含量測定

模型組右腎組織勻漿檢測NO、NOS顯著低于假手術(shù)組 (P＜0.01);AngII含量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)。低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組右腎組織勻漿檢測NO、NOS明顯高于模型組(P＜0.05);AngII含量明顯低于模型組 (P＜0.05)。見表3。

表2 各組大鼠腎臟勻漿NO、NOS和AngII含量比較Tab 2 Comparison of NO，NOS and AngII in rat kidney among groups

3 討論

近年來臨床發(fā)現(xiàn)，單純西藥降壓不能完全延緩和逆轉(zhuǎn)腎損害。中西藥聯(lián)合應(yīng)用，對高血壓腎病患者腎功能具有保護作用，可以延緩高血壓腎病的進展。黃芪甲苷是中藥黃芪的主要活性成分之一，具有免疫調(diào)節(jié)、器官保護、抗氧化自由基損傷、強心、保護內(nèi)皮屏障功能、降糖、抗細胞凋亡、抗炎等作用，對高血壓腎損害可能有一定的輔助治療作用［5-6］。本研究應(yīng)用2K1C型腎性高血壓大鼠模型方法建立腎性高血壓模型，觀察不同劑量黃芪多糖對腎性高血壓大鼠腎臟的影響。結(jié)果顯示術(shù)后1周模型組、低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組大鼠尾動脈收縮壓開始穩(wěn)定升高，至術(shù)后4～8周，模型組大鼠收縮壓在140 mmHg以上，建模成功。術(shù)后8周，低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組大鼠尾動脈收縮壓明顯低于模型組，但仍高于假手術(shù)組，證實黃芪甲苷對于腎性高血壓有一定的治療作用。從各組大鼠腎臟形態(tài)學變化結(jié)果來看，與假手術(shù)組相比，模型組腎小球毛細血管塌陷，腎小球萎縮、硬化、壞死，部分腎小球代償性肥大，腎間質(zhì)可見大量炎癥細胞和紅細胞浸潤等，而高劑量黃芪甲苷組，可見腎小球肥大減輕，平均直徑減小，未見腎小球萎縮、壞死，腎間質(zhì)仍偶見炎癥細胞浸潤。表明黃芪甲苷對腎性高血壓腎臟病變具有保護作用。

從各組大鼠勻漿NO、NOS和AngII含量來看，模型組右腎組織勻漿檢測NO、NOS明顯低于假手術(shù)組，AngII含量顯著高于假手術(shù)組。低劑量黃芪甲苷組、高劑量黃芪甲苷組右腎組織勻漿檢測NO、NOS明顯高于模型組，AngII含量明顯低于模型組。NO是血管內(nèi)皮依賴性舒張因子的主要形式，腎臟是其主要作用器官，腎小球內(nèi)高壓力可使NO等舒血管物質(zhì)產(chǎn)生減少，進而導致腎臟血管收縮，血壓進一步升高，并引起腎臟損傷［7］。有研究表明，NO分泌減少和活性下降很可能是高血壓早期腎損害的重要原因之一［8］。NOS是催化生成NO的關(guān)鍵酶，NO的活力取決于NOS的數(shù)量和表達程度［9］。而AngⅡ與NO是一對相互拮抗的血管活性物質(zhì)，當NO活性下降時，AngⅡ表達升高，進一步促進腎臟血管收縮和水鈉潴留，導致血管損傷［10］。本研究結(jié)果表明腎性高血壓大鼠腎臟NOS表達下降，NO活力降低，AngII含量異常升高，導致大鼠腎臟血管收縮功能失調(diào)，引起腎臟損傷，而黃芪甲苷可以通過調(diào)節(jié)NOS、NO和AngII水平起到降低血壓，防止腎臟病變的作用。

綜上所述，黃芪甲苷能夠有效降低腎性高血壓大鼠腎臟損傷，其機制可能與調(diào)節(jié)血管收縮功能有關(guān)。這對于防止高血壓腎臟損傷具有重要的意義，也對腎性高血壓治療提供了新的依據(jù)。

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Effect of Astragaloside on renal lesions of 2K1C model of renovascular hypertensive rats

HE Zi- yu1，2，YANG Yu - hong1
(1.Liaoning Medical University，Jinzhou121001，China;2.Department of Hematology Nephrology，the People＇s Liberation Army205Hospital，Jinzhou121000，China)

［Abstract］ObjectiveTo study the effect and mechanism of Astragaloside on renal lesions in 2K1C model of renovascular hypertensive rats.MethodsSeventy male SD rats were randomly divided into 2K1C group(n=60)and sham operation group(n=10).Renovascular hypertensive model was built in 2K1C group according to 2K1C model method，and 2K1C group were further randomly divided into model group，low dose Astragaloside group，and high dose Astragaloside group.Low dose Astragaloside group and high dose Astragaloside group were given astragaloside 200 mg/(kg·d)and 800 mg/(kg·d)，respectively.Model group and sham operation group were given normal saline 200 mg/(kg·d).After 8 weeks＇treatment，the rats were killed and NO，NOS and AngII renin activity of right kidney were measured.Before the operation，the rat tail artery systolic blood pressure showed no statistical difference(P＞0.05).Results(1)Eight weeks after operation，low dose Astragaloside group，high dose Astragaloside group rat tail artery systolic blood pressure was significantly lower than that in the model group，but still higher than the sham operation group(P＜0.05).(2)Histologically，model group showed glomerular capillary collapse，glomerular atrophy，sclerosis，necrosis，partial glomerular compensatory hypertrophy，interstitial inflammatory cell and red blood cell infiltration.In high dose Astragaloside group，glomerular hypertrophy alleviated，average diameter decreased，no glomerular atrophy or necrosis was seen，there was still occasional renal in-terstitial inflammatory cell infiltration.(3)NO，NOS in Model group，low dose Astragaloside group，and high dose Astragaloside group measured in right kidney were significantly lower than those in sham operation group(P ＜0.05);whereas AngII was significantly higher than that in sham operation group(P ＜0.05).The above values were statistically different(P ＜0.05)among low dose Astragaloside group，high dose Astragaloside group and model group.ConclusionAstragaloside can effectively reduce the damage of kidney in renal hypertensive rats.

［Key words］astragaloside;renal hypertension;NO;angiotensin

R544.1+4

A

1671-7295(2014)01-0027-04

何自育，楊育紅.黃芪甲苷對兩腎一夾型腎性高血壓大鼠腎臟病變的影響［J］.大連醫(yī)科大學學報，2014，36(1):27 -30.

10.11724/jdmu.2014.01.07

何自育(1977-)，女，遼寧錦州人，主治醫(yī)師。E-mail:xhalz1919@163.com

楊育紅，教授。E-mail:1394169406@139.com

2013-11-11;

2013-12-05)