尹翠翠，楊 勇，容 蓉

（山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南250355）

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是多種原發(fā)或繼發(fā)性腎臟疾病發(fā)展至晚期的共同歸宿，主要表現(xiàn)為腎功能的減退、代謝產(chǎn)物潴留、水電解質(zhì)及酸堿平衡失調(diào)，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康［1］。中醫(yī)治療本病總的原則是扶正祛邪，依據(jù)不同的發(fā)病階段及發(fā)病類(lèi)型分別采用補(bǔ)益腎元法、健脾補(bǔ)腎法、調(diào)理脾胃法及泄?jié)峤舛痉ǖ戎委煼椒ǎ?］。黃芪味甘性溫，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、提高機(jī)體免疫力的作用；大黃性寒味苦，具有苦寒降泄、祛濕熱排濁毒的作用。兩者藥性相反，但均在慢性腎功能衰竭的臨床治療中療效顯著，已得到廣泛應(yīng)用。本課題擬以血肌酐（Cr）、尿素氮（UREA）、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、鈣（Ca）、磷（P）等生化指標(biāo)及超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）等指標(biāo)為檢測(cè)依據(jù)，探討大黃、黃芪配伍后治療慢性腎功能衰竭的藥理學(xué)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar雄性大鼠，體重170 g～200 g，由山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字20001003；飲用水均為自來(lái)水，自由攝食及進(jìn)水。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 全自動(dòng)生化分析儀Beckman 700，723可見(jiàn)光分光光度儀，上海第三分析儀器廠；FJ-2021 γ放射免疫計(jì)數(shù)器，西安國(guó)營(yíng)二六二廠；GL20A全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)，湖南儀器儀表總廠離心機(jī)廠；LXJ-II離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠；電熱恒溫水浴箱，上海醫(yī)療器械七廠。

1.1.3 試劑與藥材 腺嘌呤，批號(hào)：000807，購(gòu)自上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司。尿素氮，批號(hào)：010101；肌酐，批號(hào)：010301；鈣，批號(hào)：000901，磷：批號(hào)：010101，均為北京中生生物工程高技術(shù)公司生化試劑盒。黃芪、大黃購(gòu)自建聯(lián)中藥店，經(jīng)本校中藥鑒定教研室鑒定符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)［3］。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 各實(shí)驗(yàn)組溶液的制備 黃芪大黃組：按照藥物比例黃芪∶大黃（3∶1）稱(chēng)取一定量藥物，加適量水浸泡30 min，水煎煮2次，合并濾液，水浴濃縮成每毫升制劑相當(dāng)于生藥1 g，置4℃冰箱備用。黃芪組：稱(chēng)取一定量的黃芪，制備方法同上。大黃組：稱(chēng)取一定量的大黃，制備方法同上。

1.2.2 分組及模型制備 大鼠固體飼料喂養(yǎng)2 d～3 d，所示正常生長(zhǎng)后隨機(jī)分為5組：分別為正常組、模型組、黃芪大黃組、大黃組、黃芪組。除正常組外，其他各組參考鄭平東［4］報(bào)道的方法，將3%的腺嘌呤10 mL/（kg·d）給大鼠灌胃，連續(xù)30 d。隨著灌胃日數(shù)的增加大鼠日益消瘦，模型組大鼠出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象，并出現(xiàn)多飲、多尿、體毛干枯不齊、精神萎靡、畏寒拱背現(xiàn)象即為造模成功的標(biāo)志。造模灌胃腺嘌呤后，間隔6 h，中藥干預(yù)組每天分別用不同的中藥水煎液灌胃4 g/kg體重，正常組和模型組灌胃等量的自來(lái)水。連續(xù)用藥5 w。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)5 w后各組大鼠肝素抗凝取血，置冷凍離心機(jī)中，3000 r/min離心10 min，取上清，-20℃保存待用。采用Beckman 700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定 UREA、Cr、鈣（Ca）、磷（P）；采用光化學(xué)擴(kuò)增法測(cè)定血漿中SOD的含量；采用TBA反應(yīng)比色法測(cè)定血漿中MDA的含量［5］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，F(xiàn)檢驗(yàn)（方差分析）進(jìn)行組間差異分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì) CRF 大鼠血漿中 UREA、Cr、CHOL、P、TG、Ca的影響

結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 對(duì)CRF大鼠 UREA、Cr的影響 （±s）

表1 對(duì)CRF大鼠 UREA、Cr的影響 （±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與黃芪組比較，2）P<0.05

組別nUREA（mmol/L）Cr（μmol/L）正常組 105.69±1.6081.42±7.11模型組 822.14±8.591）2）183.52±43.221）黃芪大黃組 820.85±7.062）153.38±41.65大黃組 724.09±3.022）148.88±46.89黃芪組 833.75±19.95209.88±99.69

表2 對(duì) CRF 大鼠 CHOL、TG、Ca、P 的影響 （±s）

表2 對(duì) CRF 大鼠 CHOL、TG、Ca、P 的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P<0.01

組別 n CHOL TG Ca（mmol/L）P（mmol/L）正常組 105.35±5.382.73±1.231.12±0.5611.35±2.581）模型組 87.68±4.483.51±1.231.06±0.4717.88±3.45黃芪大黃組 84.30±1.892.74±0.241.22±0.4711.69±2.081）大黃組 75.59±2.003.05±0.741.13±0.8111.75±3.501）黃芪組 84.52±1.692.65±0.210.78±0.1312.07±3.501）

