王永祿，王麗瑤，朱欣佚，王棟

（1.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇南京210009；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；3南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京211816）

常壓蒸制和高壓蒸制對(duì)酒黃精化學(xué)成分的影響研究

王永祿1，3，王麗瑤2Δ，朱欣佚1，王棟3

（1.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇南京210009；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；3南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京211816）

目的比較常壓蒸制和高壓蒸制對(duì)酒黃精化學(xué)成分的影響，為優(yōu)選酒黃精的簡(jiǎn)易炮制方法提供參考依據(jù)。方法采用高效液相色譜法建立黃精及其炮制品的特征圖譜，比較黃精生品以及炮制前后化學(xué)成分的變化。結(jié)果與黃精生品相比，常壓蒸制和高壓蒸制酒黃精后，化學(xué)成分均發(fā)生改變，既有新成分產(chǎn)生，也存在已有成分的消失；常壓蒸制與高壓蒸制酒黃精品間的化學(xué)成分差異明顯。結(jié)論酒黃精經(jīng)蒸制后化學(xué)成分發(fā)生明顯變化；高壓酒蒸黃精可達(dá)到傳統(tǒng)蒸制的要求，且節(jié)省時(shí)間，操作簡(jiǎn)單。

黃精；常壓蒸制；高壓蒸制；化學(xué)成分；高效液相色譜法

中藥黃精為百合科植物黃精（Polygonatum sibircum Red.）、滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonerna Hua）的干燥根莖，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎的功效［1］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃精具有抗疲勞、抗氧化及抗抑郁等作用［3-4］。黃精中的化學(xué)成分復(fù)雜，含有甾體皂苷、三萜皂苷、醌類、木脂素、多糖等多種成分［5-7］。黃精生品可刺激咽喉，導(dǎo)致口舌麻木，故需炮制后入藥，以消除其刺激性，同時(shí)增強(qiáng)其補(bǔ)脾潤(rùn)肺益腎的作用［2］。黃精的炮制工藝主要以《中國(guó)藥典》（2010版）收載的酒黃精為主。目前，有研究黃精炮制前后多糖、小分子糖、5-羥甲基糠醛等成分含量的變化以及采用氣相色譜法分析其揮發(fā)性成分［8-9］，缺乏對(duì)其整體化學(xué)成分的綜合分析研究［10-13］。本研究采用常壓及高壓蒸制酒黃精，采用HPLC-DAD法對(duì)黃精炮制前后化學(xué)成分的變化進(jìn)行比較分析，以期為優(yōu)選黃精的簡(jiǎn)易炮制工藝提供科學(xué)的參考。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agillent 1200型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測(cè)器、四元泵、柱溫箱、化學(xué)工作站）；Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）；LDZX-40B I型壓力蒸汽滅菌箱（上海申安醫(yī)療器械廠）；DHG-9053A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；KQ3200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi實(shí)驗(yàn)室儀器公司）。

1.2 試劑 乙腈（色譜純，Merck公司）；水為超純水，其他試劑均為分析純，黃酒（紹興縣第三酒廠）。

1.3 方法

1.3.1 樣品的采集及炮制加工：黃精藥材采于2013年11月安徽黃山，經(jīng)王麗瑤老師鑒定，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥資源教研室陳琳琳副教授復(fù)核，為百合科植物黃精Polygonatum sibircum Red.的干燥根莖。參考已有文獻(xiàn)，對(duì)黃精進(jìn)行常壓及高壓蒸制的炮制加工［12-13］。

1.3.2 常壓蒸制酒黃精：取鮮黃精，除去蘆頭、須根及泥沙，清蒸1 h，干燥后加黃酒（每100 g加黃酒20 g計(jì)），悶潤(rùn)至酒吸盡，然后置蒸鍋中蒸制25 h，取出，70℃烘箱內(nèi)干燥，放涼，切厚片，即得常壓酒蒸黃精炮制品。

