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不同甘草種質(zhì)材料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值研究

2014-09-10 02:23:46趙雅姣杜文華
草原與草坪 2014年2期
關(guān)鍵詞:木素粗脂肪異黃酮

趙雅姣,杜文華

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心,甘肅 蘭州 730070)

甘草(Glycyrrhiza)屬多年生草本豆科植物,生長(zhǎng)在向陽(yáng)干燥的鈣質(zhì)草原、河岸砂質(zhì)土地、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶等,主產(chǎn)區(qū)為內(nèi)蒙古、新疆、甘肅等省[1]。據(jù)中國(guó)藥典記載,烏拉爾甘草(G.uralensis)、脹果甘草(G.inflate)和光果甘草(G.glabra)的根或根莖是最常用的中藥之一[1]。除此之外,甘草種還有黃甘草(G.eurycarpa)、粗毛甘草(G.aspera)、云南甘草(G.yunnanensis)、刺果甘草(G.pallidiflora)和圓果甘草(G.squamunosa)等[2],均具有藥用價(jià)值。

目前,國(guó)內(nèi)外有關(guān)甘草營(yíng)養(yǎng)成分的研究較多,且主要集中在甘草莖葉上。張繼等[3]對(duì)烏拉爾甘草和光果甘草莖葉的營(yíng)養(yǎng)成分的研究表明:不同生育時(shí)期2個(gè)甘草種莖葉營(yíng)養(yǎng)成分不同,莖葉中蛋白質(zhì)、脂肪、糖含量較高,纖維素含量相對(duì)較低。甘草中必需氨基酸含量較高,幼苗期粗蛋白含量達(dá)20%以上,粗脂肪含量也高于一般豆科牧草[4]。由于甘草莖葉質(zhì)地柔軟,較易被牲畜利用,飼喂效果與紫花苜蓿相似,因此是一種優(yōu)良的豆科牧草,而且具有其他牧草所不具有的雙重作用[5],即甘草為一種香型中草藥,可增強(qiáng)家畜新陳代謝能力,提高其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收作用,并可以改變飼料口味,增強(qiáng)牲畜食欲。除此之外,黃酮類物質(zhì)是甘草中重要的生理活性物質(zhì)之一,主要存在于甘草根表皮以內(nèi)的部分,具有消炎、抗菌、抗變態(tài)等多種作用,在人體抗氧化、抗癌、防癌、防腫瘤以及保肝護(hù)肝等方面有明顯作用[6-10]。其中異黃酮還具有調(diào)節(jié)激素平衡,改善骨質(zhì)疏松,婦女更年期綜合癥等作用[11-13],是一種極具開(kāi)發(fā)前景的藥用植物。我國(guó)甘草資源豐富,除了野生資源外,目前還有大面積的人工栽培。因此,開(kāi)展甘草的綜合利用,研究前景十分可觀[3]。

甘草的化學(xué)成分比較復(fù)雜,而且由于材料和產(chǎn)地不同,其化學(xué)成分差異較大。試驗(yàn)以不同甘草種質(zhì)材料為研究對(duì)象,對(duì)其莖葉營(yíng)養(yǎng)成分和地上、地下部所含異黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定,擬篩選出綜合價(jià)值較高的甘草種及不同甘草種的不同利用價(jià)值,為甘草育種和開(kāi)發(fā)利用提供一定參考。

1 材料和方法

1.1 供試材料

6個(gè)甘草種由甘肅省民樂(lè)縣化工廠提供,分別是烏拉爾甘草、光果甘草、脹果甘草、粗毛甘草、黃甘草、云南甘草,代號(hào)分別為1,2,3,4,5,6。6個(gè)甘草材料均為2012年6月(開(kāi)花期)采取,以1 m長(zhǎng)為一個(gè)樣段,將莖葉刈割、捆扎、晾曬至全干;沿地面兩側(cè)深挖其根,除去莖基、枝叉、須根等,截成適當(dāng)長(zhǎng)短的段,捆扎,再曬至全干后切至小片;用粉草機(jī)將甘草的莖葉及根粉成粉末狀進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。

