苗晉玲，張國鑫，張中原，冀來喜

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，天津300193）

高脂血癥（hyperlipidemia）是由于脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常使血漿中一種或幾種脂質(zhì)高于正常的一類常見疾病，是人體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂的結(jié)果，是動脈粥樣硬化和脂肪肝發(fā)病的重要危險因素［1］。脂肪性肝病是因甘油三酯（TG）在肝臟過度沉積而導(dǎo)致的臨床病理綜合征。隨著人們生活方式及飲食習(xí)慣的變化，高脂血癥并發(fā)脂肪肝的發(fā)病率不斷升高，且發(fā)病年齡日趨提前［2］。據(jù)統(tǒng)計，我國高脂血癥的發(fā)病率為18.6%，全國血脂異常人數(shù)約1.6億，脂肪肝平均發(fā)病率25%，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。因此，防治高脂血癥合并脂肪肝有著重要的臨床價值。針灸作為一種有效的治療方法，以操作簡便，療效確切，毒副作用少而更具獨特的優(yōu)勢。

通過觀察高脂血癥并發(fā)脂肪肝大鼠針刺“豐隆、中脘、曲池”穴不同組合后肝臟的形態(tài)學(xué)變化，進而探討最佳腧穴組方治療高脂血癥并發(fā)脂肪肝的療效及初步機制，以便為臨床提供更多的理論和實驗指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物與分組 雄性SD大鼠90只（購于北京海淀興旺實驗動物養(yǎng)殖場），體重（70±10）g，普通飼料喂養(yǎng)1 w后，將大鼠隨機分為空白組10只（A組），模型組80只，空白組喂養(yǎng)普通飼料，模型組喂養(yǎng)高脂固體飼料（2.0%膽固醇，10.0%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，基礎(chǔ)飼料87.8%）復(fù)制高脂血癥脂肪肝大鼠模型。自由喂養(yǎng)，飲水不限。動物房溫度和濕度分別維持在23℃和60%左右。飼養(yǎng)3 w后，隔夜禁食，所有大鼠眼眶靜脈采血，檢測膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶值，觀察血脂、肝功指標(biāo)是否升高。造模成功后，從第4周將模型組大鼠隨機分為模型對照組 10只（B組），曲池組（C組），中脘組（D組），豐隆組（E組），曲池+中脘組（F組），曲池+豐隆組（G組），中脘+豐隆組（H組），曲池+中脘+豐隆組（I組），每組10只。

1.1.2 試劑與儀器 TG、TC試劑盒，AST、ALT試劑盒（太原奧盛源科貿(mào)有限公司）；電子秤（太原市小店區(qū)體壇生化試劑商行），毫針（漢醫(yī)無菌針），電針儀、離心機、生物顯微鏡等設(shè)備以及生化分析、圖像分析均由山西醫(yī)科大學(xué)提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 針刺方法 造模成功后，模型對照組大鼠抓取固定，不做針刺。電針治療組大鼠均固定于大鼠固定器中，采用32號1寸漢醫(yī)一次性針灸針，取穴參照華興邦動物穴位圖譜，分別取“曲池”、“豐隆”、“中脘”，針刺后接通電針治療儀，避免同一條導(dǎo)線分接身體兩側(cè)。頻率10 Hz，強度1.5 V連續(xù)波刺激，以肢體輕微抖動為宜。1次/d，20 min/次，連續(xù)治療4 w。1.2.2 觀察指標(biāo) 治療期間，每日觀察并記錄各組大鼠的整體精神狀態(tài)、活動度、毛色、糞便等變化。實驗7 w后，禁食12 h，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，分離血清，分別檢測甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），由山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科完成。取肝臟左葉，肉眼觀察各組肝臟顏色、體積、包膜及切面有無異常變化。截取肝臟左葉1 cm×1 cm×1 cm組織1塊，置于10%福爾馬林固定，逐級酒精脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色，光鏡觀察肝臟細胞變化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

實驗過程中，與正常組大鼠相比，模型組大鼠毛色由亮白色變?yōu)槿榘咨?，毛發(fā)干，食量減少，大便減少，對外界刺激的反應(yīng)較遲鈍。

2.2 各組大鼠干預(yù)4 w后血脂比較

與A組比較，B組大鼠血清TC、TG、LDL-C明顯升高，HDL-C降低（P<0.01），說明造模成功，模型表現(xiàn)為高血脂狀態(tài)。與B組比較，除C組外其余各針刺組 TC均顯著降低（P<0.05，P<0.01）；I組 TG 明顯降低（P<0.05），其余針刺各組均有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；針刺各組HDL-C均顯著升高，LDL-C均明顯降低（P<0.05或P<0.01）。

