秦振發(fā)

摘 要 通過水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量檢測方法入手，探索水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量的藥物殘留液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測技術(shù)。

關(guān)鍵詞 水產(chǎn)品；泰樂菌素；殘留量；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

中圖分類號：TS254.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：

水產(chǎn)品藥物殘留對人們健康的危害已經(jīng)成為當(dāng)今食品安全的重要因素之一。由此，主要論述水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量的檢測方法，泰樂菌素屬于16元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，近年來，泰樂菌素被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，但是，泰樂菌素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對人體有著潛在危害性。

1 試驗設(shè)計及材料

1.1 泰樂菌素的作用

泰樂菌素是一種促進生物生長的化學(xué)藥品，呈白色或暗黃色粉末狀，易溶于水，常被用于治療藥物使用。另外，它有很好的吸收和排泄作用，能快速促進各類微生物的生長?，F(xiàn)在，有很多水產(chǎn)品養(yǎng)殖戶用泰樂菌素來防治魚病、促進魚體生長。

泰樂菌素用于水產(chǎn)品中，的確有很好的防病害及促生長作用，但如果在水產(chǎn)品中大量使用泰樂菌素，會有大量的藥物殘留在水產(chǎn)品中，對人體有一定的危害。近年來，食品安全問題突出，對水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量檢測方法的研究也在不斷加強。

1.2 使用的主要儀器設(shè)備

色譜柱：Hypersil GOLD 100mm*2.1mm粒徑3um；液相色譜儀：Themo scientific 1250高壓液相色譜。質(zhì)譜儀：Themo scientific TSQ Quantum Access MAX

2 水產(chǎn)品中泰樂菌素的預(yù)處理

預(yù)處理的具體方式是：稱取5 g水產(chǎn)品樣品放在50 mL的塑料離心管里，向離心管中加入20 mL的酸化乙腈；震蕩混勻，再用超聲波超聲提取5 min；4 000轉(zhuǎn)/min離心5 min，取上清液轉(zhuǎn)移至另一個離心管中，把樣品殘渣再加入15 mL的酸化乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液。

將上述提取液過預(yù)先用5 mL乙腈活化的中性氧化鋁柱，收集過柱后的提取液，提取液過柱后再用5 mL乙腈淋洗柱體，合并于梨形瓶中，加入20 mL異丙醇。在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入1 mL流動相，再加入2 mL的乙腈飽和正己烷，震蕩洗脫，再把洗脫液轉(zhuǎn)移到10 mL的離心管中，漩渦震蕩30 s，4 000 r/min離心5 min，取下層液過0.22 μm濾膜，供上機測定用。

3 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測泰樂菌素殘留量

3.1 提取劑及提取方式

為提高水產(chǎn)品中泰樂菌素的藥物殘留提出效果，這里采用酸化乙腈、乙腈與甲醇進行實驗研究，實驗具體方法是，把泰樂菌素添加到不含泰樂菌素的樣品中，在實驗過程中，通過外標(biāo)回收率大小來評價提取劑的提取效率。經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)酸化乙腈回收率均大于80%，所以，最終確定酸化乙腈為次檢測方法的最佳提取劑。

3.2 內(nèi)標(biāo)物的確定

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測法利用內(nèi)標(biāo)物對泰樂菌素做相關(guān)的定量判斷，以便達(dá)到更加準(zhǔn)確的檢測效果。因為羅紅霉素具有與泰樂菌素相近的性質(zhì)，所以，在此次檢測實驗中主要采用羅紅霉素為內(nèi)標(biāo)物，這樣會使泰樂菌素在水產(chǎn)品中的殘留量測量更加準(zhǔn)確。

3.3 色譜分離條件的研究

經(jīng)過對色譜柱和流動相優(yōu)化設(shè)計的試驗研究，選用合適的色柱分離羅紅霉素與泰樂菌素樣品，最佳的色譜分析條件為：色譜柱選用Hypersil GOLD 100 mm*2.1 mm粒徑

3 um；流動相選用乙腈與乙酸銨（5 mmol/L加0.1%甲酸）梯度洗脫，流速為0.20 mL/min，柱溫在35℃。

3.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

在質(zhì)譜中對質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，確定質(zhì)譜條件為：鞘氣30 psi，輔助氣壓力為5 psi、正離子噴霧電壓為3 500 V、碰撞氣壓為1.5 mTorr等。然后采用多反應(yīng)檢測模式，然后選擇好定性與定向離子。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

用50%乙腈、水配制成質(zhì)量濃度分別為1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0ng/mL、100.0 ng/mL、250.0 ng/mL、 500.0ng/mL泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)系列，此標(biāo)準(zhǔn)系列中內(nèi)標(biāo)濃度為50 ng/mL。以峰面積為縱坐標(biāo)，以泰樂菌素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明泰樂菌素在1.0～500 ng/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.997，回歸方程為Y=0.574 214x+0.0 158 579。

3.6 檢出限和限量值

此方法檢出限為0.5 μg/kg。加標(biāo)水平下回收率均大于70%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，此定量限的精密度和準(zhǔn)確度均滿足藥殘檢測的要求。

3.7 不同濃度的回收率

在鯽、對蝦和草魚3種樣品中的加標(biāo)試驗中，回收率在78.40%～110.20%的范圍，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.56%～8.78%的范圍，準(zhǔn)確度能滿足有關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)

要求。

液相色譜條件的開發(fā)需要按照專屬性高、準(zhǔn)確度高和低成本為目標(biāo)，盡量在最短的時間內(nèi)得到最佳的峰型、與合適的分離度，是檢測效果達(dá)到最佳水平。目前，該研究方法的檢出限、準(zhǔn)確性及精密度都滿足各國對水產(chǎn)品中藥物殘留檢測的技術(shù)要求。

4 結(jié)語

總之，用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量的檢測方法，是目前較為常見的檢測方式之一。它操作簡單、靈敏度高、應(yīng)用性好，是水產(chǎn)品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留量檢測比較好的方法。

（責(zé)任編輯：劉昀）