表1 供試材料及來(lái)源Table 1 Tested licorice species and its resources

1.2 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.2.1 異黃酮含量提取 準(zhǔn)確稱取6種甘草根、莖葉風(fēng)干草樣各2 g。用濾紙包好,置于索氏抽提儀中,加入150 mL 70%乙醇,在90~95 ℃恒溫水浴中回流提取3次,每次3 h,提取液用70%乙醇定容至50 mL;準(zhǔn)確吸取甘草異黃酮提取液各5 mL,放入10 mL密封水解管中,加37%HCL 2 mL,在83 ℃恒溫水浴中水解2 h,取出,冷卻至室溫,并用70%乙醇定容至10 mL。水解液經(jīng)過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后,進(jìn)行液相色譜分析,每進(jìn)5針樣品提取液進(jìn)1針異黃酮單體混標(biāo)溶液;精密量取適量大豆黃素、染料木素、刺芒柄花素、鷹嘴豆芽素A對(duì)照品,加70%的乙醇溶解,制成異黃酮單體含量均為2.5 g/mL的對(duì)照品混標(biāo)溶液;檢測(cè)器為Agilent 1100可變波長(zhǎng)檢測(cè)器,watersC18色譜柱(4.6250 mm);柱溫25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm;流動(dòng)相乙腈水梯度洗脫,25 min內(nèi)乙腈由20%增加到70%;流速1 mL/min;進(jìn)樣量為10 L,每進(jìn)5針樣品提取液之后進(jìn)1針異黃酮單體混標(biāo)溶液[14]。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備,分別配制含各種單品濃度(表2)的標(biāo)準(zhǔn)溶液,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣20 μL,參照文獻(xiàn)[15]可知標(biāo)準(zhǔn)液HPLC圖譜中出峰順序?yàn)榇蠖裹S素、染料木素、刺芒柄花素、鷹嘴豆芽素A,測(cè)定并記錄5種標(biāo)準(zhǔn)液中各異黃酮單體的出峰時(shí)間以及對(duì)應(yīng)峰面積,以異黃酮單體濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備所需標(biāo)準(zhǔn)液濃度Table 2 Standard concentration solution for Standard curve preparation μg/mL

1.2.2 營(yíng)養(yǎng)成分 測(cè)定樣品的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、無(wú)氮浸出物等營(yíng)養(yǎng)成分,其中H2O(游離水)用常壓烘干法、CA用干灰法、CP用半微量凱氏定氮法、EE用索氏浸提法、CF用Van Soest法、NFE用差值法進(jìn)行測(cè)定[15-17]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel、SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同甘草種異黃酮含量比較

測(cè)定發(fā)現(xiàn),大豆黃素及刺芒柄花素出峰時(shí)間在圖譜上未出現(xiàn)明顯波峰,說(shuō)明甘草中無(wú)該異黃酮含量或該異黃酮含量較少(圖1)。通過(guò)Agilent 1100檢測(cè)器軟件計(jì)算出樣品種染料木素及鷹嘴豆芽素A的峰面積。

2.1.1 染料木素含量 6種甘草材料根部染料木素含量普遍高于莖葉含量(圖2)。不同甘草種根部染料木素含量差異顯著(P<0.05),1號(hào)云南甘草染料木素含量最高,為301.07 μg/g,4號(hào)粗毛甘草含量最低,為76.69 μg/g。莖葉中染料木素含量差異亦顯著,6號(hào)含量最高,為125.37 μg/g,顯著高于其他品種,4號(hào)品種含量最低,為58.55 μg/g。

2.1.2 鷹嘴豆芽素含量 6種甘草根部鷹嘴豆芽素A含量普遍高于莖葉含量(圖3)。不同甘草種根部鷹嘴豆芽素A含量差異顯著(P<0.05),3號(hào)含量最高,為392.54 μg/g,其次,4號(hào)為626.50 μg/g,5號(hào)最低;莖葉中鷹嘴豆芽素A含量差異顯著,6號(hào)含量最高,為125.37 μg/g,顯著高于其他品種,2號(hào)含量最低,為100.95 μg/g。

圖2 根、莖葉染料木素含量Fig.2 The comparison with dye lignin content in root and stem leaf

圖3 根、莖葉鷹嘴豆芽素A含量Fig.3 The comparison with abiochanin content in root and stem leaf

