杜喜忠　陳學(xué)鎮(zhèn)

摘要：2013年11月，某禽業(yè)公司“公司+農(nóng)戶”肉雞飼養(yǎng)模式有30%左右養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的快大型黃羽肉雞出現(xiàn)采食量下降、咳嗽和排糞異常、死亡率3%～5%。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室螢光RT-PCR檢測，4/6樣本H9亞型禽流感核酸呈陽性；雞胚尿囊液HI試驗(yàn)H9亞型禽流感抗體6.67log2；細(xì)菌生化試驗(yàn)符合大腸桿菌特性；藥敏試驗(yàn)表明對阿莫西林、氟苯尼考、新霉素、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氨芐青霉素耐藥，頭孢喹肟中度敏感；結(jié)合流行病學(xué)診斷判定為H9亞型禽流感與大腸桿菌混合感染

關(guān)鍵詞：肉雞；H9亞型禽流感；大腸桿菌；流行病學(xué)診斷；實(shí)驗(yàn)室診斷；混合感染

中圖分類號：S858.31

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1007-273X（2014）04-0013-02

自從1994年我國大陸首次從雞體內(nèi)分離出H9亞型禽流感病毒以來，該亞型病毒開始在我國雞群內(nèi)蔓延。由于H9亞型禽流感感染后引起雞的免疫應(yīng)答水平降低，機(jī)體抵抗力下降，常并發(fā)或繼發(fā)細(xì)菌、病毒混合感染，臨床多見與大腸桿菌混合感染，引起發(fā)病率與致死率升高[1-3]?，F(xiàn)將某禽業(yè)公司的一例肉雞H9亞型禽流感與大腸桿菌混合感染的診斷情況介紹如下，供參考。

1發(fā)病情況

該公司為“公司+農(nóng)戶”飼養(yǎng)模式，所有肉雞都進(jìn)行新城疫、H9亞型禽流感、高致病性禽流感、雞傳染性支氣管炎疫苗。2013年11月有30%左右飼養(yǎng)戶飼養(yǎng)的快大型三黃雞前期出現(xiàn)輕微呼吸道癥狀，2～3 d后快速出現(xiàn)雞群采食量下降、咳嗽和排糞異常、死亡率3%～5%的癥狀。按慢呼與大腸桿菌混合感染治療，前期尚有一定效果，后前效果不明顯，且疫情有蔓延趨勢。

2臨床癥狀

病雞精神萎靡，消瘦，羽毛蓬亂，體溫升高，采食量下降；張口呼吸、咳嗽、怪叫等呼吸癥狀；腹部腫脹、重墜，病初糞便干細(xì)，后期糞便尿酸鹽增多，甚至可見排黃綠色稀便或水便；病死雞大多仰臥。

3病理剖檢

病死雞包心、包肝明顯；有嚴(yán)重的氣管和少數(shù)喉頭出血，氣管內(nèi)有黏液，部分氣管和支氣管交匯處有白色或黃色干酪樣栓塞物；肺充血、萎縮；氣囊上有白色至黃色纖維素狀滲出物或類似霉菌結(jié)節(jié)物；盲腸扁桃體及腸道淋巴結(jié)、胰腺出血或有白色點(diǎn)狀壞死，腺胃乳頭萎縮擠壓有膿狀物滲出。

4實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1病毒檢測

4.1.1螢光RT-PCR檢測采集6只病死雞的氣管、肺臟、脾臟，處理后分別按GB/T16550-2008、NY/T 772-2004、NY/T 772-2004、GB/T 23197-2008標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）、H9亞型禽流感病毒（H9-AIV）、雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）進(jìn)行熒光RT-PCR檢測。結(jié)果顯示，所有樣品均未檢出NDV、IBV核酸；2份樣品AIV疑似陽性，4份樣品H9-AIV核酸陽性。

4.1.2雞胚法檢測用分離的病毒接種10日齡SPF雞胚，0.2 mL/枚，各3枚。收集24 h后死亡的雞胚尿囊液，測定其血凝價(jià)。將病毒盲傳3代后，分別用H9-AI、H5-AI標(biāo)準(zhǔn)陽性血清在96孔V型血凝板上做HI試驗(yàn)。結(jié)果顯示，雞胚死亡時(shí)間分別為36、36、48 h，H9-AI的血凝效價(jià)為6log2、6log2、8log2；H5-AI的HI均為0。說明血凝性尿囊液病毒為禽流感H9亞型病毒。

4.2細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)

4.2.1細(xì)菌分離與鑒定采取病死雞的肝臟無菌分別接種到麥康凱培養(yǎng)基，經(jīng)過37 ℃培養(yǎng)24 h后，其中有4個(gè)培養(yǎng)基長出鮮桃紅色，菌落中心深紅色，米粒大小，圓形、扁平，邊緣整齊，表明光滑，濕潤的菌落。挑取菌落革蘭氏染色，鏡檢，可見G-中等桿菌，疑似大腸桿菌。挑取疑似菌落經(jīng)純化培養(yǎng)后進(jìn)一步做生化試驗(yàn)顯示，分離菌產(chǎn)生靛基質(zhì)，在檸檬酸鹽培養(yǎng)基不生長，能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、甘露醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，均符合大腸桿菌的生長特性。

4.2.2藥敏試驗(yàn)采用藥敏紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)測定，結(jié)果對頭孢噻吩鈉、丁胺卡那霉素敏感；對頭孢喹肟中度敏感；對阿莫西林、氟苯尼考、新霉素、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氨芐青霉素耐藥。

5小結(jié)與體會

（1）此次患病雞群雖然進(jìn)行了H9亞型禽流感疫苗免疫，但仍然感染H9亞型禽流感病毒，可能與該病毒持續(xù)變異[4]或免疫程序有關(guān)，在以后工作中要加強(qiáng)H9亞型禽流感流行病學(xué)監(jiān)測[5]，以便選取適宜疫苗和調(diào)整免疫程序，確保免疫防控效果。H9亞型禽流感仍是當(dāng)前危害肉雞的主要疫病之一，嚴(yán)格認(rèn)真地做好H9亞型禽流感疫苗的免疫，絕不能掉以輕心，特別是在禽流感的高發(fā)季節(jié)（冬春、秋冬交替季節(jié)）更要加強(qiáng)H9禽流感疫苗的免疫接種。

（2）由于抗菌藥在肉雞養(yǎng)殖中大量使用，大腸桿菌已對常規(guī)抗生素產(chǎn)生廣泛耐藥性和多重耐藥性[6-8]。因此，在生產(chǎn)上應(yīng)定期對致病性大腸桿菌菌株進(jìn)行抗生素敏感性監(jiān)測，通過藥敏試驗(yàn)選取有效藥物，以提高控制肉雞大腸桿菌病的防控效果。同時(shí)，還可考慮聯(lián)合用藥和交叉用藥，以及中草藥、增效劑的應(yīng)用，以消除雞大腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生。

（3）H9亞型禽流感與大腸桿菌有協(xié)同致病作用[9]，對商品肉雞危害巨大。禽流感病毒對黏膜有比較高的親嗜性，感染后嚴(yán)重?fù)p傷呼吸道及腸道黏膜，導(dǎo)致大腸桿菌病的發(fā)生。當(dāng)大腸桿菌感染后產(chǎn)生胞外酶，胞外酶可裂解弱毒，加強(qiáng)H9亞型禽流感的毒力，使雞群的發(fā)病加重，死亡率升高。

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