武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430074

艾葉油對(duì)豚鼠平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究

萬(wàn)軍梅郭群

武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，湖北 武漢 430074

目的研究艾葉油的平喘作用。方法豚鼠隨機(jī)分成模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥物組(離體實(shí)驗(yàn)為心得安，整體實(shí)驗(yàn)為異丙腎上腺素)和艾葉油高、中、低劑量組，以豚鼠離體氣管片實(shí)驗(yàn)和豚鼠哮喘模型，研究艾葉油的平喘作用。結(jié)果艾葉油可直接舒張豚鼠離體氣管平滑??；對(duì)豚鼠哮喘模型，艾葉油能延長(zhǎng)哮喘發(fā)作的潛伏時(shí)間。結(jié)論艾葉油具有平喘作用。

艾葉油；支氣管哮喘

艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Lev1. et Vent．的干燥葉，為臨床常用中藥材，在我國(guó)有悠久的應(yīng)用歷史。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)將艾葉歸類為祛寒藥，具溫經(jīng)止血，散寒除濕之功效，很少有艾葉用于哮喘的描述。20世紀(jì)70年代開(kāi)始發(fā)現(xiàn)艾葉中提取的揮發(fā)油具有平喘作用，引起了研究者的關(guān)注。目前對(duì)艾葉油平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究并不多見(jiàn)，且主要采用口服給藥方式[1-2]?？诜o藥吸收較慢，血藥濃度要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后達(dá)到穩(wěn)定的水平，一般僅用于預(yù)防及輕微哮喘的治療，而噴霧和吸入給藥，使藥物直接到達(dá)氣管，并在氣管內(nèi)形成有效的高濃度，具有速效性、安全性和方便性。前期已經(jīng)報(bào)道了艾葉油長(zhǎng)期霧化吸入給藥無(wú)明顯毒性[3]，本文采用霧化吸入給藥方式對(duì)艾葉油的平喘作用進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑 艾葉油，由南陽(yáng)張仲景現(xiàn)代中藥發(fā)展有限公司提供，批號(hào)：20100510；鹽酸異丙腎上腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司提供，批號(hào)：106014；心得安片，湖北華中藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20100605；磷酸組織胺，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：0510-9411；氯化乙酰膽堿，Sigma公司進(jìn)口分裝；氯化鋇等為市售分析純。

1.1.2 動(dòng)物 豚鼠，體重160～200g，400～500g，♀♂兼用，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0005。

1.1.3 儀器 超聲霧化器，江蘇魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備有限公司出品。

1.2 方法

1.2.1 豚鼠活體哮喘模型 選幼年豚鼠，體重160～200g，♀♂各半，放入密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，用超聲霧化器噴入0.1%磷酸組胺和2%氯化乙酰膽堿混合液(1：1)15秒，噴霧停止后觀察3分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)抽搐跌倒的時(shí)間，并記錄從噴霧開(kāi)始到抽搐跌倒的時(shí)間，稱為引喘潛伏期。若引喘潛伏期大于120秒者則作為不敏感而落選[4]。挑選合格者50只按體重隨機(jī)分為5組，分組及給藥劑量見(jiàn)表1。艾葉油氣霧吸入給藥，每日一次，連續(xù)4天，陽(yáng)性對(duì)照組為0.05%異丙腎上腺素溶液于實(shí)驗(yàn)當(dāng)日氣霧吸入30秒，模型對(duì)照組在造模后以等體積生理鹽水代替待測(cè)藥物。末次給藥后5分鐘，以上述同樣條件引喘，觀察并記錄給藥前后豚鼠引喘潛伏期，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

1.2.2 豚鼠離體哮喘模型 取400-500g豚鼠，♀♂均可，用木棰猛擊腦部致昏迷，迅速剪開(kāi)頸部皮膚，分離氣管，按文獻(xiàn)[5]方法制作成氣管片標(biāo)本。將氣管片放入盛有克-亨氏營(yíng)養(yǎng)液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)，保持恒溫(37±0.5℃)，恒速供氣，初始負(fù)荷為2g，標(biāo)本平衡60-90分鐘，期間換液3-5次。記錄一段正常曲線作為基線后，加入氯化鋇溶液0.1ml(使浴槽內(nèi)終濃度為2mg/ml),觀察記錄曲線變化，當(dāng)氣管平滑肌張力升高到最高點(diǎn)時(shí)，加入不同濃度的艾葉油0.1ml(使浴槽內(nèi)濃度分別為2.5mg/ml、0.5mg/ml和0.1mg/ml)，模型對(duì)照組加入同體積生理鹽水，陽(yáng)性組加入心得安0.1ml(浴槽內(nèi)終濃度為2.0μg/ml)，模型對(duì)照組在造模后以等體積生理鹽水代替待測(cè)藥物。觀察各組給藥后10分鐘曲線下降幅度，按下式求出艾葉油對(duì)氯化鋇的解痙百分率。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用t-檢驗(yàn)比較對(duì)照組與藥物組間的差異，采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 艾葉油吸入給藥對(duì)豚鼠哮喘的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，艾葉油100μl/kg能明顯延長(zhǎng)豚鼠的引喘潛伏期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，艾葉油50μl /kg和25μl /kg也表現(xiàn)出延長(zhǎng)引喘潛伏期的趨勢(shì)，但與模型對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明艾葉油對(duì)組胺和乙酰膽堿誘發(fā)的豚鼠哮喘具有抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 艾葉油吸入給藥對(duì)組胺和乙酰膽堿誘發(fā)豚鼠哮喘的影響 ±s)