2.1.3 總異黃酮含量 6個(gè)品種甘草根中總異黃酮含量均高于莖葉(圖4)。根中3號(hào)總異黃酮含量最高,為891.8 μg/g,其次,4號(hào)、6號(hào)、1號(hào)、2號(hào),5號(hào)含量最低;莖葉中,6號(hào)總異黃酮含量最高,為342.35 μg/g,其次,3號(hào)、1號(hào)、5號(hào)、4號(hào),2號(hào)含量最低。

圖4 根、莖葉總異黃酮含量比較Fig.4 The comparison on the total Isoflavone content in root and stem leaf

2.2 不同甘草種莖葉營(yíng)養(yǎng)成分

6號(hào)的粗蛋白含量最高,2號(hào),3號(hào)的粗蛋白含量最低(表3);6號(hào)的粗纖維含量顯著低于其他5個(gè)品種(P<0.05),且粗纖維含量無(wú)顯著差異;不同甘草種間水分含量差異顯著。5號(hào)水分含量最高,其次,6號(hào),3號(hào)水分含量最低。6號(hào)的粗脂肪含量最高,5號(hào),3號(hào)的粗脂肪含量最低。其中2號(hào)粗脂肪含量比3號(hào)高90.06%,且與其他種間粗脂肪含量差異顯著(P<0.05)。不同甘草材料粗灰分含量間有顯著差異(P<0.05),5號(hào)顯著高于其他種(P<0.05);無(wú)氮浸出物含量則3號(hào)顯著高于其他種(P<0.05)。

表3 6個(gè)甘草種質(zhì)材料的營(yíng)養(yǎng)成分Table 3 Nutrition values for different liquorice species %

注:同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示水平差異顯著(P<0.05)

2.3 綜合評(píng)價(jià)

選取各參試指標(biāo)的最佳值構(gòu)成“標(biāo)準(zhǔn)甘草”[18-20],選取異黃酮、粗蛋白、粗脂肪、無(wú)氮浸出物含量的最高值和粗纖維含量、灰分含量的最低值,構(gòu)成“標(biāo)準(zhǔn)甘草”,是一個(gè)理想的組合。根據(jù)以上指標(biāo)在綜合評(píng)價(jià)中的相對(duì)重要程度采用賦值法分別賦值(Wk)。標(biāo)準(zhǔn)甘草的構(gòu)建及各營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的權(quán)重(表4)。采用賦值法對(duì)參試品種各指標(biāo)賦值處理,對(duì)各性狀賦予合適的權(quán)重,總和為1。

由于各性狀量綱不同,因此,需要用初值法對(duì)各性狀原始數(shù)據(jù)進(jìn)行無(wú)量綱化處理[18],為使各參試品種的最優(yōu)性狀均以最大值表示,粗纖維及灰分無(wú)量綱化時(shí)結(jié)果以其倒數(shù)表示。各參試材料主要性狀值經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)量綱化處理后,無(wú)量綱化數(shù)值越高,說(shuō)明其越接近標(biāo)準(zhǔn)甘草(表5)。

根據(jù)公式標(biāo)準(zhǔn),甘草營(yíng)養(yǎng)價(jià)值=粗蛋白×18%+粗脂肪×16%-粗纖維×2%+灰分×4%+水分×16%+無(wú)氮浸出物×12%+根的異黃酮×18%+莖的異黃酮×18%。通過(guò)權(quán)重比較,6個(gè)甘草材料的綜合排名為6號(hào)>3號(hào)>4號(hào)>2號(hào)>5號(hào)(表6)。

表6 6個(gè)甘草材料綜合評(píng)價(jià)及排序Table 6 Establishment value and sorting of 6 licorice species

