陳 卓

(鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 河南省腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州 450052)

丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(PLC)是左卡尼汀(LC)的酯化物，其生理活性與LC相似，主要藥理作用表現(xiàn)在改善受損心肌的物質(zhì)與能量代謝。PLC具有較強的抗氧化活性，對酒精誘導(dǎo)的胃黏膜急劇損傷有部分保護(hù)作用，可以保護(hù)胃黏膜免受無水酒精損傷并促進(jìn)潰瘍愈合，預(yù)防硫代巴比妥酸活性反應(yīng)物的增加和脂質(zhì)過氧化，增加胃中谷胱甘肽的量和超氧化物歧化酶(SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，但是對胃組織中過氧化氫酶(CAT)無影響〔1〕。但是，關(guān)于其對酒精性肝損傷的保護(hù)作用還未見報道，本研究采用酒精誘導(dǎo)肝損傷研究PLC對酒精性肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1實驗動物 昆明種小鼠，雄性，體重(20±2)g，由鄭州大學(xué)實驗動物中心提供。在恒溫21～24 ℃，相對濕度45%～55%的環(huán)境中適應(yīng)飼養(yǎng)1 w后實驗，期間自由飲食飲水。

1.2試劑與儀器 乙醇(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，分析純)，PLC片劑(500 mg/片，Sigma-tau公司，批號：20110318)，復(fù)方益肝靈片(21 mg水飛薊素/片，吉林省博威藥業(yè)有限公司，批號：20101225)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測定試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒、還原性谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均來自南京建成生物工程研究所，山梨醇脫氫酶(SDH)酶聯(lián)免疫試劑盒(上海逸峰生物科技有限公司)。Sartorius BP 211 D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，TG16-WS高速離心機(南賽特儀器廠產(chǎn)品)，UV-2409型紫外分光光度計(日本島津)，Olympus BX-50型顯微鏡，DQP-9010石蠟冷凍切片機(上海華巖儀器設(shè)備有限公司)，ZN17-2102A型全自動酶標(biāo)儀(北京中諾遠(yuǎn)東科技有限公司)。

1.3實驗方法

1.3.1方法 昆明種小鼠72只隨機分成正常組，模型組，陽性藥物益肝靈組，PLC低劑量組(0.15 g/kg)，PLC中劑量組(0.3 g/kg)，PLC高劑量組(0.6 g/kg)，每組12只。按照文獻(xiàn)方法〔1〕：每日灌胃給藥30 min后，除正常組外，其余各組小鼠均灌胃35°二鍋頭白酒16 ml/kg，正常組灌胃等容積的蒸餾水。第10天給酒后，禁食不禁水，20 h后眼靜脈采血，常規(guī)離心后分離血清測定ALT、AST和SDH活力。同時迅速剖取肝臟，取小鼠肝左葉，-4 ℃下制備10%肝勻漿，備用。另取肝右葉作病理組織學(xué)檢查。

1.3.2指標(biāo)測定 檢測血清中ALT、AST和SDH及肝組織中的GSH-Px、MDA和SOD含量考察PLC對酒精性肝損傷的保護(hù)作用。所有測定方法按所購試劑盒說明進(jìn)行。

1.3.3病理觀察 將5%甲醛溶液固定的肝組織石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察其病變。

2 結(jié) 果

2.1PLC對小鼠血清ALT、AST和SDH的影響 與正常組對比，模型組中血清ALT、AST和SDH顯著升高(P<0.05)；與模型組對比，PLC高、中劑量組能顯著降低血清中ALT、AST和SDH水平(P<0.05)；PLC低劑量組雖能降低血清中ALT、AST和SDH水平，但是無顯著性差異(P>0.05)，表明PLC能夠顯著降低血清中ALT、AST和SDH活性。見表1。

表1 PLC對小鼠血清ALT、AST和SDH的影響

2.2PLC對肝組織中GSH、MDA和SOD的影響 與空白組對比，模型組中肝組織GSH和SOD含量明顯降低(P<0.05)，MDA含量顯著升高(P<0.05)；與模型組對比，PLC高、中劑量組能顯著升高肝組織GSH和SOD含量(P<0.05)，降低MDA含量(P<0.05)，而PLC低劑量組雖能升高肝組織中GSH和SOD含量，降低MDA含量，但是無顯著性差異(P>0.05)，表明PLC能顯著降低肝組織中的MDA含量，升高GSH和SOD含量。見表2。

表2 PLC對小鼠肝組織中GSH、MDA和SOD的影響

2.3PLC對小鼠肝組織病理變化的影響 HE染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn)，正常組肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細(xì)胞核明顯，結(jié)構(gòu)正常。模型組小鼠肝組織中央靜脈明顯擴張，肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，胞質(zhì)連成一片，幾乎看不到細(xì)胞膜，周圍大量炎性細(xì)胞浸潤，不同程度的氣球樣變及嗜酸性變；PLC低劑量組相對模型組肝細(xì)胞有些許改善，但是損傷依然嚴(yán)重；PLC中、高劑量組能明顯改善這種損傷，壞死細(xì)胞也已經(jīng)修復(fù)，中央靜脈周圍只有少量的炎性細(xì)胞。見圖1。