由表1、表2可以看出，與正常組比較，模型組血漿中 UREA、Cr、P 明顯升高（P<0.01），說(shuō)明造模成功；黃芪大黃組、大黃組、黃芪組大鼠血漿的P水平與模型組相比則顯著降低（P<0.01）；黃芪大黃組與模型組相比有降低 UREA、Cr、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）的趨勢(shì)；與模型組相比，黃芪大黃組有升高血鈣的趨勢(shì)。

2.2 對(duì)大鼠血漿中SOD、LPO的影響

結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)CRF大鼠血漿SOD、LPO的影響 （±s）

表3 對(duì)CRF大鼠血漿SOD、LPO的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P<0.01

組別 n SOD（μg/mL）LPO（mmol/L）正常組 1085.02±10.764.54±0.781）模型組 877.22±9.248.72±0.50黃芪大黃組 877.45±19.434.48±1.301）大黃組 778.65±22.034.73±1.361）黃芪組 881.76±6.864.32±2.391）

由表3可見(jiàn)，SOD含量各組間相比，差異雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但與正常組比較，模型組SOD含量有降低的趨勢(shì)；與模型組相比，黃芪組SOD含量有升高的趨勢(shì)，而黃芪大黃組、大黃組變化不明顯。血漿LPO含量，模型組較正常組顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，黃芪大黃組、大黃組、黃芪組都能明顯地降低大鼠血漿中LPO含量（P<0.01）。

3 討 論

CRF是各種原因引起的腎臟疾病持續(xù)進(jìn)展的最終結(jié)局，是一種進(jìn)行性的、不可逆的臨床綜合征，其臨床癥狀復(fù)雜，死亡率高［6］。中醫(yī)學(xué)對(duì)慢性腎功能衰竭的認(rèn)識(shí)自《內(nèi)經(jīng)》時(shí)期開(kāi)始，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展，目前對(duì)此病的治療已有很大突破。研究多認(rèn)為此病主要與脾腎虛損有關(guān)，誘因?yàn)橥庑爸绿搫冢静C(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，正虛則包括氣血陰陽(yáng)的虛損［7］，邪實(shí)為濕濁邪毒壅阻。因此臨床的基本治療原則是扶正祛邪。

大黃性寒味苦，入脾、胃、大腸、心包、肝經(jīng)，具有清熱瀉火、涼血祛瘀、解毒功效，其臨床應(yīng)用廣泛，除傳統(tǒng)的瀉下作用外，其臨床應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展到消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等方面［8］。氮代謝紊亂是CRF患者的突出表現(xiàn)，大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究均證明，大黃具有改善氮代謝的作用［9］。研究報(bào)道，大黃對(duì)腎臟代償性增生的保護(hù)作用是通過(guò)降低CRF大鼠血清中肌酐、尿素氮水平，改善腎性貧血癥狀，調(diào)整鈣、磷、鎂等電解質(zhì)代謝紊亂，糾正酸中毒，改善機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的紊亂狀態(tài)等途徑完成［6］。黃芪味甘性溫，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，強(qiáng)心降壓、降血糖、利尿、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、抗病毒、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。黃芪對(duì)缺血性腎臟有保護(hù)作用［10-11］，通過(guò)抗氧化、清除自由基、促進(jìn)細(xì)胞代謝、利尿消腫、減少尿白蛋白排泄、促肝臟合成白蛋白、降脂、調(diào)節(jié)免疫、降血壓等作用，保護(hù)腎臟細(xì)胞免受傷害。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪大黃組與模型組相比有降低尿素氮、肌酐代謝產(chǎn)物含量的趨勢(shì)，且作用強(qiáng)度優(yōu)于黃芪組。對(duì)于膽固醇、甘油三酯，黃芪大黃組與模型組相比，都有降低的趨勢(shì)，其作用強(qiáng)度優(yōu)于大黃組；對(duì)于鈣，黃芪大黃組與模型組相比，有升高的趨勢(shì)，且作用強(qiáng)度優(yōu)于大黃組和黃芪組，表現(xiàn)出改善氮代謝作用，糾正鈣、磷、鎂等電解質(zhì)代謝紊亂，糾正酸中毒，改善機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的紊亂狀態(tài)，對(duì)腎臟代償性增生有一定的保護(hù)作用；黃芪大黃組、大黃組、黃芪組與模型組相比，超氧化物歧化酶含量有升高的趨勢(shì)，但黃芪大黃組、大黃組變化不明顯；三組血漿中LPO的含量顯著降低（P<0.01），表現(xiàn)出清除自由基作用，改善由于過(guò)多的自由基對(duì)腎功能造成的進(jìn)一步損害。總之，黃芪與大黃配伍、黃芪或大黃單用均可通過(guò)不同的作用途徑起到改善CRF的作用，黃芪與大黃配伍后總體作用效果強(qiáng)于單味藥。綜合評(píng)價(jià)認(rèn)為，大黃、黃芪配伍后相互促進(jìn)、協(xié)同起效，表現(xiàn)出較強(qiáng)的藥理活性，對(duì)CRF有較好的治療效果。

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