3 討論與結(jié)論

目前,異黃酮粗提取方法主要為索氏抽提法,采用乙醇做提取溶劑。粗提物經(jīng)乙酸乙酯萃取后,再經(jīng)大孔樹(shù)脂分離純化,最終可得純度在50%的異黃酮產(chǎn)品。單以分析樣品中異黃酮單體含量為目的,可省掉粗提物的進(jìn)一步提純,直接將粗提樣水解后進(jìn)行HPLC分析即可。由于儀器存在時(shí)間差異,故采用每進(jìn)4針樣品溶液之后進(jìn)一針異黃酮混標(biāo)溶液,可以有效的避免儀器由于時(shí)間差異所產(chǎn)生的異黃酮單體隨樣品以及時(shí)間變化出峰位置所產(chǎn)生的偏移,有助于確定正確的出峰位置,記錄峰面積。植物體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物含量的多少取決于植物本身積累這種次生代謝物質(zhì)的能力[21-23],說(shuō)明甘草積累鷹嘴豆芽素A的能力最強(qiáng),其次,染料木素,大豆黃素與刺芒柄花素的積累能力非常弱。通過(guò)對(duì)6個(gè)甘草材料根、莖葉中異黃酮含量的比較試驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)脹果甘草根中異黃酮含量最高,烏拉爾甘草莖葉中異黃酮含量較高,所以3號(hào)脹果甘草的根和6號(hào)烏拉爾甘草的莖葉用于提取異黃酮更具利用價(jià)值。5號(hào)黃甘草根、莖葉總的異黃酮含量最高。所有甘草品種根中所含異黃酮均高于莖葉,因此,從提取異黃酮的角度看,地下部更具有利用價(jià)值。與梁冰等[24]結(jié)果相同,不同甘草材料,不同部位異黃酮含量均不同。張德良等[25]對(duì)大豆蛋白復(fù)合纖維中異黃酮進(jìn)行提取,得到大豆異黃酮總量為1 173 μg/g,宋超等[12]人得到紅三葉異黃酮含量為232.95 μg/g,而此次試驗(yàn)甘草平均總異黃酮含量為1 234.05 μg/g,顯著高于其他豆科牧草,因此,甘草異黃酮具有更好的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

選取粗蛋白﹑粗脂肪﹑粗纖維﹑水分﹑灰分﹑無(wú)氮浸出物6個(gè)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行比較。從不同角度分析,3號(hào)脹果甘草的無(wú)氮浸出物含量高于其他品種,6號(hào)烏拉爾甘草的粗蛋白含量和粗脂肪含量顯著高于其他品種。5號(hào)黃甘草與2號(hào)光果甘草的綜合營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高。4號(hào)粗毛甘草的各個(gè)指標(biāo)均處于中等水平。甘草營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與其他幾種主要豆科牧草相比,其粗蛋白含量為17.36%,與紫花苜蓿和檸條錦雞兒相近,比紅豆草略少;其粗脂肪含量均比紫花苜蓿、紅豆草和擰條錦雞兒高,而粗纖維含量相應(yīng)小于其他牧草[3]。

為了避免因單一性狀優(yōu)良進(jìn)行選育造成優(yōu)異品種或性狀丟失,應(yīng)根據(jù)育種目的,對(duì)品種進(jìn)行合理評(píng)價(jià),選擇自己需要的品種[26]。由于甘草的研究開(kāi)發(fā)利用價(jià)值主要在于飼用與醫(yī)藥方面,因此,在采用賦值法給各參試指標(biāo)賦值時(shí),粗蛋白、粗脂肪﹑水分﹑無(wú)氮浸出物與異黃酮賦予較高值,對(duì)于篩選營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的品種具有指導(dǎo)意義。閻旭東等[26]對(duì)6個(gè)苜蓿品種的生長(zhǎng)特性進(jìn)行了評(píng)價(jià),但單項(xiàng)指標(biāo)最突出的品種并不意味著就是最佳品種[27]。應(yīng)用權(quán)重系數(shù)法進(jìn)行綜合分析,結(jié)合產(chǎn)量和質(zhì)量指標(biāo)對(duì)甘草進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),可以篩選出綜合性狀較優(yōu)的甘草品種。通過(guò)對(duì)6個(gè)甘草種質(zhì)材料營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)綜合營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)為烏拉爾甘草>脹果甘草>粗毛甘草>云南甘草>光果甘草>黃甘草。說(shuō)明烏拉爾甘草的綜合營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高,是研究開(kāi)發(fā)利用的首選甘草品種。

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