1.3.3 高壓蒸制酒黃精：取鮮黃精，除去蘆頭、須根及泥沙，清蒸1 h，干燥后加黃酒（每100 g加黃酒20 g計(jì)），悶潤(rùn)至酒吸盡，高壓（0.15Mpa）蒸制6 h，取出，70℃烘箱內(nèi)干燥，放涼，切厚片，即得高壓酒蒸黃精炮制品。由上述方法制得的2種黃精炮制品從里到外烏黑發(fā)亮，質(zhì)地柔軟，無(wú)刺激性，糖性濃烈，口感好，符合《中國(guó)藥典》中對(duì)酒蒸黃精的要求。

1.3.4 供試品溶液的制備：取生黃精藥材并按“1.3.2”和“1.3.3”項(xiàng)下方法制得的黃精炮制品，粉碎，過(guò)40目篩，取上述樣品粉末各2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%的乙醇40mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用70%的乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25mL，減壓回收溶劑，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別考察210 nm、245 nm、400 nm黃精樣品的HPLC色譜圖，其中210 nm色譜圖中化合物的信息最為豐富，因此選擇210 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 210 nm，245 nm和400 nm處黃精樣品的高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of Polygonati Rhizoma under 210 nm（A），245 nm（B）and 400 nm（C）

2.2 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水梯度洗脫：［0～10 min，5%～10%乙腈；10～30min，10%～35%乙腈；30～45min，35%～60%乙腈；45～60min，60%～90%乙腈］；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。

2.3 黃精生品及炮制品的HPLC比較 按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，分別得到黃精生品及常壓蒸制酒黃精、高壓蒸制酒黃精的HPLC圖譜，見(jiàn)圖2。

圖2 黃精生品（A）、常壓蒸制酒黃精（B）及高壓蒸制酒黃精（C）的HPLC色譜疊加圖Fig.2 HPLC chromatograms of raw Polygonati Rhizoma（A），normal pressure steaming Polygonati Rhizoma with rice wine（B）and high pressure steaming Polygonati Rhizoma with rice wine（C）

比較黃精炮制前后的HPLC圖譜，常壓蒸制酒黃精與高壓蒸制酒黃精的HPLC圖譜總體差異較大，而生黃精與高壓蒸制酒黃精的HPLC圖譜變化明顯。由圖2可見(jiàn)，黃精常壓及高壓酒蒸炮制品的HPLC圖譜中保留時(shí)間為15.95min、18.82min、48.56min及49.45min相對(duì)應(yīng)的色譜峰在生黃精HPLC圖譜中缺失。而生黃精HPLC圖譜中保留時(shí)間為23.23 min、25.32min及32.74 min的色譜峰在炮制品圖譜中缺失。

表1 黃精生品、常壓蒸制酒黃精、高壓蒸制酒黃精變化明顯峰的峰面積Tab.1 The peak areas of obviously changed of raw Polygonati Rhizoma，normal pressure and high pressure steaming Polygonati Rhizoma with rice wine

比較黃精炮制前后主要色譜峰峰面積的變化，常壓蒸制酒黃精與高壓蒸制酒黃精的HPLC色譜峰的峰面積差異較大，而生品黃精與高壓蒸制酒黃精的HPLC主要色譜峰的峰面積變化明顯。與生品黃精HPLC圖譜中保留時(shí)間為7.05、9.72、12.06和26.85min的色譜峰峰面積比較，相應(yīng)保留時(shí)間的炮制品色譜峰峰面積有大幅度的增加，說(shuō)明黃精經(jīng)炮制后這些化合物的含量有所增加。

3 討論

研究通過(guò)建立高效液相色譜法綜合分析黃精中的化學(xué)成分變化，比較研究生黃精及酒蒸炮制品化學(xué)成分的差異，我們發(fā)現(xiàn)黃精經(jīng)酒蒸炮制后化學(xué)成分的組成有所變化，既有新的成分產(chǎn)生，也存在已有成分的消失，同時(shí)各化學(xué)成分的含量也發(fā)生了改變，這為黃精經(jīng)炮制后副作用降低而療效增加與這些化學(xué)成分的變化有關(guān)提供可靠的科學(xué)依據(jù)［13-15］。

高壓蒸制酒黃精的外觀色澤、質(zhì)地、氣味、口感等性狀與常壓蒸制酒黃精無(wú)差異，可以達(dá)到傳統(tǒng)蒸制的要求，而且高壓蒸制酒黃精技術(shù)可顯著節(jié)省炮制時(shí)間，有效提高生產(chǎn)效率，且其操作相對(duì)簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求不高，便于規(guī)?；a(chǎn)，值得推廣應(yīng)用。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社.2010：193.