TC、TG、LDL-C變化各針刺組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），針刺各組降低 TC、TG、LDL-C趨勢的效果為I>H>G>F>E>D>C；針刺各組HDL-C有遞增趨勢，但各組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），其增高HDL-C的效果為C

表1 各組大鼠干預(yù)4 w后血脂比較 （mmol/L，±s）

表1 各組大鼠干預(yù)4 w后血脂比較 （mmol/L，±s）

注：與 A 組比較，1）P<0.01；與 B 組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

組別 TC TG HDL-C LDL-C A 組 1.58±0.180.35±0.111.00±0.130.50±0.09 B 組 1.78±0.121） 0.57±0.211） 0.82±0.111） 0.79±0.111）C 組 1.67±0.130.43±0.140.41±0.112） 0.62±0.113）D 組 1.63±0.162） 0.42±0.080.44±0.082） 0.59±0.183）E 組 1.48±0.163） 0.42±0.070.46±0.142） 0.58±0.183）F 組 1.43±0.563） 0.41±0.090.49±0.112） 0.54±0.173）G 組 1.40±0.113） 0.41±0.110.49±0.932） 0.54±0.123）H 組 1.33±0.103） 0.38±0.120.53±0.122） 0.53±0.133）I 組 1.29±0.193） 0.37±0.092） 0.69±0.103） 0.47±0.153）

2.3 各組大鼠干預(yù)7 w后谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量的比較

結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠干預(yù)7 w后ALT、AST含量的比較 （mmol/L，±s）

表2 各組大鼠干預(yù)7 w后ALT、AST含量的比較 （mmol/L，±s）

注：與 B 組比較，1）P<0.05

組別 n ALT AST A 組 1058.51±5.411） 155.42±7.95 B 組 1073.82±12.32132.98±19.8 C 組 1077.30±8.15159.50±10.02 D 組 1077.45±5.80169.53±11.71 E 組 1069.21±9.60147.78±8.62 F 組 1075.31±10.07138.17±8.37 G 組 1075.86±10.32138.14±16.71 H 組 1075.61±6.68127.28±17.29 I 組 1065.32±13.121） 121.86±13.581）

由表2可見，食用高脂飼料后大鼠血清中的轉(zhuǎn)氨酶明顯升高，B組較A組ALT升高明顯，電針不同腧穴組合治療7 w后，I組ALT、AST較B組顯著下降（P<0.05）。

2.4 肝臟組織形態(tài)學(xué)變化

各大鼠肝臟組織解剖后，A組肝臟外觀呈暗紅色，質(zhì)地柔軟，彈性好。B組肝臟均不同程度發(fā)黃，有油膩感，體積增大，邊緣圓鈍，有的與周圍組織粘連（結(jié)果見圖1）。A組肝小葉結(jié)構(gòu)完整清晰，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝小葉肝細胞分界清晰，胞核圓，位于細胞中央，胞質(zhì)豐富，肝竇中枯否細胞清晰可見。B組肝索排列紊亂，肝細胞腫脹，呈中-重度脂肪變，均可見到小葉內(nèi)炎癥，炎癥細胞主要以單個核細胞為主，肝細胞出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，以大泡型脂肪滴為主，部分肝細胞核被脂肪滴擠壓而明顯偏位，未見纖維化。C～E組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰度差，肝索放射狀排列不齊，部分肝細胞體積增大，在中央靜脈及匯管區(qū)周邊脂變程度較輕，匯管區(qū)可見炎性細胞浸潤，偶見肝細胞壞死灶。F～H組肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整清晰，肝索放射狀排列基本整齊，偶見炎性細胞浸潤。I組肝小葉和肝竇結(jié)構(gòu)清晰，細胞內(nèi)脂滴數(shù)量減少，體積縮?。ńY(jié)果見圖2）。

圖1 肝臟肉眼觀察圖

圖2 各組大鼠肝臟光鏡觀察圖（HE染色，10×40）

3 討論

高脂血癥并發(fā)脂肪肝，是一種臨床常見的脂代謝紊亂及肝功異常的疾病。近年來，隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人們生活水平的提高及膳食結(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致體力活動減少，肥胖比例上升，高脂血癥并發(fā)脂肪肝發(fā)病率呈現(xiàn)出持續(xù)升高的趨勢。