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 艾葉油對(duì)離體豚鼠氣管平滑肌的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，艾葉油不同濃度對(duì)氯化鋇引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮有顯著的拮抗作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明艾葉油能有效緩解氣管平滑肌的痙攣，并且艾葉油在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)具有明顯的量效關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 艾葉油對(duì)離體豚鼠氣管平滑肌的影響 ±s)

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

支氣管哮喘(bronchial asthma，簡(jiǎn)稱哮喘)，是一種以可逆性氣流受限為特征的氣道慢性炎癥性疾病，被世界醫(yī)學(xué)界公認(rèn)為四大頑癥之一，被列為十大死亡原因之最。相關(guān)資料表明[6]，支氣管哮喘的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)為1%～13%，其高發(fā)人群在我國(guó)位居第一的是兒童,其次為老人。近年來(lái)雖然支氣管哮喘的治療方法不斷發(fā)展，但其發(fā)病率和死亡率仍呈上升趨勢(shì)，因此支氣管哮喘的防治與研究一直是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一。

哮喘急性發(fā)作期，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要采用糖皮質(zhì)激素、支氣管擴(kuò)張劑治療。雖然能迅速控制病情，但副作用較大，且遠(yuǎn)期療效不佳，復(fù)發(fā)率很高，反復(fù)發(fā)作則心、肺、腎等臟腑功能失調(diào)，并發(fā)各種慢性疾病。中藥治療哮喘具有較好的遠(yuǎn)期療效, 以復(fù)制哮喘動(dòng)物模型篩選中藥及其有效部位, 并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行干預(yù)成為該研究領(lǐng)域的重要方法。本實(shí)驗(yàn)研究了艾葉油對(duì)支氣管哮喘的作用，離體試驗(yàn)結(jié)果表明，艾葉油能明顯緩解氯化鋇引起的離體豚鼠氣管平滑肌的痙攣，具有舒張支氣管平滑肌的作用；整體動(dòng)物試驗(yàn)中，艾葉油氣霧吸入給藥能明顯延長(zhǎng)豚鼠的引喘潛伏期，對(duì)組胺和乙酰膽堿誘發(fā)的豚鼠哮喘具有抑制作用，說(shuō)明艾葉油對(duì)支氣管哮喘具有整體治療作用。上述結(jié)果為艾葉油在臨床上霧化吸入給藥緩解哮喘急性發(fā)作提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]黃學(xué)紅，謝元德，朱婉萍，等. 艾葉油治療慢性支氣管炎的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 浙江中醫(yī)雜志，2006,41(12)：734-735.

[2]魏國(guó)會(huì), 杜梅素, 宋寧，等. 艾葉油的平喘作用研究——小鼠卵蛋白復(fù)制法[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010,21(1)：86-87.

[3]萬(wàn)軍梅，郭 群，付 杰. 艾葉油霧化吸入對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9(5)：15-18.

[4]王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開(kāi)發(fā)技術(shù)與方法[M]，上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001:491-495.

[5]徐叔云，卞如濂，陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第三版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：905.

[6]申艷，李凱. 心理及社會(huì)因素對(duì)支氣管哮喘影響的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2013，19(15)：2784-2787.

StudyontheEffectofvolatileoilfromArtemisiaargyionBronchialAsthma

WAN Jun-mei GUO Qun

Biological Engineering College，Hubei Province, Wuhan 430074,China

Objective To study on the effect of volatile oil from Artemisia argyi(VOFAA) on bronchial asthma. Methods The Guinea pigs were randomly divided into five groups：contro1，propranolol in vitro or isoprenaline in vivo，and VOFAA of high dose，VOFAA of moderate dose，VOFAA of low dose．Adopted the Guinea pig’s tracheal slice test in vitro and asthma test in vivo respectively to study the effect of VOFAA on bronchial asthma. Results VOFAA with all three doses showed the effect of the relaxation of the contractive tracheal slices in vitro，and the prolongation of the asthma delitescence in vivo. Conclusion VOFAA has positive effect on bronchial asthma.

volatile oil from Artemisia argyi ; Bronchial asthma

萬(wàn)軍梅(1969-)，女，湖北洪湖人，碩士，副教授，主要從事藥理學(xué)的教學(xué)與科研工作。E-mail: jmwan1028@163.com。

R285.6

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1007-8517(2014)09-0010-02

2014.03.08)