［2］鐘凌云，龔千鋒，張的鳳，等.黃精炮制研究現(xiàn)狀分析［J］.中藥材，2007，30（12）：1618-1621.

［3］黃鶯，徐維平，魏偉，等.黃精皂苷對(duì)慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)及血清中微量元素的影響［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47（3）：286-289.

［4］梁引庫(kù)，吳三橋，徐仲陽(yáng)，等.黃精多糖肽的單糖組成和抗氧化活性［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2012，38（9）：94-98.

［5］楊崇仁，張影，王東，等.黃精屬植物甾體皂苷的分子進(jìn)化及其化學(xué)分類學(xué)意義［J］.云南植物研究，2007，29（5）：591-600.

［6］徐德平，孫婧，齊斌，等.黃精中三萜皂苷的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定［J］.中草藥，2006，37（10）：1470-1472.

［7］孫隆儒，李銑.黃精化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2001，32（7）：586-588.

［8］曾林燕，魏征，曹玉娜，等.3個(gè)品種黃精炮制前后小分子糖含量變化［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（11）：69-72.

［9］魏征，曾林燕，宋志前，等.頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析黃精炮制過(guò)程化學(xué)成分的變化［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（20）：115-118.

［10］鐘凌云，張瑩，霍慧君，等.黃精炮制前后成分及藥效變化初步研究［J］.中藥材，2011，34（10）：1508-1511.

［11］喻雄華，張大舜.不同方法炮制的黃精中多糖含量的比較［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（10）：1306-1307.

［12］賀?；ǎ瑮钤?，王爽，等.不同蒸制方法和時(shí)間對(duì)黃精中多糖含量的影響［J］.中藥材，2009，32（6）：861-862.

［13］曾林燕，宋志前，魏征，等.黃精炮制過(guò)程中新產(chǎn)生成分分離及含量變化［J］.中草藥，2013，44（12）：1584-1588.

［14］Cai BC，Qin KM，Wu H，et al.Chemical Mechanism During Chinese Medicine Processing［J］.Prog Chem，2012，24（4）：637-649.

［15］鐘凌云，龔千鋒，楊明，等.傳統(tǒng)炮制技術(shù)流派特點(diǎn)及發(fā)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38（19）：3405-3408.

（編校：譚玲，王冬梅）（編校：譚玲）

Effect of normal and high pressure steam ing on chem ical constituents of Polygonati Rhizoma w ith rice w ine

WANG Yong-lu1，3，WANG Li-yao2Δ，ZHU Xin-yi1，WANG Dong3

（1.Medical School of Southeast University，Nanjing 210009，China；2.College of Life Science，Anhui Agricultural University，Hefei230036，China；3.College of Pharmacy，Nanjing Technology University，Nanjing 211816，China）

ObjectiveTo study effect of normal and high pressure steaming on chemical constituents of Polygonati Rhizoma with rice wine，to provide reference for preparing Polygonati Rhizoma with rice wine.MethodsHPLC method was used to study the chemical constituents variation of characteristic chromatogram before and after processing Polygonati Rhizoma.ResultsCompared with Polygonati Rhizoma，there were appearance or disappearance of the chemical constituents found in normal and high pressure steaming Polygonati Rhizoma with rice wine.There were obvious change between the high pressure and the normal pressure steamed Polygonati Rhizoma.Conclusion The chemical constituents in Polygonati Rhizoma with rice wine could be changed after being processed.The high pressure processing technology of PolygonatiRhizomawith ricewine could meet the requirements，it could save time and is simple to operate.

Polygonati Rhizoma；normal pressure steaming；high pressure steaming；chemical constituents；HPLC

R284.1

A

1005－1678（2014）08－0173－03

安徽省自然科學(xué)基金（1208085QH168）；安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研項(xiàng)目（YJ2011－08）；江蘇省博士后科研資助計(jì)劃（1301012A）。

王永祿，博士后，研究方向：藥物制劑，E-mail：wl_761107＠163.com；王麗瑤，通信作者，講師，博士，研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，E-mail：wangliyao1979＠sohu.com。