圖1 各組小鼠肝組織病理變化(HE，200×)

3 討 論

酒精性肝損傷的致病因素單一明確，即長期大量的酒精攝入，但發(fā)病機制較為復(fù)雜，可能與酒精及其代謝產(chǎn)物的毒性作用、氧化應(yīng)激、免疫介導(dǎo)和細(xì)胞因子、細(xì)胞凋亡、內(nèi)毒素等多種因素有關(guān)〔2〕。

乙醇和乙醛的直接毒性作用是導(dǎo)致酒精性肝病的主要因素〔3〕。乙醇對肝的毒性是乙醇脫氫酶介導(dǎo)過度產(chǎn)生還原型腺嘌呤二核苷酸以及具有高度毒性的乙醛的結(jié)果。乙醇在代謝過程中發(fā)生異常的氧化還原反應(yīng)，氧化型輔酶Ⅰ(NAD)轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶Ⅰ(NADH)，而NADH/NAD比值增高及乙醛所致的脂代謝和糖代謝紊亂是肝細(xì)胞損傷發(fā)生和加重的主要原因。

乙醛是高活性物質(zhì)，可與肝細(xì)胞成分結(jié)合產(chǎn)生毒性。研究表明，乙醛對肝臟的毒性比乙醇更強，與酒精性肝損傷的發(fā)展密切相關(guān)。肝細(xì)胞線粒體內(nèi)的乙醛可被乙醛脫氫酶氧化為乙酸，當(dāng)乙醛脫氫酶活性降低時，未被氧化的乙醛進(jìn)入血內(nèi)，通過黃嘌呤氧化酶轉(zhuǎn)變?yōu)槌趸?，?dǎo)致脂質(zhì)過氧化，破壞細(xì)胞膜脂質(zhì)，促進(jìn)肝損傷。乙醛可作用于線粒體、微管、質(zhì)膜等，引起肝細(xì)胞退變。此外，乙醛還可與細(xì)胞膜結(jié)合形成一種絡(luò)合物，這種絡(luò)合物作為一個新的抗原刺激物導(dǎo)致肝細(xì)胞再度損傷?？傊胰┑母味拘宰饔迷诰凭愿螕p傷的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。

在肝細(xì)胞損傷、細(xì)胞膜通透性增加時，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶也可由于這種濃度梯差而滲漏入血中，可使血中酶活性增高1倍，因此轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標(biāo)，酒精性肝炎AST多增高且增高明顯。乙醇損害各種細(xì)胞器和酶的結(jié)構(gòu)功能，并損害脂肪酸線粒體β-氧化，引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，抑制谷胱甘肽的生物合成，減弱超過氧化酶的抗氧化功能，導(dǎo)致各種肝損傷，ALT、AST等指標(biāo)升高〔4〕。MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，它既能反映人體內(nèi)氧化反應(yīng)，也能作為損害因子對人體進(jìn)行損傷。MDA具有強交聯(lián)性質(zhì)，可使胞質(zhì)、膜蛋白及某些酶交聯(lián)成二聚體或更大的聚合物，使其本身喪失活性、結(jié)構(gòu)改變，乃至整個細(xì)胞功能喪失。GSH是一種低分子清除劑，是GSH-Px的底物，對脂自由基及脂質(zhì)過氧化自由基等具有較強的清除作用〔5〕。機體氧化反應(yīng)亢進(jìn)時，GSH不斷消耗，可導(dǎo)致GSH不足以清除自由基，形成自由基的損傷。

已有研究表明，PLC對酒精誘導(dǎo)的胃黏膜急劇損傷有部分保護(hù)作用，可以保護(hù)胃黏膜免受無水酒精損傷并促進(jìn)潰瘍愈合，預(yù)防硫代巴比妥酸活性反應(yīng)物的增加和脂質(zhì)過氧化，增加胃中谷胱甘肽的量和SOD與谷胱甘肽過氧化物酶(GST)活性，但是對胃組織中CAT無影響，其機制很有可能就是PLC的抗氧化作用〔6〕。

本結(jié)果顯示，PLC中和高劑量對酒精性肝損傷有一定的保護(hù)作用，可顯著降低血清ALT、AST和SDH，降低肝組織中MDA含量，升高GSH和SOD含量，顯著改善肝組織病理損傷，且呈明顯的量效關(guān)系，表明PLC抗酒精性肝損傷作用可能與其抗氧化、清除自由基相關(guān)，具體作用機制有待于進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

1秦冬梅,胡利萍,曹文疆,等.維藥菊苣提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國實驗方劑學(xué),2011；17(7)：138-41.

2孫 龍,張 填,楊世忠.PPAR-α在老年大鼠酒精性肝損傷脂質(zhì)過氧化中的作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2006；26(12)：1671-3.

3賈 丹.肝臟磷脂酰膽堿對酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究〔D〕.遼寧師范大學(xué),2007.

4周可軍,鄧 雅.脂肝清膠囊對酒精性肝損傷的保護(hù)作用〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009；18(33)：4069-70.

5李 勇,孔令青,高 洪,等.自由基與疾病研究進(jìn)展〔J〕.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008；29(4)：85-8.

6熊 微.丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的合成及制劑研究〔D〕.華中科技大學(xué),2006.