目前國內(nèi)外研究肝臟代謝、脂質(zhì)代謝過程中多使用大鼠，它具有價格相對低、生產(chǎn)周期短、易于飼養(yǎng)管理、抵抗力強、實驗取材可滿足大量指標(biāo)的檢測等特點，被廣泛用于高脂血癥研究的模型動物［3］。高脂血癥脂肪肝大鼠的造模及治療方法很多，但其機理一致，均通過直接給動物喂飼含有高膽固醇、高甘油三酯的高脂食餌引起動物脂代謝紊亂，從而使動物血清中的轉(zhuǎn)氨酶和甘油三酯升高［4］。再通過針刺不同腧穴治療，如周利等［5］電針“豐隆”穴與普伐他汀鈉組比較，發(fā)現(xiàn)兩組均對高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C、NO以及CGRP具有較好的良性調(diào)節(jié)作用。謝凱等［6］將強刺激針刺與常規(guī)針刺治療進行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者均可降低血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG），升高HDL-C，其中以強刺激針法的總膽固醇水平與治療前相比較降幅最大。夏棣其等［7］認為電針具有保護肝細胞、減輕炎癥反應(yīng)、改善肝功能作用，血脂和血清酶學(xué)檢查結(jié)果與肝組織病理形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果并不完全一致，檢測肝組織活檢更有意義。雖然針刺治療均有效，但選穴配伍至今尚缺乏系統(tǒng)而完整的標(biāo)準(zhǔn)，客觀上多數(shù)處于自發(fā)狀態(tài)，難以得到科學(xué)實驗的證實，因此開展治療高脂血癥脂肪肝的腧穴配伍研究十分重要。

在本實驗設(shè)計中，我們采用小周齡大鼠喂養(yǎng)高脂固體飼料方法進行造模，理由如下：①生長環(huán)境因素：有著明確的遺傳背景優(yōu)點的SD大鼠與人接近，從周齡小的開始喂養(yǎng)高脂飼料更容易改變機體內(nèi)環(huán)境，誘發(fā)模型速度快；②體重、體長的變化：食用高脂飼料后，體重、體長呈上升趨勢；③模型的可操作性：喂養(yǎng)固體飼料方便，較接近于人類飲食方式。

本實驗在篩選文獻的基礎(chǔ)上，緊密結(jié)合臨床實際，選定使用頻次較高、理論記載完整的曲池、中脘、豐隆三穴，從一般情況、體重與對血液中各項指標(biāo)含量的測定、肝臟病理學(xué)變化，便于了解高脂飼料對肝臟功能的影響。造模成功，針刺治療4 w后，與模型組比較，針刺組TC、TG、LDL值均不同程度下降，HDL值升高，ALT、AST值下降。模型組肝臟有明顯病理學(xué)損傷，表現(xiàn)為輕至中度脂肪肝。三穴組治療效果較單穴、雙穴組顯著，肝小葉和肝竇結(jié)構(gòu)清晰，細胞內(nèi)脂滴數(shù)量減少，體積縮小。進一步驗證三穴組具有良性調(diào)節(jié)血脂、肝功及改善肝細胞結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢。

通過實驗證實，不同腧穴對高脂血癥脂肪性肝病大鼠肝臟均有明顯的保護作用，以“曲池”、“中脘”、“豐隆”三穴配伍療效最優(yōu)。篩選出針灸治療高脂血癥脂肪肝的最佳腧穴組方，為防治高脂血證脂肪肝提供客觀可靠的實驗依據(jù)。

［1］郭姣，樸勝華.從高脂血癥發(fā)病低齡化趨勢探討其中醫(yī)發(fā)病機制［J］.中醫(yī)藥信息，2008，25（6）：4-6.

［2］馬奎軍.中藥配合針刺豐隆穴治療高脂血癥［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2008，6（5）：476.

［3］Yanaqisawa M，Kurihara H，Kimura S，et a1.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells［J］.Nature，1988，322（6163）：411-415.

［4］Brown M S，Goldstin J L.A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis［J］.Science，1986，232（4746）：34.

［5］周利，萬文俊，劉靈光，等.電針"豐隆"穴對高脂血癥大鼠 NO、ET 及 CGRP 的影響［J］.中國針灸，2008，28（1）：57-60.

［6］謝凱，李海舟.強刺激針法對單純性肥胖大鼠脂代謝的調(diào)節(jié)作用［J］.上海針灸雜志，2010，29（2）：122-124.

［7］夏棣其，劉淑娟，楊欽河.電針豐隆及足三里穴對非酒精性脂肪性肝炎大鼠的干預(yù)效應(yīng)［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，47（11）：9483-9486.